在心血管組織工程中,構建具有功能的心血管組織需要多種細胞類型的參與,如內皮細胞、平滑肌細胞等,并且細胞之間的相互作用以及細胞與細胞外基質的關系至關重要。利用多重免疫熒光,我們可以用不同顏色標記內皮細胞、平滑肌細胞以及細胞外基質成分。例如,用綠色熒光標記內皮細胞的標志物,如血管內皮生長因子受體-2(VEGFR-2);紅色熒光標記平滑肌細胞的標志物,如α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA);藍色熒光標記細胞外基質中的膠原蛋白。這樣就能在構建的心血管組織模型中觀察到內皮細胞和平滑肌細胞的分布、排列情況,以及它們與細胞外基質的相互作用。在研究心血管組織工程植入體的整合過程中,多色免疫熒光同樣發(fā)揮著作用。我們...
在肝臟纖維化的研究中,多重免疫組化可用于標記肝星狀細胞的標志物,如 α - 平滑肌肌動蛋白(α - SMA),細胞外基質成分,如膠原蛋白 I 和 III,以及與纖維化相關的生長因子,如轉化生長因子 - β(TGF - β)。肝星狀細胞在肝臟纖維化過程中活化并轉化為肌成纖維細胞,大量合成細胞外基質。通過觀察這些標志物的變化,可以了解肝星狀細胞的活化程度、細胞外基質的沉積情況以及 TGF - β 在纖維化進程中的調控作用。例如,TGF - β 可以刺激肝星狀細胞表達 α - SMA,促進膠原蛋白的合成,通過多重免疫組化的研究有助于找到抑制肝臟纖維化的關鍵靶點。免疫熒光技術可以通過熒光信號顯示和檢查...
在***的研究中,血管壁內的炎癥反應是疾病發(fā)展的關鍵因素。利用多重免疫熒光,我們可以用不同顏色標記血管內皮細胞、平滑肌細胞、單核細胞-巨噬細胞以及細胞因子等。例如,用綠色熒光標記內皮細胞,紅色熒光標記平滑肌細胞,藍色熒光標記單核細胞-巨噬細胞,黃色熒光標記炎癥細胞因子如白細胞介素-6(IL-6)。這樣就能直觀地看到在***斑塊形成過程中,這些細胞的遷移、增殖和相互作用,以及炎癥因子的分泌情況。在心肌梗死的研究方面,多色免疫熒光有助于了解心肌梗死后的修復過程。我們可以用不同顏色標記心肌細胞、心臟成纖維細胞、新生血管內皮細胞以及與心肌修復相關的生長因子。通過觀察這些標記成分在心肌梗死區(qū)域及其周邊的...
免疫熒光為診斷***性疾病提供了新的視角,具有快速、準確的特點。在病毒***的診斷中,如流感病毒***。利用免疫熒光技術,將針對流感病毒特定抗原的熒光標記抗體與患者呼吸道樣本中的病毒抗原結合。在熒光顯微鏡下,如果存在病毒,就會顯示出特定的熒光信號。這種方法與傳統(tǒng)的病毒培養(yǎng)相比,**縮短了診斷時間,能夠及時為患者的***提供依據(jù)。在******的診斷方面,例如******。免疫熒光可以標記***表面的特異性抗原,在組織切片或者體液樣本中準確地檢測出***的存在。這有助于醫(yī)生快速確定***源,選擇合適的抗***藥物,提高***的針對性和有效性。在1941年,Coons初次成功地使用熒光素作為標記物...
免疫熒光技術是依據(jù)抗原抗體反應的基本原理來實施的,即先把已知的抗原或抗體標記上熒光素,從而制作成熒光抗體,接著再使用這種熒光抗體(或抗原)當作探針去檢測組織或細胞內相對應的抗原(或抗體)。在組織或細胞內所形成的抗原抗體復合物上含有被標記的熒光素,通過利用熒光顯微鏡來觀察標本,熒光素會在外來激發(fā)光的照射下而發(fā)出明亮的熒光(呈現(xiàn)出黃綠色或橘紅色),如此便能夠清晰地看到熒光所在的組織細胞,從而準確地確定抗原或抗體的性質、準確定位,并且還能夠借助定量技術來測定其含量。例如,在對某些復雜的生物樣本進行分析時,免疫熒光檢測可以利用其定量熒光信號的能力,準確地獲取樣本中特定抗原或抗體的含量信息,為深入研究提...
免疫熒光的注意事項中,對照實驗的設置尤為關鍵:其一,內源性組織背景對照,某些細胞和組織存在固有的生物學特性,其有可能會引發(fā)背景熒光,進而對實驗結果造成干擾,像色素脂褐質便是典型例子。所以,在進行一抗孵育之前,務必要對樣品展開細致觀察,以切實保障抗原自身不存在信號。比如,若沒有進行這樣的觀察和確認,可能會導致錯誤地將背景熒光當作是目標抗原的信號,從而得出不準確的結論。其二,陽性對照,采用被確認含有待測抗原的組織或細胞,與待測標本實施統(tǒng)一處理,其結果理應呈現(xiàn)陽性,如此便能夠證實待測抗原有一定的活性,同時也能表明實驗過程中所使用的試劑以及方法都是可靠的。比如說,如果陽性對照未能呈現(xiàn)陽性結果,那就需要...
以帕金森病為例,其主要病理特征是中腦黑質致密部的多巴胺能神經元變性死亡,以及α-突觸**白異常聚集形成路易小體。利用多色免疫熒光技術,我們可以用一種顏色標記α-突觸**白,用另一種顏色標記多巴胺能神經元的特異性標志物,如酪氨酸羥化酶。這樣就能在腦組織切片中清晰地觀察到α-突觸**白在多巴胺能神經元中的聚集情況,以及隨著疾病進展,神經元數(shù)量的減少和路易小體分布的變化。在亨廷頓病的研究中,多色免疫熒光同樣大有用途。亨廷頓病與亨廷頓蛋白(Htt)的異常擴展有關,我們可以用不同顏色分別標記異常擴展的Htt蛋白、神經元內的其他重要蛋白以及神經膠質細胞的標志物。通過這種方式,可以深入探究異常Htt蛋白對神...
在神經退行性疾病的研究中,以阿爾茨海默病為例,多重免疫組化可以同時標記 β - 淀粉樣蛋白(Aβ)、tau 蛋白和神經元特異性標志物,如神經元核抗原(NeuN)。Aβ 的沉積和 tau 蛋白的過度磷酸化是阿爾茨海默病的兩大病理特征。通過多重免疫組化,我們可以在大腦組織切片上清晰地看到 Aβ 斑塊和 tau 蛋白纏結與神經元的位置關系,了解它們是如何影響神經元的結構和功能的。同時,對比正常腦組織和患病腦組織中這些標志物的分布和數(shù)量差異,有助于深入探究阿爾茨海默病的發(fā)病機制。免疫熒光技術具有高靈敏度和高特異性,可以檢測非常低濃度的目標分子。PDX-1免疫在腎移植的研究中,多重免疫組化是評估移植腎狀...
在免疫系統(tǒng)中,免疫細胞之間存在著復雜的相互作用和功能分化。以T淋巴細胞為例,多重免疫熒光可以同時標記T細胞表面的多種標志物。比如,用綠色熒光標記CD4分子以區(qū)分輔助性T細胞,紅色熒光標記CD8分子識別細胞毒性T細胞,再用藍色熒光標記共刺激分子CD28。這樣一來,我們可以在免疫組織或細胞懸液中清晰地看到不同亞群的T細胞分布情況,以及它們在免疫應答過程中的相互關系。在研究免疫細胞的活化和分化過程中,多色免疫熒光同樣具有重要意義。當B淋巴細胞受到抗原刺激后,會經歷一系列復雜的活化、增殖和分化過程。我們可以用不同顏色的熒光標記B細胞活化過程中的關鍵分子,如用黃色熒光標記表面免疫球蛋白(sIg)的表達變...
多重免疫組化在**研究領域具有不可替代的重要性。**是一個復雜的細胞群體,包含多種細胞類型和生物分子。傳統(tǒng)的免疫組化只能檢測一種抗原,而多重免疫組化可以同時檢測多個生物標志物。在**的診斷方面,多重免疫組化能夠提供更***的信息。例如在乳腺*的診斷中,我們可以同時標記雌***受體(ER)、孕***受體(PR)、人表皮生長因子受體-2(HER-2)以及增殖相關的Ki-67蛋白。通過不同顏色或者標記物來區(qū)分這些分子的表達情況。如果ER和PR陽性,HER-2陰性,Ki-67低表達,那么這可能是一種***依賴性、增殖較慢的乳腺*類型,適合內分泌***。反之,如果HER-2陽性,可能就需要考慮靶向HER...
熒光免疫法按照反應體系以及定量方法的不同,還能夠進一步細分為若干不同的種類。與放射免疫法相比較,熒光免疫法具有明顯的優(yōu)勢,它不存在放射性污染的問題,而且大多數(shù)情況下操作簡便,更易于推廣應用。在國外生產的用于救治藥物監(jiān)測(TDM)的試劑盒中,有相當大的一部分就屬于這種類型,并且還有專門用于 TDM 熒光偏振免疫分析的自動分析儀被生產出來。不過,由于在一般熒光測定中存在著本底較高等相關問題,這使得免疫熒光技術在用于定量測定時面臨著一定的困難。為了解決這些問題,新發(fā)展出了幾種特殊的熒光免疫測定方法,它們如同酶免疫測定和放射免疫分析一樣,在臨床檢驗中得到了廣泛的應用。例如,在一些需要快速檢測和高特異性...
免疫熒光像是一位精細的畫家,能夠細致地描繪出細胞結構的每一個細節(jié)。在細胞器研究中,以線粒體為例。通過免疫熒光標記線粒體的特定蛋白,如細胞色素c氧化酶等,在顯微鏡下可以清晰地看到線粒體的形態(tài)、大小和分布。這不僅有助于研究線粒體本身的功能,如能量代謝,還能觀察線粒體在細胞生理和病理狀態(tài)下的變化。例如,在細胞凋亡過程中,線粒體的形態(tài)和膜電位會發(fā)生改變,免疫熒光可以實時監(jiān)測這些變化,為研究細胞凋亡機制提供直觀的證據(jù)。在細胞核結構研究方面,免疫熒光可以標記核孔蛋白、組蛋白等,從而展現(xiàn)出細胞核的核膜、染色質等結構。這對于理解基因表達調控、DNA復制等核內過程有著重要意義。免疫熒光技術可以用于研究疾病的發(fā)生...
細胞免疫熒光:細胞種板與細胞爬片制備:1) 細胞密度在90%-95%左右,用預熱胰酶消化細胞后重懸細胞于完全培養(yǎng)基中,充分吹打,使之成單細胞懸液,計數(shù)。2)取細胞培養(yǎng)12孔板,在每個孔放爬片的位置根據(jù)爬片的大小,先在每個孔里準備放爬片的位置滴幾滴培養(yǎng)基,然后將爬片置于液滴上,壓緊,使爬片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,防止加細胞懸液時爬片漂起,造成雙層細胞貼片。根據(jù)自己的需要選擇合適的細胞密度種入12孔板培養(yǎng)板內。3)24h或者48h后,根據(jù)細胞生長速度快慢,觀察判斷細胞密度,約90%時進行細胞免疫熒光。在實際工作中,熒光抗原技術應用較少,因此通常將其稱為熒光抗體技術或免疫熒光技術。MAP2...
免疫熒光在**研究中扮演著得力助手的角色。它可以揭示腫瘤細胞的多種特性,為**的診斷和***提供重要信息。在**診斷中,免疫熒光能夠區(qū)分腫瘤細胞和正常細胞。腫瘤細胞往往具有一些特異性的標志物,利用標記這些標志物的熒光抗體,在顯微鏡下腫瘤細胞會顯示出獨特的熒光信號。例如,在乳腺*研究中,通過免疫熒光標記雌***受體,就可以判斷腫瘤細胞是否表達該受體,這對于乳腺*的分型和***方案的選擇至關重要。在**轉移機制的研究中,免疫熒光可以用來追蹤腫瘤細胞的遷移路徑。標記腫瘤細胞表面的某些蛋白,觀察這些標記蛋白在體內的動態(tài)變化,了解腫瘤細胞是如何從原發(fā)部位侵入周圍組織,進而進入血管或淋巴管發(fā)生遠處轉移的,...
其他熒光物質:酶作用后產生熒光的物質某些化合物本身無熒光效應,一旦經酶作用便形成具有強熒光的物質。例如4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮,后者可發(fā)出熒光,激發(fā)光波長為360nm,發(fā)射光波長為450nm。其他如堿性酸酶的底物4-甲基傘酮磷酸鹽和辣根過氧化物酶的底物對羥基乙酸等。鑭系螯合物某些3價稀土鑭系元素如銪(Eu3)、鋱(Tb3)、鈰(Ce3)等的螯合物經激發(fā)后也可發(fā)射特征性的熒光,其中以Eu3應用較廣。Eu3螯合物的激發(fā)光波長范圍寬,發(fā)射光波長范圍窄,熒光衰變時間長,較適合用于分辨熒光免疫測定。熒光抗體法和熒光抗原法都屬于免疫熒光技術的范疇。CD86免疫熒...
免疫熒光在病理學中有著獨特的價值,為疾病的診斷和研究增添了新的維度。在腎臟病理學中,對于腎小球疾病的診斷,免疫熒光是一種重要的檢測手段。例如,在IgA腎病中,免疫熒光可以顯示IgA在腎小球系膜區(qū)的沉積情況。這種沉積模式是IgA腎病的重要病理特征,通過免疫熒光的精確檢測,可以準確診斷IgA腎病,并與其他腎小球疾病進行區(qū)分。在皮膚病理學方面,對于自身免疫性皮膚病,如天皰瘡的診斷,免疫熒光可以檢測皮膚組織中自身抗體與表皮細胞間物質的結合情況。通過觀察熒光標記的分布,可以判斷疾病的類型和嚴重程度,為制定治療方案提供依據(jù)。免疫熒光細胞化學技術用于顯示和檢查細胞或組織內的抗原或半抗原物質。Glucagon...
免疫熒光在**研究中扮演著得力助手的角色。它可以揭示腫瘤細胞的多種特性,為**的診斷和***提供重要信息。在**診斷中,免疫熒光能夠區(qū)分腫瘤細胞和正常細胞。腫瘤細胞往往具有一些特異性的標志物,利用標記這些標志物的熒光抗體,在顯微鏡下腫瘤細胞會顯示出獨特的熒光信號。例如,在乳腺*研究中,通過免疫熒光標記雌***受體,就可以判斷腫瘤細胞是否表達該受體,這對于乳腺*的分型和***方案的選擇至關重要。在**轉移機制的研究中,免疫熒光可以用來追蹤腫瘤細胞的遷移路徑。標記腫瘤細胞表面的某些蛋白,觀察這些標記蛋白在體內的動態(tài)變化,了解腫瘤細胞是如何從原發(fā)部位侵入周圍組織,進而進入血管或淋巴管發(fā)生遠處轉移的,...
在***的研究中,血管壁的炎癥反應和細胞成分的改變是疾病發(fā)展的關鍵因素。多重免疫組化可以同時標記血管內皮細胞的標志物,如血管內皮生長因子(VEGF),平滑肌細胞的標志物,如 α - 平滑肌肌動蛋白(α - SMA),以及炎癥細胞的標志物,如單核細胞趨化蛋白 - 1(MCP - 1)和白細胞介素 - 8(IL - 8)。通過觀察這些標志物在***斑塊中的分布,可以了解血管內皮細胞的功能狀態(tài)、平滑肌細胞的增殖和遷移情況,以及炎癥細胞是如何被趨化到病變部位并參與斑塊形成的。例如,MCP - 1 可以吸引單核細胞進入血管壁,在斑塊內分化為巨噬細胞,IL - 8 則進一步促進炎癥反應的發(fā)展。免疫熒光技術...
免疫熒光在神經退行性疾病研究中具有廣泛的應用,為解開這些疾病的謎團提供了重要手段。在阿爾茨海默病的研究中,免疫熒光可用于標記β-淀粉樣蛋白(Aβ)和tau蛋白。Aβ的沉積和tau蛋白的過度磷酸化是阿爾茨海默病的主要病理特征。通過免疫熒光,可以觀察到Aβ斑塊和tau蛋白纏結在大腦組織中的分布情況。這有助于研究人員深入了解阿爾茨海默病的發(fā)病機制,探索疾病的早期診斷方法,以及評估潛在***藥物對這些病理特征的影響。在帕金森病的研究中,免疫熒光可以標記α-突觸**白。α-突觸**白的聚集形成路易小體是帕金森病的重要病理標志。通過免疫熒光觀察α-突觸**白在神經元中的聚集情況,能夠研究帕金森病的神經元損...
免疫熒光在病理學中有著獨特的價值,為疾病的診斷和研究增添了新的維度。在腎臟病理學中,對于腎小球疾病的診斷,免疫熒光是一種重要的檢測手段。例如,在IgA腎病中,免疫熒光可以顯示IgA在腎小球系膜區(qū)的沉積情況。這種沉積模式是IgA腎病的重要病理特征,通過免疫熒光的精確檢測,可以準確診斷IgA腎病,并與其他腎小球疾病進行區(qū)分。在皮膚病理學方面,對于自身免疫性皮膚病,如天皰瘡的診斷,免疫熒光可以檢測皮膚組織中自身抗體與表皮細胞間物質的結合情況。通過觀察熒光標記的分布,可以判斷疾病的類型和嚴重程度,為制定治療方案提供依據(jù)。免疫熒光技術可以用于研究免疫系統(tǒng)的功能和異常。Glut1免疫檢測在自身免疫性甲狀腺...
在***的研究中,血管壁的炎癥反應和細胞成分的改變是疾病發(fā)展的關鍵因素。多重免疫組化可以同時標記血管內皮細胞的標志物,如血管內皮生長因子(VEGF),平滑肌細胞的標志物,如 α - 平滑肌肌動蛋白(α - SMA),以及炎癥細胞的標志物,如單核細胞趨化蛋白 - 1(MCP - 1)和白細胞介素 - 8(IL - 8)。通過觀察這些標志物在***斑塊中的分布,可以了解血管內皮細胞的功能狀態(tài)、平滑肌細胞的增殖和遷移情況,以及炎癥細胞是如何被趨化到病變部位并參與斑塊形成的。例如,MCP - 1 可以吸引單核細胞進入血管壁,在斑塊內分化為巨噬細胞,IL - 8 則進一步促進炎癥反應的發(fā)展。免疫熒光技術...
在***的研究中,血管壁的炎癥反應和細胞成分的改變是疾病發(fā)展的關鍵因素。多重免疫組化可以同時標記血管內皮細胞的標志物,如血管內皮生長因子(VEGF),平滑肌細胞的標志物,如 α - 平滑肌肌動蛋白(α - SMA),以及炎癥細胞的標志物,如單核細胞趨化蛋白 - 1(MCP - 1)和白細胞介素 - 8(IL - 8)。通過觀察這些標志物在***斑塊中的分布,可以了解血管內皮細胞的功能狀態(tài)、平滑肌細胞的增殖和遷移情況,以及炎癥細胞是如何被趨化到病變部位并參與斑塊形成的。例如,MCP - 1 可以吸引單核細胞進入血管壁,在斑塊內分化為巨噬細胞,IL - 8 則進一步促進炎癥反應的發(fā)展。免疫熒光技術...
在病毒性肝炎的研究中,多重免疫組化可以同時標記肝炎病毒的抗原,如乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒**抗原(HBcAg),以及肝臟內的免疫細胞標志物,如 CD8 + T 細胞、巨噬細胞標志物 CD68 和細胞因子如干擾素 - γ(IFN - γ)。HBsAg 和 HBcAg 在肝細胞中的分布反映了乙肝病毒的***狀態(tài),而免疫細胞和細胞因子則與機體對病毒的免疫反應密切相關。通過觀察這些標志物的關系,可以深入了解乙肝病毒在肝臟內的復制、傳播過程,以及機體免疫系統(tǒng)是如何對病毒***作出反應的。例如,如果發(fā)現(xiàn) HBcAg 主要位于肝細胞的細胞核內,且周圍有大量 CD8 + T 細胞浸潤,這可能表...
免疫熒光檢測對比于酶檢測存在著諸多明顯的優(yōu)勢。其中就包括定量熒光信號的優(yōu)異能力(這與采用基于酶的方法所進行的定性測定是截然相反的),其能夠以極高的精度對熒光信號進行量化分析,這種能力使得我們可以更加深入、細致且準確地了解和把握相關信息。還有復用能力,也就是說能夠將具有各異發(fā)射光譜的熒光染料巧妙地結合起來,以此來實現(xiàn)對多種不同蛋白質的同步檢測,這極大地拓展了檢測的廣度和深度,提升了檢測的效率和全面性。此外,熒光染料還具備極其出色的光穩(wěn)定性,這為檢測過程的順利進行以及結果的可靠性提供了有力的保障。免疫熒光技術可以用于研究病毒傳播和免疫應答。CD20免疫熒光試驗熒光素標記抗體的方法:方法及步驟:①抗...
免疫熒光的原理和類型:免疫熒光利用熒光分子或熒光團在一定波長(分子的吸收光譜)下吸收光子的特性,經過短暫的間隔(發(fā)射光譜)后以較高的波長發(fā)射光子,并伴隨能量損失。發(fā)射的熒光可通過顯微鏡觀察到。熒光團可以通過可見光或紫外光激發(fā)。具有高光穩(wěn)定性和熒光量子產率的熒光染料可在市場上購買,其激發(fā)較大值跨越從400到>700nm的波長范圍。它們不會損傷活細胞,可安全用于生物制劑。在進行免疫熒光檢測時,首先對細胞或組織進行固定和透化處理。進行免疫染色時,熒光團與目標抗原的抗體結合,然后使用成像顯微鏡觀察熒光信號。根據(jù)使用的抗體和所需的信號擴增,免疫熒光可分為直接和間接兩種類型。免疫熒光技術可以用于研究病毒傳...
免疫熒光在傳染病發(fā)病機制研究中發(fā)揮著重要的作用,為深入了解傳染病的發(fā)生、發(fā)展過程提供了重要依據(jù)。在細菌傳染病研究中,以結核桿菌***為例。免疫熒光可以標記結核桿菌在宿主細胞內的定位,以及結核桿菌***引起的宿主細胞免疫反應相關分子。通過觀察結核桿菌在巨噬細胞等細胞內的生存狀態(tài),如是否被吞噬體包裹、是否能夠逃逸溶酶體的殺傷等,以及宿主細胞內免疫分子如細胞因子、***肽等的表達和分布情況,可以深入研究結核桿菌的致病機制。這有助于開發(fā)新的抗結核藥物和疫苗。在病毒傳染病研究中,如**病毒(HIV)***。免疫熒光可用于標記HIV病毒在宿主細胞內的復制過程,包括病毒基因組的整合、病毒蛋白的合成等。同時,...
在神經系統(tǒng)疾病的研究和診斷中,免疫組化發(fā)揮著獨特的作用。神經系統(tǒng)結構復雜,細胞種類繁多,許多神經系統(tǒng)疾病的發(fā)病機制尚不明確。免疫組化技術為我們提供了一個探索神經系統(tǒng)微觀世界的有力工具。以阿爾茨海默病為例,其主要病理特征是大腦中β-淀粉樣蛋白(Aβ)的沉積和神經纖維纏結(NFTs)。免疫組化可以特異性地標記Aβ和NFTs中的tau蛋白,讓病理學家清晰地觀察到這些病理改變在大腦中的分布情況。這有助于我們深入理解阿爾茨海默病的發(fā)病過程,從細胞和分子水平探索疾病的起源。在神經系統(tǒng)**的診斷方面,免疫組化也有著重要意義。例如,通過檢測膠質纖維酸性蛋白(GFAP)可以確定**是否來源于神經膠質細胞,這對于...
免疫熒光在生物醫(yī)學研究中是不可或缺的助力工具,廣泛應用于各個領域。在藥物研發(fā)方面,免疫熒光可以用來檢測藥物對細胞的作用靶點。例如,在研發(fā)***藥物時,通過免疫熒光標記腫瘤細胞表面的藥物靶點蛋白,觀察藥物與靶點的結合情況以及對靶點功能的影響。這有助于評估藥物的有效性和特異性,為藥物的篩選和優(yōu)化提供依據(jù)。在干細胞研究中,免疫熒光可用于鑒定干細胞的特性。干細胞具有自我更新和分化的能力,通過標記干細胞特異性的標志物,如Oct-4、Nanog等,可以確定干細胞的純度和分化狀態(tài)。這對于干細胞***的研究和應用具有重要意義。免疫熒光技術利用熒光染料標記的抗體與目標分子結合,從而實現(xiàn)可視化檢測。Glut1免疫...
免疫熒光的制作:樣品準備(貼壁細胞、懸浮細胞以及組織等):對于貼壁細胞:先將潔凈的蓋玻片在70%乙醇中進行浸泡處理,然后用干凈無菌的鑷子放置到培養(yǎng)皿中,用無菌PBS洗去殘留的乙醇。待細胞接近長成單層后取出蓋玻片,操作小心,防止細胞脫片。對于懸浮細胞:有2種方法,①先在懸浮液中進行固定步驟,然后把細胞滴加在載玻片上,干燥后細胞會緊貼在載玻片上。②先在懸浮液中進行固定和染色步驟,離心洗脫,然后用移液管移至盒式玻片進行后續(xù)染色步驟。對于冷凍切片:切片放置在載玻片上后,可以直接進行固定等后續(xù)操作。對于石蠟切片:免疫熒光中石蠟切片較少,要先進行脫蠟和抗原修復處理。免疫熒光技術可以用于研究食品安全和生物安...
免疫熒光應用范圍:其應用范圍極其普遍,可以測定內分泌、蛋白質、細胞因子、細胞表面抗原、多肽、核酸、受體、神經遞質、肉瘤標志物、血藥濃度等各種生物活性物質。根據(jù)診斷類別,又可分為傳染性疾病、內分泌、藥物檢測、免疫學、血型鑒定等。免疫熒光實驗步驟:洗滌:PBS洗滌5min*3次。封閉:使用封閉液對樣本進行封閉,一般1h。加一抗:使用合適濃度的一抗與樣本4℃過夜。洗滌:PBS或PBST洗滌5min*3次。加二抗:使用間接法時需要加二抗處理,根據(jù)說明書使用合適的濃度,避光處理1h(后面步驟均需避光)。洗滌:PBS或PBST洗滌5min*3次。封片:滴一滴防淬滅劑,封片??闪⒓从^察后暫存4℃盡快觀察。免...