湖南fugene轉染試劑

來源: 發(fā)布時間:2024-10-24

在轉染實驗中使用對照對于確定所使用的轉染試劑和核酸的效果和效率至關重要。通常,質粒轉染和寡核苷酸轉染實驗都需要陽性對照、陰性對照、未轉染對照和模擬轉染對照。陽性對照是先前已被證明對轉染實驗產(chǎn)生已知影響的DNA或RNA,例如影響特定下游遺傳靶點的表達。在轉染工作的初始階段,需要一個陽性對照來建立一個優(yōu)化的轉染方案,之后,陽性對照可以作為參考,與實驗組進行比較。另一方面,陰性對照用于確認宿主細胞中預期的基因表達變化是否歸因于轉染而不是其他原因。在質粒DNA轉染中,陰性對照可以是缺乏DNA和轉染載體的反應,或者兩者都沒有,只有宿主細胞。在小RNA轉染中,陰性對照包含一個非同源序列,該序列通常是一個與靶序列具有相同核苷酸長度和組成但與任何已知哺乳動物基因不同源的打亂序列。未轉染的對照包括不含轉染試劑和核酸的細胞培養(yǎng),作為宿主細胞基本信息的對照,包括活力、表型,更重要的是,不受轉染影響的靶基因的基線表達水平。模擬轉染是指不含遺傳靶標或核酸的轉染,可以評估轉染試劑(如背景自熒光噪聲)產(chǎn)生的影響。在質粒轉染實驗中,推薦使用空質粒對照作為模擬轉染對照。轉染時推薦使用血清減少或無血清培養(yǎng)基包括陽離子轉染試劑,如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。湖南fugene轉染試劑

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基于非病毒的轉染方法可以進一步分為物理/機械方法和化學方法。常用的物理/機械轉染方法包括電穿孔、聲孔、磁***、基因顯微注射和激光照射。電穿孔是一種常用的物理轉染方法,利用電壓瞬間增加細胞膜通透性,允許外來核酸進入。這種方法通常用于轉染原代細胞、干細胞和B細胞系等難以轉染的細胞。然而,使用高壓可能導致細胞壞死、凋亡和長久性細胞損傷。超聲輔助轉染或超聲穿孔涉及使用微泡技術在細胞膜上制造孔,以減輕遺傳物質的轉移,而激光照射輔助轉染使用激光束在質膜上制造小孔,允許外來遺傳物質進入。與電穿孔一樣,超聲穿孔和激光輔助轉染也有破壞細胞膜和不可逆細胞死亡的風險。相比之下,磁輔助轉染,或使用磁力來幫助轉移外來遺傳物質的磁轉染,似乎對生物的破壞性較盡管效率較低,但對宿主細胞的破壞較小。另一方面,基因顯微注射涉及使用特定的針刺穿細胞,將所需的核酸注射到宿主細胞的細胞核中。然而,這項技術需要經(jīng)過專門訓練的人員或機器人系統(tǒng),他們可以高精度地執(zhí)行程序,以防止細胞損傷,因此在基因***等臨床應用中具有重要價值。與物理或機械轉染方法相比,化學轉染涉及使用專門設計的化學品或化合物來幫助將外源核酸轉移到宿主細胞中。湖南fugene轉染試劑在選擇合適的小RNA分子進行轉染相關功能分析之前,應先確定其實驗需要。

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PEI的分子量對細胞毒性和基因轉移活性有影響。由于PEI在細胞內(nèi)不可降解,所以分子量越高,細胞毒性越強。此外,具有較高分子量的PEI形成更穩(wěn)定的聚合物,使其更容易轉染,但更難在細胞內(nèi)釋放核酸。另一方面,PEI產(chǎn)生的復合物分子量降低,更難以轉染;但它更容易釋放核酸。因此,確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實現(xiàn)的。然而,一些改進使PEI在應用中更加先進。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯(lián),可***降低細胞毒性并保持較高的轉染效率。通過用丙烯酸乙酯修飾胺,伯胺的乙?;?,或在聚合物結構中引入帶負電荷的丙酸或琥珀酸基團,可以制備出各種無毒的分支PEI衍生物。由此產(chǎn)生的化學物質在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功。

除了mRNA疫苗,DNA疫苗也是不錯的選擇。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下,研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。他們改進了PG和PAMAM G4復合物的大小、運動性和表面電荷,然后在BALB/c小鼠中測試疫苗設計的免疫原性。根據(jù)研究結果,由于同時包裝在PG和PAMAM G4包膜中,DNA疫苗的免疫原性增加。在給予PG包被的DNA疫苗復合物的小鼠中,觀察到**強的t細胞反應,并且這些反應明顯高于給予裸DNA組合和PAMAM 4G包被的DNA組合的動物組。基因是陽離子聚合物作為轉染劑的主要應用。

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脂質復合物又稱陽離子脂質-核酸復合物(CLNACs),是由非離子核酸與陽離子脂質體(CLs)表面結合,**終形成多層脂質-核酸復合物而形成的。帶負電荷的核酸被吸引到帶正電荷的囊泡表面,**初與停靠在陽離子囊泡表面的核酸分子形成復合物,然后發(fā)展到核酸分子持續(xù)粘在脂質分子上的階段,脂質雙分子層圍繞緊實的核脂質顆粒。復合物形態(tài)的這種異質性可能歸因于囊泡的脂質組成、復合物形成的方式、脂質:核酸比例、核酸結構的大小、試劑的批次差異以及用于處理和可視化這些復合物的技術。除了靜電吸引外,疏水相互作用被認為有助于脂質和核酸之間的復合物形成。因此,根據(jù)正電荷(陽離子脂質)與負電荷(核酸上的磷酸基)的電荷比,脂質體可能通過與細胞表面的蛋白聚糖基團等帶電殘基的靜電相互作用,或通過與質膜疏水區(qū)域的疏水相互作用進入細胞。在轉染實驗中使用對照對于確定所使用的轉染試劑和核酸的效果和效率至關重要。云南體內(nèi)轉染試劑

脂質復合物又稱陽離子脂質-核酸復合物(CLNACs)。湖南fugene轉染試劑

脂質復合物(CLNACs)通過網(wǎng)格蛋白參與的內(nèi)吞作用進入細胞,并被困在核內(nèi)小體中,從這些囊泡結構中釋放出來,進入核周區(qū)域,***進入細胞核。內(nèi)吞作用在一定程度上取決于脂質體載體的物理化學性質。Friend和同事描述了可能由脂質體與核膜融合而形成的囊泡和網(wǎng)狀核內(nèi)膜。**近有研究表明,很大一部分從核內(nèi)體釋放到細胞質質的質粒由于與細胞質中的大離子凝聚劑結合而失去活性。這可能解釋了脂質轉染所觀察到的低且可變的轉染率。雖然這些脂質載體從細胞外部到細胞核的路徑尚未完全確定,但核酸能夠產(chǎn)生其效果本身就是一項驚人的壯舉。至少對于質粒而言,較小的結構體比較大的質粒具有更高的轉染率。核酸外排,雖然不是常見的報道,但也被證明會發(fā)生。湖南fugene轉染試劑