河北DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

**近一項與抗血管生成基因傳遞高度相關(guān)的發(fā)現(xiàn)是，陽離子脂質(zhì)體（CLs）選擇性地靶向**的血管系統(tǒng)。陰離子或電中性脂質(zhì)體沒有發(fā)現(xiàn)這種作用。Campbell和他的同事[95]發(fā)現(xiàn)，與電中性脂質(zhì)體相比，使用CLs在**血管內(nèi)皮細(xì)胞(VECs)中積累更多，CLs通過添加5mol%聚乙二醇來穩(wěn)定。在兩種人類**類型(LS174T和MCAIV)和兩個位置(顱窗和背側(cè)皮膚褶腔)中發(fā)現(xiàn)了**VECs的選擇性遞送。**血管中囊泡的分布是不均勻的，這可能與該技術(shù)是否足以根除足夠數(shù)量的**VECs以實現(xiàn)**消退反應(yīng)有關(guān)。有趣的是，注射后24小時，脂質(zhì)體上50%的摩爾電荷***增加了小鼠肺部的積聚。PHP是由天然來源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質(zhì))制成的，是一個用作基因載體的聚酯。河北DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例對轉(zhuǎn)染效率也有影響。在一項涉及原代人成肌細(xì)胞的研究中，使用不同的核酸比例來比較轉(zhuǎn)染效率的影響，轉(zhuǎn)染試劑包括FuGENE6、Effectene和ExGen500(一種基于pei的試劑)。該研究的一個***發(fā)現(xiàn)是，轉(zhuǎn)染效率可能不一定與所用試劑的體積直接相關(guān)。例如，2μgDNA與5μLFuGENE6試劑的比例被證明可以產(chǎn)生比較好的轉(zhuǎn)染效率，而更低或更高的DNA與試劑的比例并不能提高效率。在另一項涉及轉(zhuǎn)染人胃腺*細(xì)胞系的研究中也觀察到類似的發(fā)現(xiàn)，即在一系列組合中使用比較高轉(zhuǎn)染試劑與DNA比體積測試時，轉(zhuǎn)染效率并未達(dá)到比較好。使用不成比例的高轉(zhuǎn)染試劑量會導(dǎo)致不必要的細(xì)胞毒性，從而降低整體轉(zhuǎn)染結(jié)果。因此，確定合適的核酸與試劑比例是啟動新的轉(zhuǎn)染研究以實現(xiàn)高轉(zhuǎn)染效率和低細(xì)胞毒性的重要步驟。新疆轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)惠評估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要，特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標(biāo)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中。

隨著寡核苷酸生物合成產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場，以提高小RNA寡核苷酸轉(zhuǎn)染的效率。其中一種是通過化學(xué)修飾來提高其與靶標(biāo)和阻斷外切酶活性的結(jié)合親和力的agomirs和antagomirs。agomir是一種人工修飾的雙鏈miRNA模擬物，旨在發(fā)揮比傳統(tǒng)miRNA模擬物更高的靶標(biāo)抑制活性(krtzfeldt另一方面，antagomir是一種專門設(shè)計的單鏈miRNA類似物，旨在抑制特定的miRNA。agomir和antagomir都被認(rèn)為更穩(wěn)定、更有效、更特異，而且與正常的模擬物或拮抗劑相比，對宿主細(xì)胞膜具有更高的結(jié)合親和力。鎖定核酸(LNA)是另一種修飾的寡核苷酸，其至少一個核苷酸具有額外的亞甲基橋，以增強其核糖環(huán)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。其鎖定的核糖結(jié)構(gòu)使得LNA比常用的寡核苷酸更短，從而使其比傳統(tǒng)的寡核苷酸表現(xiàn)出更高的效率、穩(wěn)定性和結(jié)合親和力。NA基寡核苷酸的應(yīng)用已被報道用于各種生化或功能分析，涉及遞送小RNA分子，如siRNA、miRNA和piRNA。一些基于NA基的轉(zhuǎn)染不需要轉(zhuǎn)染試劑，這可以比較大限度地減少轉(zhuǎn)染過程中試劑的二次效應(yīng)。

超聲輔助轉(zhuǎn)染涉及在宿主細(xì)胞膜上制造微小的孔，以促進(jìn)核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。與前一種策略類似，超聲照射的暴露時間、脈沖數(shù)和密度也被報道與轉(zhuǎn)染效率成比例相關(guān)，直至達(dá)到閾值。超過耐受極限，細(xì)胞存活率和轉(zhuǎn)染效率可能會下降。同樣，增加核酸的數(shù)量也可以提高超聲輔助轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率。在同一項研究中，超聲轉(zhuǎn)染懸浮培養(yǎng)的人293T細(xì)胞比轉(zhuǎn)染貼壁培養(yǎng)的相同細(xì)胞類型更容易。然而，這一觀察結(jié)果與另一項研究的結(jié)果不一致，該研究報告在懸浮或單層條件下培養(yǎng)的轉(zhuǎn)染大鼠細(xì)胞數(shù)量沒有***差異。值得注意的是，后一項研究還報道了單層培養(yǎng)的大鼠細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后保持較高的細(xì)胞活力。然而，這兩項研究的不一致結(jié)果表明，超聲穿孔的比較好培養(yǎng)條件可能因使用的細(xì)胞系不同而異。在另一項研究中表明超聲轉(zhuǎn)染效率因使用的細(xì)胞類型而異，Hela和T-24細(xì)胞系的超聲轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于PC-3、U937和Meth A細(xì)胞系。因此，細(xì)胞類型的選擇是影響超聲轉(zhuǎn)染效率的另一個因素。并被困在核內(nèi)小體中，從這些囊泡結(jié)構(gòu)中釋放出來，進(jìn)入核周區(qū)域，后進(jìn)入細(xì)胞核。

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個因素，包括轉(zhuǎn)染核酸的類型和轉(zhuǎn)染的復(fù)雜性(單轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染)。一些試劑如Effectene和TransIT-X2是專門用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的，而一些試劑如Lipofectamine RNAiMAX更適合于小寡核苷酸的轉(zhuǎn)染。哺乳動物原代細(xì)胞由于其有限的壽命和有限的擴(kuò)增能力，通常比其他細(xì)胞類型更不容易受到轉(zhuǎn)染。非脂質(zhì)體試劑在轉(zhuǎn)染人原代細(xì)胞方面優(yōu)于脂質(zhì)體試劑，包括PEC、HASMC和HAEC、人原代成肌細(xì)胞和AGS。相比之下，據(jù)報道，基于脂質(zhì)體的試劑(如Lipofectamine和DharmaFECT家族)在轉(zhuǎn)染其他原代人細(xì)胞(如原代臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)和BM-MSC方面比非脂質(zhì)體試劑產(chǎn)生更高的轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認(rèn)為是另一個可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素。青島轉(zhuǎn)染試劑效率高

在腺病毒載體或脂質(zhì)體的全身遞送后，轉(zhuǎn)基因表達(dá)相對短暫。河北DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

不同種類的納米顆粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞系后，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。這些大量的測試表明，納米顆粒作為載體的效率與普通的非病毒轉(zhuǎn)染方法相當(dāng)。Tabatt等人所做的研究比較了使用脂質(zhì)體、陽離子固體li-pid納米顆粒和兩種商用轉(zhuǎn)染劑對COS-1細(xì)胞系(非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞)使用四種不同的轉(zhuǎn)染介質(zhì)所取得的轉(zhuǎn)染效果。固體脂質(zhì)na-noparticles轉(zhuǎn)染組和溶酶體(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸銨)轉(zhuǎn)染組的熒光素酶基因表達(dá)效率沒有統(tǒng)計學(xué)上的***差異，在每種轉(zhuǎn)染介質(zhì)中保持相同水平。然而，獲得的轉(zhuǎn)染效率低于使用商業(yè)轉(zhuǎn)染劑EscortTM 的效率，該轉(zhuǎn)染劑由DOPE(1,2-二-(順式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)組成。研究人員通過在HepG2細(xì)胞(人肝細(xì)胞肝*細(xì)胞系)上使用固體脂質(zhì)納米顆粒，實現(xiàn)了與市買的lipo-fectamine相同的綠色熒光蛋白和熒光素酶蛋白表達(dá)水平。河北DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑