山東IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切

Genovis集團(tuán)由瑞典GenovisAB和美國全資子公司GenovisInc.組成。該公司在納斯達(dá)克上市。如需了解更多信息，請?jiān)L問投資者關(guān)系。Genovis的經(jīng)營理念是為生物制藥和研究行業(yè)的客戶提供工具，以促進(jìn)和節(jié)省開發(fā)新治療方法和診斷的時(shí)間。Genovis酶產(chǎn)品，稱為SmartEnzymes，被世界各地的科學(xué)家使用，創(chuàng)新的產(chǎn)品形式促進(jìn)了生物藥物的開發(fā)和質(zhì)量控制。通過在2020年收購QEDBioscience，產(chǎn)品組合已擴(kuò)大到包括用于研究、生物藥物開發(fā)和診斷檢測的抗體和試劑。在官網(wǎng)上閱讀有關(guān)QED的更多信息Genovis研發(fā)活動(dòng)的基石是客戶關(guān)系，使產(chǎn)品開發(fā)能夠滿足客戶需求。與專注于表征新酶、開發(fā)新工作流程和新靶點(diǎn)抗體的學(xué)術(shù)團(tuán)體的合作同樣有價(jià)值。LC-MS中級(jí)分析用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制藥。山東IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切

大多數(shù)zhiliao性抗體都攜帶人IgG1骨架，雙特異性和多特異性形式的開發(fā)正在迅速增加。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性，例如單價(jià)結(jié)合、二硫鍵擾亂和配對Fc糖基化。傳統(tǒng)方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化，這需要優(yōu)化以極大限度地減少過度消化并獲得足夠的產(chǎn)量。Genovis的FabDELLO與IdeS酶具有不同的特異性，它在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人IgG1，并產(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。為了證明FabDELLO的特異性活性，通過非還原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的選擇。所有底物均實(shí)現(xiàn)了完全消化，包括具有其他困難的LALA和LFLE突變的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精確和有效性能驗(yàn)證了其在生物制藥開發(fā)中的用途。福建FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)這就是為什么Fc/2和GLP-1肽都被檢測為幾種變體。

其他基于 IgG 的生物制藥需要仔細(xì)表征和監(jiān)測關(guān)鍵質(zhì)量屬性，例如氧化、糖基化和其他翻譯后修飾。與抗體的克隆選擇、工藝開發(fā)和穩(wěn)定性研究相關(guān)的大量樣品通常通過液相色譜質(zhì)譜 （LC-MS） 進(jìn)行分析。然而，在LC-MS之前進(jìn)行足夠規(guī)模的樣品制備通常具有挑戰(zhàn)性。為了解決樣品制備的挑戰(zhàn)，Genovis將半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR（IdeS）固定在磁性瓊脂糖珠上，現(xiàn)在稱為FabRICATOR MagIC。FabRICATOR固定在磁珠上，可同時(shí)快速自動(dòng)消化多種抗體，促進(jìn)中級(jí)表征工作流程。Genovis的FabRICATOR MagIC 如何以較少的用戶交互減少實(shí)驗(yàn)和操作時(shí)間，降低樣品處理錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)提高通量。

與肽圖譜相比，根據(jù)Genovis科學(xué)家的經(jīng)驗(yàn)，尤其是對于像抗體這樣的分子，許多人在常規(guī)實(shí)驗(yàn)中做了太多的肽圖譜，而中級(jí)水平（Middle-level）的方法可以很好地工作。中級(jí)方法（IdeS酶切抗體）需要更少的實(shí)際操作步驟和較少的示例處理，所有這些都意味著過程中出錯(cuò)的事情更少。我們的許多酶可以作為平臺(tái)方法，同樣的方法適用于絕大多數(shù)的抗體，這不是肽圖的情況下，可能需要優(yōu)化整個(gè)樣品制備，LC分離，質(zhì)譜設(shè)置和數(shù)據(jù)分析的每個(gè)不同的抗體分析。這些變化可能是很小的，但沒有一種適用于所有肽圖的方法。由于分析和數(shù)據(jù)分析的簡單性，中級(jí)方法非常適合自動(dòng)化和高通量的工作流程。肽圖當(dāng)然可以自動(dòng)用于樣品制備，但高通量肽圖生成大量數(shù)據(jù)，仍然需要徹底分析。事實(shí)上，肽圖譜是一個(gè)多步驟的過程，每一個(gè)步驟都可能破壞方法，并可能導(dǎo)致破壞蛋白質(zhì)的人工制品，很難交叉訓(xùn)練給非專業(yè)人員。中級(jí)水平的方法很容易交叉訓(xùn)練，我們的方法在質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室中被成功地使用。肽圖譜是一種用于修飾分析和氨基酸確認(rèn)的方法，但一旦完成了這一工作，我相信使用中級(jí)分析可以成功地更有效地完成抗體樣本的大部分工作。Genovis提供具有低水平內(nèi)du素的FabRICATOR （IdeS）凍干。

與IdeS不同，Romiplostim 由四個(gè)相同的血小板生成素 （TPO） 受體結(jié)合肽和一個(gè) Fc 片段組成，通過柔性聚甘氨酸序列連接在一起。與度拉糖肽類似，用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下過夜，或用 GlySERIAS 凍干 1 小時(shí)并在 37°C 下過夜消化該蛋白質(zhì)。 鏈間二硫鍵被還原，以便于通過反相LC-MS進(jìn)行以下分析。與度拉糖肽的觀察結(jié)果類似，用固定化酶消化產(chǎn)生均質(zhì)的 Fc/2，剩下一個(gè)連接子殘基，此處為甘氨酸殘基。這有助于識(shí)別專門位于Fc區(qū)域的修改。用凍干酶消化 1 小時(shí)得到 Fc/2，剩余 4 個(gè)甘氨酸殘基和少量的 Fc/2 仍與一個(gè) TPO 肽連接。另一方面，這使得研究 Fc/2 和第yi個(gè)肽之間的連接區(qū)域成為可能，而不會(huì)受到第二個(gè)肽的干擾。用 GlySERIAS 凍干液過夜消化產(chǎn)生 2 個(gè) Fc/2 變體，分別剩下 4 個(gè)和 1 個(gè)甘氨酸殘基。根據(jù)消化時(shí)間的不同，使用凍干產(chǎn)物釋放的肽以五或七種變體存在，接頭中殘留的甘氨酸殘基數(shù)量不同，而使用固定化產(chǎn)物釋放的肽以四種變體存在。Genovis已經(jīng)測試了 PBS 和 150 mM 醋酸銨，并且也適用于FabRICATOR HPLC。吉林GingisKHANIdeS蛋白酶

FabRICATOR（IdeS）不需要還原條件來獲得比較好的活性。山東IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切

樣品制備的條件可能會(huì)在樣品中誘發(fā)偽影，因此需要避免高溫和堿性pH值進(jìn)行質(zhì)譜分析。如果可能的話，避免多個(gè)步驟并在一鍋反應(yīng)中進(jìn)行消化和還原也可能是有益的。與IdeS不同，為了探索Genovis的GingisREX對離液劑和去液劑的穩(wěn)定性和耐受性，在一系列試劑中測試了酶活性，并使用底物測定進(jìn)行了評估。數(shù)據(jù)顯示，GingisREX在6M時(shí)耐受尿素，吐溫高達(dá)1%，但活性在0.1%時(shí)受到SDC的負(fù)面影響。該酶在 pH 值范圍為 5.0 至 9.0 時(shí)顯示出活性，在 pH 值為 6.5-8.0 之間。綜上所述，GingisREX可用于一鍋反應(yīng)，以同時(shí)消化和變性6M尿素。與Genovis的IdeS不同，雙特異性 T 細(xì)胞接合器 （BiTE） 分子是一種融合蛋白療法，其中兩個(gè) scFv 融合，形成一個(gè)雙特異性分子，其中一個(gè) scFv 靶向細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞，另一個(gè)靶向Ai癥抗原。該蛋白質(zhì)由四個(gè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域組成，兩個(gè) scFv 均由 VL 和 VH 區(qū)域組成，總共由三個(gè)柔性 GS 連接子連接。這種蛋白質(zhì)的大尺寸（54 kDa）可能對通過完整質(zhì)譜法進(jìn)行產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測構(gòu)成挑戰(zhàn)，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)MS儀器可能無法提供蛋白質(zhì)的單同位素分辨率。山東IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切