山東FabULOUSIdeS蛋白酶

與IdeS不同，Genovis的FabULOUS（SpeB）是一種半胱氨酸蛋白酶，可在來自多個不同物種和亞類的IgG的鉸鏈區(qū)域消化，產生Fab和Fc片段。人、小鼠、大鼠、山羊和綿羊的IgG被FabULOUS消化，產生Fab和Fc片段。人IgG1的主要消化位點是......KTHT...例如，制備的Fab片段可用于親和力研究、Fab糖基化研究和結構研究。對來自多個物種和亞類的IgG有活性–上鉸鏈區(qū)域的消化物；快速-在一小時內生成Fab和Fc片段；有效消化小鼠IgG1。FabULOUS來源于化膿性鏈球菌，在大腸桿菌中表達。FabULOUS的分子量為29kDa，該酶含有His標簽。剩下一個連接子殘基（甘氨酸殘基），這有助于識別位于Fc區(qū)域的修飾。山東FabULOUSIdeS蛋白酶

Genovis提供色譜柱形式的FabRICATOR（IdeS）酶，是在鉸鏈下方對IgG進行柱上消化的固定化酶。Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體，產生均質的F（ab'）2和Fc片段。酶解后，可以使用反相HPLC、質譜或其他分析方法分析片段?？贵w消化和亞基生成的自動化使生物反應器的在線監(jiān)測應用成為可能，例如，作為2D-LC-MS設置的一部分，將反應器直接耦合到MS。這種自動化的抗體亞基分析方法減少了操作人員的時間、樣品處理時間并提高了通量。山東FabULOUSIdeS蛋白酶由于 GingisKHAN 的特異性消化依賴于 IgG 的天然折疊，因此在變性條件下，還可能出現其他消化位點。

Genovis提供FabRICATOR（IdeS）驗證包。三種不同批次的凍干酶，用于驗證基于FabRICATOR的分析方法。FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體，產生均質的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATOR酶已成為生物制藥行業(yè)中使用的工具，用于表征用于zhiliao用途的單克隆抗體、Fc融合蛋白、ADC和生物仿制藥。每批FabRICATOR酶在釋放前都經過嚴格的酶活性、特性和純度測試。FabRICATOR驗證試劑盒由三批凍干酶組成，使方法驗證更容易。每批都附有一份分析證書。QC應用的簡化方法驗證；批次間變異性評估的理想形式；提高批量放行檢測性能的可信度。

與IdeS不同，Romiplostim 由四個相同的血小板生成素 （TPO） 受體結合肽和一個 Fc 片段組成，通過柔性聚甘氨酸序列連接在一起。與度拉糖肽類似，用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下過夜，或用 GlySERIAS 凍干 1 小時并在 37°C 下過夜消化該蛋白質。 鏈間二硫鍵被還原，以便于通過反相LC-MS進行以下分析。與度拉糖肽的觀察結果類似，用固定化酶消化產生均質的 Fc/2，剩下一個連接子殘基，此處為甘氨酸殘基。這有助于識別專門位于Fc區(qū)域的修改。用凍干酶消化 1 小時得到 Fc/2，剩余 4 個甘氨酸殘基和少量的 Fc/2 仍與一個 TPO 肽連接。另一方面，這使得研究 Fc/2 和第yi個肽之間的連接區(qū)域成為可能，而不會受到第二個肽的干擾。用 GlySERIAS 凍干液過夜消化產生 2 個 Fc/2 變體，分別剩下 4 個和 1 個甘氨酸殘基。根據消化時間的不同，使用凍干產物釋放的肽以五或七種變體存在，接頭中殘留的甘氨酸殘基數量不同，而使用固定化產物釋放的肽以四種變體存在。IgASAP Sub1+2 是從丹毒梭菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽，分子量為 131 kDa。

一些應用（如結合研究）具有高度靈敏度，因此在制備中需要不含殘留酶的純抗體片段。因此，Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供，可快速輕松地生成均質 F（ab'）2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR （IdeS），用于制備來自多種 IgG 的 F（ab'）2 和 Fc 片段（對于兔 IgG，請咨詢），而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 試劑盒進行處理 。 為了生成和純化完整的 F（ab'）2 和 Fc/2 片段，使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒處理曲妥珠單抗，并通過 SDS-page 進行分析。首先，在室溫下在FabRICATOR固定化離心柱上消化抗體15分鐘，然后進行短離心步驟。在 CaptureSelect ? 離心柱上純化 F（ab'）2 片段，并通過降低 pH 值，然后立即調整回中性 pH 值，一步洗脫結合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒從酶切到收集片段的過程大約需要 1 小時QC方法需要執(zhí)行簡單，易于訓練，高度可重復，數據易于分析。山東FabULOUSIdeS蛋白酶

IgA2 亞類以三種等位基因形式存在，A2m1、A2m2 和 A2m3。山東FabULOUSIdeS蛋白酶

與肽圖譜相比，根據Genovis科學家的經驗，尤其是對于像抗體這樣的分子，許多人在常規(guī)實驗中做了太多的肽圖譜，而中級水平（Middle-level）的方法可以很好地工作。中級方法（IdeS酶切抗體）需要更少的實際操作步驟和較少的示例處理，所有這些都意味著過程中出錯的事情更少。我們的許多酶可以作為平臺方法，同樣的方法適用于絕大多數的抗體，這不是肽圖的情況下，可能需要優(yōu)化整個樣品制備，LC分離，質譜設置和數據分析的每個不同的抗體分析。這些變化可能是很小的，但沒有一種適用于所有肽圖的方法。由于分析和數據分析的簡單性，中級方法非常適合自動化和高通量的工作流程。肽圖當然可以自動用于樣品制備，但高通量肽圖生成大量數據，仍然需要徹底分析。事實上，肽圖譜是一個多步驟的過程，每一個步驟都可能破壞方法，并可能導致破壞蛋白質的人工制品，很難交叉訓練給非專業(yè)人員。中級水平的方法很容易交叉訓練，我們的方法在質量控制實驗室中被成功地使用。肽圖譜是一種用于修飾分析和氨基酸確認的方法，但一旦完成了這一工作，我相信使用中級分析可以成功地更有效地完成抗體樣本的大部分工作。山東FabULOUSIdeS蛋白酶