青海GingisKHANIdeS蛋白酶

在Genovis，我們的策略是幫助客戶進行中級（或亞基）分析，這是我們的工作，特別是我們的蛋白質(zhì)酶切產(chǎn)品。完整質(zhì)量和肽圖譜是蛋白質(zhì)表征的常用方法，我們發(fā)現(xiàn)，與簡單但信息有限的完整質(zhì)量和高度復(fù)雜但信息豐富的肽圖譜相比，中級方法具有優(yōu)勢。通過執(zhí)行中級描述，您可以生成從完整的質(zhì)量實驗中獲得的所有信息，具有額外的優(yōu)勢。在對抗體進行完整質(zhì)量分析時，很難明確地識別某些修飾。質(zhì)譜儀器正在改進，可以更有效地分析更大的分子，但通過使用我們的SmartEnzymes，如IdeS，可以將抗體分解成更小的片段，這提高了這些實驗可以執(zhí)行的分辨率，因此，增加了鑒定修飾的信心。此外，你不僅能夠更好地識別修改，而且你能夠?qū)⑺鼈兌ㄎ坏降鞍踪|(zhì)上的單個結(jié)構(gòu)域，這是你在完整水平上無法做到的。IgASAP Sub1+2 在脯氨酸 （P） 和纈氨酸 （V） 之間消化 IgA1 和 IgA2m1。青海GingisKHANIdeS蛋白酶

與IdeS不同，融合蛋白是通過將兩種或多種蛋白質(zhì)或肽的功能組合成一個量身定制的分子來創(chuàng)造的，以專門應(yīng)對挑戰(zhàn)。連接此類蛋白質(zhì)或肽結(jié)構(gòu)域的常見方法是包含柔性連接子。這些連接子通常富含甘氨酸，例如甘氨酸殘基（G），或甘氨酸殘基散布絲氨酸殘基（GS）以形成重復(fù)序列。這為連接子提供了足夠的靈活性，不會干擾連接蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域的功能。然而，這些新模式帶來了新的分析挑戰(zhàn)，需要新的工具來促進表征和產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測。中級分析已成為分析單克隆抗體療法的標準方法，涉及將分子消化成幾個定義的亞基。它們足夠小，可以獲得高質(zhì)量的質(zhì)譜圖，并為產(chǎn)品質(zhì)量屬性提供特定領(lǐng)域的信息。由于G和GS連接子對常見蛋白酶的降解具有抗性，因此很難分離結(jié)構(gòu)域以進行深入分析。因此，Genovis開發(fā)了GlySERIAS，不同于IdeS酶，一種消化柔性富含甘氨酸的連接子的酶。GlySERIAS可以分離不同的功能域，并實現(xiàn)對融合蛋白、多特異性抗體和含有富含甘氨酸的連接子的各種mAb片段進行詳細表征的中級方法。吉林GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)生成完整的 Fab片段或從依那西普上的融合TNFR結(jié)構(gòu)域中分離 Fc。

與IdeS不同，Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶，可在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1，而IgASAPSub1+2特異性消化鉸鏈上方的IgA1和IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。IgASAP酶能夠生成完整的單價Fab片段以及IgA的中級分析，從而促進IgA的表征，例如，在疫苗、zhiliao和診斷的開發(fā)過程中。獨特的酶促工具，可實現(xiàn)IgA的中級表征和質(zhì)量控制；生成均相的Fab和Fc片段，并保留免疫反應(yīng)性；高度特異性–人IgA鉸鏈上方的一個消化位點。

為什么客戶想在他們的工作試用Genovis的FabRICATOR（IdeS）。FabRICATOR的高特異性(在鉸鏈下方有單個消化位點)以及它對IgG種和亞類表現(xiàn)出活性的事實使其成為高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大優(yōu)勢是速度。在大多數(shù)IgG上，您可以在短短30分鐘內(nèi)生成F(ab’)2和Fc/2片段，這一速度簡化了方法開發(fā)，并允許快速有效的中層表征，使客戶能夠在不比做完整質(zhì)量實驗長太多的時間內(nèi)獲得更多關(guān)于分子的信息。Genovis發(fā)現(xiàn)更多的緩沖液與溶液中的FabRICATOR消解相容（更多信息）。Genovis已經(jīng)測試了PBS和150mM醋酸銨，pH7，結(jié)果良好。并且應(yīng)該也適用于FabRICATORHPLC。然而，緩沖液的離子強度會影響抗體片段在FabRICATORHPLC（IdeS）色譜柱上的保留，并且IgG1亞基需要至少100-150mM鹽才能洗脫為單個窄峰。其他IgG亞類或融合蛋白可能需要對緩沖液組成進行一些優(yōu)化。Genovis的FabULOUS （SpeB）制備的Fab片段可用于親和力研究、Fab糖基化研究和結(jié)構(gòu)研究。

與IdeS不同，為了獲得更均勻的度拉糖肽融合蛋白的消化產(chǎn)物，用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白質(zhì)消化該蛋白質(zhì)，該蛋白由與瓊脂糖珠共價偶聯(lián)的GlySERIAS酶組成。通過將酶偶聯(lián)到樹脂上，可以增加酶與蛋白質(zhì)的比率，從而可以進一步加速反應(yīng)，以獲得更完整的連接子消化。此外，該酶不會存在于樣品制備中，可能會干擾樣品分析。為了進行比較，度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化過夜，或用GlySERIAS凍干1小時并在37°C下過夜消化。 為了降低樣品復(fù)雜性，使用內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR凍干去除Fc聚糖，并減少鏈間二硫鍵。通過反相LC-MS對樣品的分析表明，GlySERIAS Immobilized幾乎完全消化了Fc結(jié)構(gòu)域中的連接子，留下了接近均質(zhì)的Fc/2產(chǎn)物，其中含有來自連接子的一個絲氨酸殘基。用 GlySERIAS 凍干 1 小時或過夜消化，兩者都會產(chǎn)生幾種 Fc 產(chǎn)物，并附著不同數(shù)量的絲氨酸和甘氨酸殘基。GLP-1肽在所有三個樣品中以兩種變體存在。使用GlySERIAS固定化消化的均質(zhì)Fc/2能夠詳細研究特定于Fc區(qū)域的質(zhì)量屬性。此外，在樣品中未觀察到干擾分析的酶峰。作為補充，F(xiàn)c/2 產(chǎn)物在用 GlySERIAS 凍干消化后殘留部分連接子，有助于研究位于 GS 連接子的修飾。鉸鏈上方的單個暴露賴氨酸殘基,生成的片段可用于結(jié)晶和高階（HOS）NMR研究、結(jié)合研究等。甘肅IdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

中級分析已成為分析單克隆抗體療法的標準方法，并為產(chǎn)品質(zhì)量屬性提供特定領(lǐng)域的信息。青海GingisKHANIdeS蛋白酶

Genovis是一家瑞典生物技術(shù)公司，自2010年起，為生物制藥公司提供SmartEnzymes工具酶。Genovis提供一系列獨特、快速且易于使用的酶學(xué)工具，主要用于生物制藥行業(yè)和學(xué)術(shù)界。我們在全球范圍內(nèi)提供創(chuàng)新的智能酶SmartEnzymes?，用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。您可以在我們的網(wǎng)站上“Application頁面”獲得更多應(yīng)用信息，如果您有興趣，可以和我們一起做一個“SmartStories”，也可以聯(lián)系我們。青海GingisKHANIdeS蛋白酶