浙江FabALACTICAIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

對(duì)于攜帶突變鉸鏈的 Fc 融合蛋白或抗體來說，F(xiàn)ab 和 Fc 片段的生成可能具有挑戰(zhàn)性。Genovis的GingisKHAN酶在鉸鏈上方一個(gè)可觸及的賴氨酸位點(diǎn)消化人IgG1，在足夠溫和的還原條件下保留鏈內(nèi)和鏈間二硫鍵，從而產(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。對(duì)于融合蛋白，消化通常在鉸鏈上方獲得，但融合伴侶的結(jié)構(gòu)和氨基酸序列可能導(dǎo)致其他暴露的消化位點(diǎn)。如果去除保守的 Fc N-聚糖，F(xiàn)c 中的第二個(gè)切割位點(diǎn)也可能被GingisKHAN酶切。將精選的單克隆人 IgG1 抗體和 Fc 融合蛋白與 GingisKHAN 在 37°C 下孵育 1 小時(shí)，并通過 HPLC 進(jìn)行分析。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等傳統(tǒng)酶可用于生成 Fab 片段，但非特異性酶活性需要仔細(xì)優(yōu)化，降低多個(gè)消化位點(diǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。浙江FabALACTICAIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

大多數(shù)zhiliao性抗體都攜帶人IgG1骨架，雙特異性和多特異性形式的開發(fā)正在迅速增加。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性，例如單價(jià)結(jié)合、二硫鍵擾亂和配對(duì)Fc糖基化。傳統(tǒng)方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化，這需要優(yōu)化以極大限度地減少過度消化并獲得足夠的產(chǎn)量。Genovis的FabDELLO與IdeS酶具有不同的特異性，它在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人IgG1，并產(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。為了證明FabDELLO的特異性活性，通過非還原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的選擇。所有底物均實(shí)現(xiàn)了完全消化，包括具有其他困難的LALA和LFLE突變的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精確和有效性能驗(yàn)證了其在生物制藥開發(fā)中的用途。四川GlycINATORIdeS蛋白酶抗體酶切為了獲得更均勻的度拉糖肽融合蛋白的消化產(chǎn)物。

與IdeS不同，Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶，可在鉸鏈上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人IgA1，而IgASAPSub1+2特異性消化鉸鏈上方的IgA1和IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。IgASAP酶能夠生成完整的單價(jià)Fab片段以及IgA的中級(jí)分析，從而促進(jìn)IgA的表征，例如，在疫苗、zhiliao和診斷的開發(fā)過程中。獨(dú)特的酶促工具，可實(shí)現(xiàn)IgA的中級(jí)表征和質(zhì)量控制；生成均相的Fab和Fc片段，并保留免疫反應(yīng)性；高度特異性–人IgA鉸鏈上方的一個(gè)消化位點(diǎn)。

Genovis的FabRICATOR Fab2 （IdeS）試劑盒可消化兔 IgG，但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段，您需要另一種填料，而不是試劑盒中通常包含的 CaptureSelect? Fc。如果您對(duì)處理兔IgG感興趣，請(qǐng)聯(lián)系Genovis團(tuán)隊(duì)，我們將在FabRICATOR Fab2試劑盒中提供與兔Fc相容的樹脂色譜柱。使用FabRICATOR的抗體消化的簡單性、速度和可重復(fù)性也意味著這種酶可以被用于質(zhì)量控制應(yīng)用。 QC方法需要執(zhí)行簡單，易于訓(xùn)練，高度可重復(fù)，數(shù)據(jù)易于分析，這正是您使用FabRICATOR所得到的。 因?yàn)樗m用于一系列不同的IgG，這也意味著使用FabRICATOR進(jìn)行QC工作的客戶將能夠在未來的產(chǎn)品中使用它。 這顯示了這種酶在抗體消化中是多么的有效。Genovis的GlySERIAS 是一種獨(dú)特的酶。

與IdeS不同，Genovis的GlySERIAS是一種獨(dú)特的酶，可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白連接子，例如Gly4Ser和GlyxSery（GS）以及聚甘氨酸（G）接頭。該酶能夠分離多功能融合蛋白的各個(gè)結(jié)構(gòu)域，以促進(jìn)表征并增加對(duì)這些分子的理解。融合蛋白的中級(jí)分析既可以降低整體樣品的復(fù)雜性，又可以對(duì)翻譯后修飾進(jìn)行結(jié)構(gòu)域特異性鑒定和監(jiān)測(cè)。為了改善連接子的去除，Genovis建議使用GlySERIASImmobilized。對(duì)于連接子表征，我們推薦GlySERIAS凍干。具有柔性接頭的獨(dú)特酶消化融合蛋白；中級(jí)方法可降低融合蛋白表征的復(fù)雜性；復(fù)雜融合蛋白的可靠且可重復(fù)的消化。Genovis的GlySERIAS酶切由甘氨酸或甘氨酸和絲氨酸殘基的重復(fù)序列組成的柔性連接子。該酶在天然反應(yīng)條件下具有活性，能夠?qū)?fù)雜的融合蛋白進(jìn)行中級(jí)表征。連接子區(qū)域同時(shí)在多個(gè)位點(diǎn)被消化，導(dǎo)致先前連接的組分分離。活性發(fā)生在pH7.6下，孵育時(shí)間可以根據(jù)所需的產(chǎn)物而變化。GlySERIAS是從噬菌體K克隆而來的，在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為18kDa。在大多數(shù)IgG上，您可以在短短30分鐘內(nèi)生成F(ab’)2和Fc/2片段。河南FabDELLOIdeS蛋白酶

IgASAP Sub1+2 是從丹毒梭菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 131 kDa。浙江FabALACTICAIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR（IdeS），為客戶提供了許多選擇，以滿足他們的需求。 凍干形式用于高度靈活的方法開發(fā)的目的，并隨時(shí)準(zhǔn)備使用，只需重組和添加到IgG樣本。 凍干酶的靈活性也意味著它可以應(yīng)用于更高的通量和自動(dòng)化的工作流程。 Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶，在隨時(shí)可用的旋轉(zhuǎn)柱中，這可以極大限度地減少在樣品中殘留的酶，這可能是有利的。 對(duì)于更多的制備應(yīng)用，我們提供FabRICATOR Fab2試劑盒，這是IgG片段生成和純化的強(qiáng)大工具。 這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱，用于亞基的親和純化。 由于FabRICATOR在非還原條件下是活性的，F(xiàn)(ab’)2片段保留其鏈間和鏈內(nèi)二硫鍵，如果片段想用于結(jié)合研究，這一點(diǎn)尤為重要，因?yàn)榻Y(jié)合效率和免疫反應(yīng)性將被保留。浙江FabALACTICAIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶