黑龍江lipo3000轉(zhuǎn)染試劑

來源: 發(fā)布時間:2024-11-06

質(zhì)子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉(zhuǎn)移的物理測量來評估,也可以通過化學(xué)測量來評估,在化學(xué)測量中,表達(dá)的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當(dāng)?shù)膱蟾嫦到y(tǒng)來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET),它是熒光共振能量轉(zhuǎn)移研究質(zhì)子泵抑制劑的替代方法。多個質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)染,其中包括將編碼Cas9蛋白和引導(dǎo)RNA的質(zhì)粒遞送到宿主細(xì)胞,使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進(jìn)行基因組編輯。除了使用多個質(zhì)粒外,雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細(xì)胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達(dá)兩種不同基因的載體,通過一個內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)連接,只有一個啟動子。由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn),基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場變革。黑龍江lipo3000轉(zhuǎn)染試劑

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共轉(zhuǎn)染是將一種以上類型的核酸引入真核細(xì)胞的過程。組合的一些例子包括多個質(zhì)粒DNA ,siRNA和質(zhì)粒DNA ,以及多個miRNAs進(jìn)入同一個細(xì)胞。通常,多質(zhì)粒DNA共轉(zhuǎn)染的目的是將一種以上的外源基因?qū)胨拗骷?xì)胞。其應(yīng)用之一是生產(chǎn)由幾種質(zhì)粒DNA成分組成的合成病毒或雜交載體。一個例子是在HEK293細(xì)胞系中,用轉(zhuǎn)移、包膜和包裝載體等幾種質(zhì)粒載體生成慢病毒。此外,多個質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)研究,以研究一種蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的關(guān)系。甘肅肺轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)顆粒的加入導(dǎo)致內(nèi)體DNA釋放增加。

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納米顆粒的尺寸很小,但它們比其他顆粒具有更大的粘附表面,同時具有高穩(wěn)定性。正因?yàn)槿绱?,它們能夠成功地穿過細(xì)胞膜,進(jìn)入細(xì)胞,并與自然發(fā)生的細(xì)胞內(nèi)途徑結(jié)合,具有將特定顆粒帶到預(yù)定目標(biāo)位置的***準(zhǔn)確性。由于納米顆粒在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸和保護(hù)化合物方面具有巨大的潛力,可以避免酶的消化或儲存在核內(nèi)體中,因此納米顆粒作為細(xì)胞過程成像的工具,作為將藥物攜帶到細(xì)胞內(nèi)的各種系統(tǒng)的一部分,或**終用于基因傳遞。納米顆粒通過官能團(tuán)和非共價鍵之間的特異性和非特異性鍵與核酸結(jié)合的特性類似于體內(nèi)DNA和抑制蛋白之間的自然結(jié)合。在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸外源DNA的效率受到兩個主要因素的限制:內(nèi)吞作用,穿過細(xì)胞膜的方式,或適當(dāng)?shù)募?xì)胞受體***和內(nèi)體屏障的破壞。研究表明,在細(xì)胞內(nèi),與熒光標(biāo)記物連接的納米顆粒聚集在靠近細(xì)胞核的溶酶體中,但它們不會穿過核膜。事實(shí)上,這并沒有干擾特定基因結(jié)構(gòu)編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá),這證明了納米顆??梢詤⑴c內(nèi)體途徑,并可以通過細(xì)胞質(zhì)將DNA運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞核。不同種類的化學(xué)物質(zhì)有不同的納米粒子,它們具有不同的性狀、化學(xué)性質(zhì)、物理性質(zhì)和結(jié)構(gòu)。

在一項(xiàng)將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到HUVEC中的研究中,使用包括Effectene和FuGENE 6在內(nèi)的非脂質(zhì)體試劑比脂質(zhì)體試劑DOTAP(18%)產(chǎn)生了更好的轉(zhuǎn)染效率(34%和33%)。在另一項(xiàng)用質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染HUVEC的研究中,與Effectene和FuGENE 6或HD等非脂質(zhì)體試劑(48小時時均<20%)相比,脂質(zhì)體試劑顯示出更高的轉(zhuǎn)染效率(Lipofectamine LTX在48小時時約為38%,Lipofectamine 2000在48小時時約為23%)。在這些研究中,基于脂質(zhì)體和非脂質(zhì)體的試劑轉(zhuǎn)染HUVECs的效率無法得出結(jié)論,主要是由于所用試劑的范圍存在差異。然而,一致的觀察結(jié)果表明轉(zhuǎn)染效率仍然存在無論使用何種試劑,低于40%無疑暗示原代細(xì)胞是一種難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下。

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在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序,這與細(xì)菌DNA中的頻率相似。CpG免疫刺激的兩個應(yīng)用領(lǐng)域是疫苗接種和腫瘤免疫***。許多出版物表明,免疫刺激CpG基序可以用于疫苗接種策略,包括給藥編碼抗原的pDNA載體或給藥抗原本身。通過不同的給藥途徑給藥含CpG的脂叢可以抑制**生長。這些結(jié)果來源于使用表達(dá)促炎細(xì)胞因子(如IL-12)的轉(zhuǎn)基因或甚至不含外源轉(zhuǎn)基因的載體的研究。**的生長抑制似乎是由CpG基序引起的,因?yàn)檫@些序列的甲基化否定了這種作用。雖然有***效果,但含CpG基序?qū)?*生長的抑制的確切性質(zhì)尚不清楚。產(chǎn)生的細(xì)胞因子對腫瘤細(xì)胞和**脈管系統(tǒng)都有多重作用。一個恰當(dāng)?shù)睦邮荌L-12的能力,在響應(yīng)含CpG基序時產(chǎn)生,引發(fā)抗血管生成反應(yīng)。其他細(xì)胞因子,如IFN-g(自身為CpG誘導(dǎo)的細(xì)胞因子)誘導(dǎo)的細(xì)胞因子,即IP10和Mig,也能夠具有抗血管生成特性。超聲輔助轉(zhuǎn)染涉及在宿主細(xì)胞膜上制造微小的孔,以促進(jìn)核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。黑龍江lipo3000轉(zhuǎn)染試劑

PEI的分子量對細(xì)胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。黑龍江lipo3000轉(zhuǎn)染試劑

不同種類的納米顆粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞系后,產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。這些大量的測試表明,納米顆粒作為載體的效率與普通的非病毒轉(zhuǎn)染方法相當(dāng)。Tabatt等人所做的研究比較了使用脂質(zhì)體、陽離子固體li-pid納米顆粒和兩種商用轉(zhuǎn)染劑對COS-1細(xì)胞系(非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞)使用四種不同的轉(zhuǎn)染介質(zhì)所取得的轉(zhuǎn)染效果。固體脂質(zhì)na-noparticles轉(zhuǎn)染組和溶酶體(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸銨)轉(zhuǎn)染組的熒光素酶基因表達(dá)效率沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的***差異,在每種轉(zhuǎn)染介質(zhì)中保持相同水平。然而,獲得的轉(zhuǎn)染效率低于使用商業(yè)轉(zhuǎn)染劑EscortTM 的效率,該轉(zhuǎn)染劑由DOPE(1,2-二-(順式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)組成。研究人員通過在HepG2細(xì)胞(人肝細(xì)胞肝*細(xì)胞系)上使用固體脂質(zhì)納米顆粒,實(shí)現(xiàn)了與市買的lipo-fectamine相同的綠色熒光蛋白和熒光素酶蛋白表達(dá)水平。黑龍江lipo3000轉(zhuǎn)染試劑