河南PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

Genovis 是一家瑞典生物技術(shù)公司，自2010年起，為生物制藥公司提供SmartEnzymes?工具酶。Genovis提供一系列獨(dú)特、快速且易于使用的酶學(xué)工具，主要用于生物制藥行業(yè)和學(xué)術(shù)界。 我們?cè)谌蚍秶鷥?nèi)提供創(chuàng)新的智能酶SmartEnzymes?，用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。您可以在我們的網(wǎng)站上“Application頁(yè)面”獲得更多應(yīng)用信息，如果您有興趣，可以和我們一起做一個(gè)“SmartStories”，也可以聯(lián)系我們。?ImpaRATOR 來源于銅綠假單胞菌，在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 97 kDa。河南PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

Genvois的SialEXO產(chǎn)品是唾液酸酶，用于N-和O-糖基化蛋白的有效去唾液酸化。SialEXO凍干由兩種唾液酸酶組成，每種唾液酸酶都具有獨(dú)特的活性，并且它們同時(shí)起作用。一種酶對(duì)α2-3、α2-6和α2-8連接的唾液酸具有很好的活性，另一種酶（SialEXO 2-3）通過α2-3-鍵快速水解唾液酸。SialEXO凍干可在2小時(shí)內(nèi)去除天然蛋白質(zhì)上的所有唾液酸。SialEXO在天然條件下水解糖蛋白，在pH值范圍為6.5至9時(shí)顯示出活性。這些酶來源于Akkermansia muciniphila，并在大腸桿菌中表達(dá)。兩種酶都含有 His 標(biāo)簽，酶的分子量為 43 kDa 和 66 kDa。 湖北高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶疾病機(jī)理研究FucosEXO 是α-巖藻糖苷酶混合物。

蛋白質(zhì)的N-糖基化特征是一個(gè)關(guān)鍵的質(zhì)量屬性。它會(huì)影響生物制藥的安全性和有效性，因此需要在開發(fā)和生產(chǎn)過程中進(jìn)行表征和監(jiān)測(cè)。常見的聚糖分析工作流程是用PNGase F釋放N-聚糖，然后用熒光標(biāo)記物（如2-AB、2-AA、普魯卡因胺或RapiFluor-MS?（沃特世公司））標(biāo)記生成的聚糖。然后使用HILIC-HPLC或毛細(xì)管電泳分離標(biāo)記的聚糖，以表征和定量不同的聚糖結(jié)構(gòu)。 在這里，使用游離聚糖方法分析zhiliao性抗體曲妥珠單抗、Fc-融合蛋白依那西普和糖蛋白R(shí)Nase B的N-聚糖。曲妥珠單抗和依那西普在天然條件下在37°C下用Genvois的PNGase F去糖基化1小時(shí)，而RNase B需要變性和還原才能完全去糖基化。因此，在50°C下用PNGase F去糖基化10分鐘之前，用RapiGest? SF表面活性劑（沃特世公司）和TCEP處理RNase B。 用RapiFluor-MS標(biāo)記所得游離的聚糖，并通過HILIC UPLC-FLD-MS進(jìn)行分析。

我們測(cè)量了FucosEXO從一組dai表不同鍵的不同寡糖底物中釋放的巖藻糖。FucosEXO可有效釋放α1-2、α1-3和α1-4連接的巖藻糖，對(duì)α1-6連接的巖藻糖殘基沒有活Genovis的FucosEXO的底物特異性：巖藻糖以不同的鍵存在于N-和O-聚糖上。α1-2、α1-3 和 α1-4 連接的巖藻糖常見于 O-聚糖中，并作為 N-聚糖的天線巖藻糖基化，而 α1-6 連接的巖藻糖被發(fā)現(xiàn)是 N-聚糖he心的修飾。β1-3,4半乳糖的水解：Genovis的GalactEXO 是一種β-半乳糖苷酶混合物，可水解 N-和 O-糖基化蛋白中的 β1-3,4-連接末端半乳糖。上海倍篤生物涵蓋藥物研發(fā)的全流程，抗體結(jié)構(gòu)域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等。

用于離心柱中糖蛋白去膠基化的固定化酶。Genovis的FucosEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的FucosEXO酶，用于糖蛋白的去氟糖基化，而不會(huì)用酶污染z終制劑。Microspin 色譜柱可用于 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去膠基化。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3. z終樣品中不含酶。有效去除α1-2,3,4連接巖藻糖：分析用復(fù)雜聚糖結(jié)構(gòu)修飾的糖蛋白可能具有挑戰(zhàn)性，需要高效和特異性的酶學(xué)工具。Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物，用于有效水解 N-和 O-糖蛋白或寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4 連接的巖藻糖殘基，無需輔助因子或添加現(xiàn)O-糖基化藥有Tn抗原，定量he心 GalNAc 水平，減少了異質(zhì)性。河南PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成，均帶有His標(biāo)簽，組分的分子量為87 kDa和109 kDa。河南PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

Genovis的SialEXO產(chǎn)品是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶。這些酶對(duì)天然糖蛋白或游離的聚糖結(jié)構(gòu)上存在的 N- 和 O-連接聚糖均具有活性。SialEXO用于在用OpeRATOR或OglyZOR消化之前預(yù)處理O-糖基化蛋白。其他應(yīng)用包括降低樣品復(fù)雜性、電荷異構(gòu)體分析和外切糖苷酶陣列。N-連接、O-連接和游離聚糖的高效去唾液酸化快速去除唾液酸，增強(qiáng)對(duì)蛋白質(zhì)電荷變體的分析可固定在即用型離心柱中。然后可以用FabRICATOR消化所得的去糖基化蛋白，并通過中級(jí)質(zhì)譜分析。我們將該工作流程應(yīng)用于依那西普的分析，雖然未經(jīng)處理的TNFR結(jié)構(gòu)域過于復(fù)雜而無法分析，但O-聚糖組成可以在用PNGase F處理后進(jìn)行分離和比較。河南PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究