天津GlySERIASIdeS蛋白酶抗體酶切

與肽圖譜相比，根據(jù)Genovis科學(xué)家的經(jīng)驗(yàn)，尤其是對(duì)于像抗體這樣的分子，許多人在常規(guī)實(shí)驗(yàn)中做了太多的肽圖譜，而中級(jí)水平（Middle-level）的方法可以很好地工作。中級(jí)方法（IdeS酶切抗體）需要更少的實(shí)際操作步驟和較少的示例處理，所有這些都意味著過(guò)程中出錯(cuò)的事情更少。我們的許多酶可以作為平臺(tái)方法，同樣的方法適用于絕大多數(shù)的抗體，這不是肽圖的情況下，可能需要優(yōu)化整個(gè)樣品制備，LC分離，質(zhì)譜設(shè)置和數(shù)據(jù)分析的每個(gè)不同的抗體分析。這些變化可能是很小的，但沒(méi)有一種適用于所有肽圖的方法。由于分析和數(shù)據(jù)分析的簡(jiǎn)單性，中級(jí)方法非常適合自動(dòng)化和高通量的工作流程。肽圖當(dāng)然可以自動(dòng)用于樣品制備，但高通量肽圖生成大量數(shù)據(jù)，仍然需要徹底分析。事實(shí)上，肽圖譜是一個(gè)多步驟的過(guò)程，每一個(gè)步驟都可能破壞方法，并可能導(dǎo)致破壞蛋白質(zhì)的人工制品，很難交叉訓(xùn)練給非專業(yè)人員。中級(jí)水平的方法很容易交叉訓(xùn)練，我們的方法在質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室中被成功地使用。肽圖譜是一種用于修飾分析和氨基酸確認(rèn)的方法，但一旦完成了這一工作，我相信使用中級(jí)分析可以成功地更有效地完成抗體樣本的大部分工作。IgMBRAZOR酶能夠?qū)?fù)雜和高分子量的人 IgM 進(jìn)行中級(jí)分析，從而促進(jìn)疫苗診斷等過(guò)程中的IgM表征和質(zhì)量控制。天津GlySERIASIdeS蛋白酶抗體酶切

與IdeS不同，Genovis的IgMBRAZOR是一種獨(dú)特的IgM特異性蛋白酶，可在重鏈中CH2結(jié)構(gòu)域下方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人IgM，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段。該酶能夠?qū)?fù)雜和高分子量的人IgM進(jìn)行中級(jí)分析，從而促進(jìn)疫苗、zhiliao和診斷等過(guò)程中的IgM表征。獨(dú)特-可實(shí)現(xiàn)IgM的中級(jí)表征和質(zhì)量控制；快速–在30分鐘內(nèi)生成均勻的F（ab'）2和Fc片段；高度特異性–人IgM重鏈中的一個(gè)消化位點(diǎn)。IgMBRAZOR是一種獨(dú)特的IgM特異性酶，可在重鏈中CH2結(jié)構(gòu)域下方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人IgM，產(chǎn)生F（ab'）2和Fc片段。消化在30分鐘內(nèi)完成，并且由于酶的特異性，如果孵育時(shí)間延長(zhǎng)，則不存在過(guò)度消化的風(fēng)險(xiǎn)。該酶在pH值為5.5至9.0時(shí)具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可發(fā)揮活性。良好的活性是在37°C下，但也可以在室溫下使用增加孵育時(shí)間進(jìn)行消化。IgMBRAZOR在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為38kDa。湖南IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)Blinatumomab（一種對(duì) CD19 和 T 細(xì)胞標(biāo)志物 CD3 具有特異性的 BiTE 分子）。

對(duì)于涉及完整Fab或Fc抗體片段的應(yīng)用，需要在抗體鉸鏈處進(jìn)行消化。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等傳統(tǒng)酶可用于生成 Fab 片段，但非特異性酶活性需要仔細(xì)優(yōu)化，以極大限度地降低多個(gè)消化位點(diǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。Genovis的SmartEnzymes IgG 蛋白酶 GingisKHAN 和 FabALACTICA 具有一個(gè)消化位點(diǎn)，可從人 IgG1 生成均質(zhì)的 Fab 和 Fc 抗體片段。生成的片段可用于結(jié)晶和高階結(jié)構(gòu) （HOS） 的 NMR 研究、結(jié)合研究等。在這里，我們提出了獲得完整Fab和Fc抗體片段的不同策略。所得片段顯示 GingisKHAN 的有效消化，用于生成完整的 Fab 片段或從依那西普上的融合 TNFR 結(jié)構(gòu)域中分離 Fc。由于 GingisKHAN 的特異性消化依賴于 IgG 的天然折疊，因此在變性條件下特異性受到負(fù)面影響。為了使用SDS-PAGE分析消解效率，在加入SDS上樣緩沖液之前，停止在分析樣品中加入碘乙酰胺的反應(yīng)。Genovis同時(shí)提供IdeS酶的純化試劑盒。

LC-MS中級(jí)分析是一種被大眾接受的分析方法，用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制藥。它有助于理解多種關(guān)鍵質(zhì)量屬性 （CQA），例如糖基化、氧化和 C 端賴氨酸剪切。這種關(guān)于翻譯后修飾（PTM）的詳細(xì)知識(shí)是生物制藥開(kāi)發(fā)和制造所必需的。Genovis的FabRICATOR HPLC酶色譜柱，可快速進(jìn)行單克隆抗體的柱上酶切，并產(chǎn)生一致的亞基。該色譜柱含有固定化的FabRICATOR（IdeS）酶，可在鉸鏈下方快速且特異性地消化IgG，產(chǎn)生F（ab'）2和Fc片段，而不會(huì)出現(xiàn)任何過(guò)度消化的風(fēng)險(xiǎn)。為了減少樣品處理并為樣品制備提供自動(dòng)化解決方案，F(xiàn)abRICATOR被共價(jià)固定在樹(shù)脂上，并裝在適用于HPLC的PEEK色譜柱硬件中。使用FabRICATOR HPLC色譜柱，只需稍作修改，即可使用標(biāo)準(zhǔn)HPLC-MS裝置自動(dòng)生成抗體亞基。然后，F(xiàn)abRICATOR HPLC色譜柱上消解產(chǎn)生的亞基被捕獲在在線連接的反相（RP）色譜柱的柱頭上。Genovis的FabRICATOR MagIC適用于自動(dòng)化平臺(tái)。

抗體的氧化是可能影響抗體功能的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，需要密切定量和表征。它可能導(dǎo)致mAb的體內(nèi)半衰期、功效和穩(wěn)定性降低。Genovis的FabRICATOR（IdeS）消化產(chǎn)生的抗體亞基是研究抗體氧化的理想選擇。酶解的穩(wěn)健性允許在受監(jiān)管的環(huán)境中監(jiān)測(cè)抗體亞基氧化。Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段。該酶用于基于抗體的療法（如mAb、ADC、生物類似藥和Fc融合蛋白）的表征、質(zhì)量控制、穩(wěn)定性測(cè)試、生產(chǎn)監(jiān)測(cè)和克隆選擇。高度特異性-鉸鏈下方的一個(gè)消化位點(diǎn)快速–在30分鐘內(nèi)生成均勻的片段池實(shí)現(xiàn)基于抗體的生物zhiliao藥物的表征和質(zhì)量控制可固定在即用型離心柱中有助于監(jiān)測(cè)多種CQA，例如糖基化、氧化和C端賴氨酸剪切。北京GlycINATORIdeS蛋白酶抗體酶切

用 Genovis的GlySERIAS 在 37°C 下凍干消化1 小時(shí)。天津GlySERIASIdeS蛋白酶抗體酶切

與IdeS不同，在蛋白質(zhì)zhiliao藥物的質(zhì)量控制過(guò)程中，詳細(xì)分析和識(shí)別質(zhì)量屬性非常重要。對(duì)于具有柔性連接子的融合蛋白療法，這包括確認(rèn)連接蛋白的質(zhì)量以及蛋白質(zhì)接頭的質(zhì)量。使用 Genovis的GlySERIAS 的連接子酶切可以通過(guò)分離連接的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域來(lái)幫助這種質(zhì)量控制。然而，連接子中的大量甘氨酸殘基提供了酶的許多潛在消化位點(diǎn)，導(dǎo)致連接子內(nèi)多個(gè)位點(diǎn)同時(shí)水解。消化的產(chǎn)物通常由連接蛋白的幾種變體組成，并保留不同程度的連接子。雖然觀察到的異質(zhì)性通常不會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)亞基的詳細(xì)表征產(chǎn)生負(fù)面影響，但有助于直接表征連接子，但有時(shí)需要更均勻的消化產(chǎn)物來(lái)詳細(xì)分析單個(gè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域。天津GlySERIASIdeS蛋白酶抗體酶切