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外泌體用于細(xì)胞學(xué)或動物實驗前的無菌處理 已經(jīng)經(jīng)過上述方法制備的外泌體在進(jìn)行細(xì)胞或動物實驗之前還需進(jìn)行一步除菌過濾，這個時候考慮到得率，應(yīng)該采用離心法處理，以減少過濾時的外泌體樣品損失。 超濾方法純化具體操作步驟舉例 Amicon? Ultra-15 超濾管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip?真空抽濾對樣品進(jìn)行澄清[目錄號SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜] 用PBS平衡Amicon? Ultra-15 超濾管(目錄號UFC901024,10 kDa MWCO) ，4000g離心 X 10 min。 從超濾管內(nèi)管及收集管吸走PBS。向超濾管加入15 mL 樣品。4000g 離心30 min 濃縮。倒空收集管。加入14 mL PBS 進(jìn)行緩沖液置換，溫柔吸打樣品數(shù)次。4000g離心 30 min。從濃縮管吸回處理好的樣品。(30X 濃縮) 注意 : 所有 Amicon? Ultra 超濾管 (0.5, 2, 4 和 15 mL) 與此操作流程兼容 *Millipore超濾濃縮管用于蛋白超濾、濃縮、除鹽！浦東新區(qū)Merck離心濃縮管哪家優(yōu)惠

蛋白親和純化（無需換液和濃縮） * 本操作受Amicon? Ultra-0.5 mL超濾管～1 mg蛋白的容量限制。體積較大而蛋白濃度較低的情況下也可以采用如上方法，但溶液體積和離心時間等需要略加優(yōu)化。 3次低速離心，總耗時~75分鐘（含60分鐘孵育時間） 1. 在Amicon? Pro上樣池中加入至多1000μL親和純化樹脂（沉降的柱床體積）和至多9 mL漂洗緩沖液。1,000×g離心1 min平衡樹脂。（柱床）樹脂量≥ 500μL時采用2,000×g離心4 min。 2. 加入至多9 mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1 h*，其間可溫和攪動促進(jìn)結(jié)合。長寧區(qū)默克4ml超濾濃縮管商家上海超濾濃縮管批發(fā)商。

近年來隨著分離純化技術(shù)的提高，關(guān)于外泌小體的研究成果頗豐；這進(jìn)一步吸引了越來越多領(lǐng)域的課題將外泌體納入研究對象。研究的前提是方便、高效、標(biāo)準(zhǔn)化地分離純化外泌小體。經(jīng)過近20年的探索，已經(jīng)建立了超速離心法、沉淀法、色譜法、親和純化法等。在大量實踐中大家逐漸認(rèn)識到根據(jù)下游研究對樣品的要求，以及起始樣品的規(guī)模、數(shù)量，可以選擇不同的外泌體制備策略。因不需要特殊的設(shè)備和試劑盒，對操作人員也沒有特別的經(jīng)驗要求，超濾法后來居上，成為實驗室中制備外泌體的通用方法。

如果能確保用同樣的超濾管對其它蛋白成功操作的話，那么有可能是這個目的蛋白的原因。有時蛋白會因其本身的一些特性（構(gòu)象差異）而影響濃縮效果，建議選用上一分子量級別的超濾管（如原本選用30k，此時可以選擇10k）。 2）如果目的樣本也不在濾過液中，那么： a）蛋白樣本起始濃度是否大于25ug/mL？ b）用來確定樣本濃度的方法是什么？是否可信？ c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是的，具體解決方法請參考上面的關(guān)于蛋白沉淀問題的解釋。益啟生物公司的超濾濃縮管種類繁多。

首先，Amicon? Ultra超濾管的蛋白比較低起始濃度為25ug/ml。請確保樣本的起始濃度大于這個濃度。其次，如果問題仍然出現(xiàn)，請不要丟棄樣本濾過液以便用于分析可能的原因： 1）如果目的樣本在濾過液中，那么請排查： a）是否選擇了合適截留分子量的超濾管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？ b）使用的離心力是否是在限定范圍內(nèi)？如果使用的是rpm，請換算成相應(yīng)的g離心力，具體換算方法請垂詢。 c）離心機(jī)**近是否有校準(zhǔn)過？ d）是否***嘗試這個蛋白？購買超濾濃縮管就找益啟生物公司。普陀區(qū)Merck超濾濃縮管哪家優(yōu)惠

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上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管（有5種截留分子量規(guī)格可選）。 6. 加入1 mL洗脫緩沖液與樹脂混勻。孵育5 min。 7. 4,000×g離心15 min。 8. 加上蛋白樣品**終需要的緩沖液1.5 mL。4,000×g離心15 min，置換緩沖液的同時進(jìn)行濃縮。 9. 倒轉(zhuǎn)Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管，1,000×g離心回收純化和濃縮好的蛋白。 * 本操作受Amicon? Ultra-0.5 mL超濾管～1 mg蛋白的容量限制。體積較大而蛋白濃度較低的情況下也可以采用如上方法，但溶液體積和離心時間等需要略加優(yōu)化。 用Protein A或G對抗體進(jìn)行親和純化浦東新區(qū)Merck離心濃縮管哪家優(yōu)惠