安徽GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切

對于攜帶突變鉸鏈的 Fc 融合蛋白或抗體來說，F(xiàn)ab 和 Fc 片段的生成可能具有挑戰(zhàn)性。Genovis的GingisKHAN酶在鉸鏈上方一個可觸及的賴氨酸位點消化人IgG1，在足夠溫和的還原條件下保留鏈內(nèi)和鏈間二硫鍵，從而產(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。對于融合蛋白，消化通常在鉸鏈上方獲得，但融合伴侶的結(jié)構(gòu)和氨基酸序列可能導(dǎo)致其他暴露的消化位點。如果去除保守的 Fc N-聚糖，F(xiàn)c 中的第二個切割位點也可能被GingisKHAN酶切。將精選的單克隆人 IgG1 抗體和 Fc 融合蛋白與 GingisKHAN 在 37°C 下孵育 1 小時，并通過 HPLC 進(jìn)行分析。Genovis的GingisREX在6M時耐受尿素，吐溫高達(dá)1%，但活性在0.1%時受到SDC的負(fù)面影響。安徽GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切

與IdeS不同，Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶，可在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1，而IgASAPSub1+2特異性消化鉸鏈上方的IgA1和IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。IgASAP酶能夠生成完整的單價Fab片段以及IgA的中級分析，從而促進(jìn)IgA的表征，例如，在疫苗、zhiliao和診斷的開發(fā)過程中。獨特的酶促工具，可實現(xiàn)IgA的中級表征和質(zhì)量控制；生成均相的Fab和Fc片段，并保留免疫反應(yīng)性；高度特異性–人IgA鉸鏈上方的一個消化位點。四川FabULOUSIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶Genovis提供的IgASAP Sub1+2 在鉸鏈上方的一個特定位點消化人 IgA1 和 IgA2m1，產(chǎn)生完整且均勻的 Fab 和 Fc 片段。

為什么客戶想在他們的工作試用Genovis的FabRICATOR（IdeS）。FabRICATOR的高特異性(在鉸鏈下方有單個消化位點)以及它對IgG種和亞類表現(xiàn)出活性的事實使其成為高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大優(yōu)勢是速度。在大多數(shù)IgG上，您可以在短短30分鐘內(nèi)生成F(ab’)2和Fc/2片段，這一速度簡化了方法開發(fā)，并允許快速有效的中層表征，使客戶能夠在不比做完整質(zhì)量實驗長太多的時間內(nèi)獲得更多關(guān)于分子的信息。Genovis發(fā)現(xiàn)更多的緩沖液與溶液中的FabRICATOR消解相容（更多信息）。Genovis已經(jīng)測試了PBS和150mM醋酸銨，pH7，結(jié)果良好。并且應(yīng)該也適用于FabRICATORHPLC。然而，緩沖液的離子強(qiáng)度會影響抗體片段在FabRICATORHPLC（IdeS）色譜柱上的保留，并且IgG1亞基需要至少100-150mM鹽才能洗脫為單個窄峰。其他IgG亞類或融合蛋白可能需要對緩沖液組成進(jìn)行一些優(yōu)化。

與IdeS不同，在蛋白質(zhì)zhiliao藥物的質(zhì)量控制過程中，詳細(xì)分析和識別質(zhì)量屬性非常重要。對于具有柔性連接子的融合蛋白療法，這包括確認(rèn)連接蛋白的質(zhì)量以及蛋白質(zhì)接頭的質(zhì)量。使用 Genovis的GlySERIAS 的連接子酶切可以通過分離連接的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域來幫助這種質(zhì)量控制。然而，連接子中的大量甘氨酸殘基提供了酶的許多潛在消化位點，導(dǎo)致連接子內(nèi)多個位點同時水解。消化的產(chǎn)物通常由連接蛋白的幾種變體組成，并保留不同程度的連接子。雖然觀察到的異質(zhì)性通常不會對蛋白質(zhì)亞基的詳細(xì)表征產(chǎn)生負(fù)面影響，但有助于直接表征連接子，但有時需要更均勻的消化產(chǎn)物來詳細(xì)分析單個蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域。該酶在pH 值范圍為 5.0 至 9.0 時顯示出活性。

Genovis酶的適應(yīng)性和更高的通量和自動化工作流程的中級方法，這是非常重要的。 隨著分析方法和儀器的改進(jìn)，在表征實驗室中有更大的能力進(jìn)行更多類型的分析，或者在工藝開發(fā)或QC實驗室中有更先進(jìn)的分析儀器。 當(dāng)涉及到能夠支持大量樣本分析的活動時，例如克隆篩選，工藝開發(fā)和驗證以及穩(wěn)定性研究，這是非常好的。 此外，Genovis產(chǎn)品的效率、健壯性（Robust）和易用性使它們更容易應(yīng)用于這些類型的工作，而且，也適用于受控環(huán)境中的批次放行方法。Genovis的產(chǎn)品很好地支持這種類型的工作，這也促使Genovis不斷推出新產(chǎn)品和現(xiàn)有產(chǎn)品的不同形式，以支持客戶的工作。該酶對具有突變鉸鏈區(qū)域的抗體（如 LALA 突變）具有活性。重慶FabRICATORIdeS蛋白酶抗體酶切

IgASAP Sub1 的消化位點位于該擴(kuò)展區(qū)域，使IgASAP酶具有 IgA1 特異性。安徽GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切

當(dāng)你應(yīng)用像肽圖這樣的方法時，你可以從Genovis中級方法中獲得的信息量就沒有那么多了。一個主要的區(qū)別是你不能像在肽水平上那樣將修改定位到單個氨基酸。然而，中級分析比肽圖譜具有快速和簡單的巨大優(yōu)勢，因為需要分析的色譜峰要少得多，數(shù)據(jù)處理任務(wù)要簡單得多。此外，在中級實驗中，手工實驗步驟要少得多，F(xiàn)abALACTICA（IdeS）酶切消化方法不需要針對不同的人體IgG1進(jìn)行優(yōu)化。一旦在氨基酸水平上進(jìn)行了PTM表征，我們非常認(rèn)為中級表征肽圖的一種補(bǔ)充方法，可以在更常規(guī)的基礎(chǔ)上應(yīng)用。中級分析更適用于高通量或監(jiān)測類型的方法，并可用于支持肽圖分析。安徽GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切