RNA全基因組病毒二代測序

來源: 發(fā)布時間:2022-09-16

病毒全基因組測序,基因測序技術能鎖定個人病變基因,提前預防和調整。自上世紀90年代初,學界開始涉足“人類基因組計劃”。而傳統的測序方式是利用光學測序技術。用不同顏色的熒光標記四種不同的堿基,然后用激光光源去捕捉熒光信號從而獲得待測基因的序列信息。雖然這種方法檢測可靠,但是價格不菲也是有目共睹的,一臺儀器的價格大約在50萬到75萬美元,而檢測一次的費用也高達5千到1萬美元。新的基因測序儀中,芯片代替了傳統激光鏡頭、熒光染色劑等,芯片就是測序儀。全基因組測序的覆蓋面廣。RNA全基因組病毒二代測序

病毒(Virus)由一種核酸分子(DNA或RNA)與蛋白質(Protein)構成或由蛋白質構成(如朊病毒)。根據遺傳物質的組成,可分為單鏈DNA病毒(ssDNA)、雙鏈DNA病毒(dsDNA)、單鏈RNA病毒(ssRNA)、雙鏈RNA病毒(dsRNA)和蛋白質病毒(如朊病毒)。根據宿主類型的不同,可以分為噬菌體(細菌病毒)、植物病毒(煙花葉病毒)和動物病毒(如禽流感病毒、天花病毒和HIV等)。病毒全基因組測序(VirusWholeGenomeSequencing,VWGS),是指基于第二代高通量測序技術,對病毒全基因組進行測序,利用生物信息分析手段,得到病毒的全基因組序列,解析編碼信息,并獲得相應的變異信息。RNA病毒基因測序分析公司全基因組測序可以檢測個體基因組中的全部遺傳信息,準確性高。

在哪些應用場景需要對病毒的全基因組進行測序?在探普生物長時間運行過程中,我們接觸到的對病毒的全基因組進行測序項目有比較豐富的應用場景。先,從事基因進化/疫苗/藥品/抗體研制方向的研究的研究者一定會用到測序。這種場景一般是用密集的sanger測序監(jiān)測某幾個關鍵基因,搭載一定頻率的全基因組測序。這樣的組合省時省力省經費,同時能達到研究目的。此外,有的單位需要對傳染病的病原進行流行病學監(jiān)測和研究,如疾控/疫控中心、醫(yī)院的傳染病科室以及一些高校和研究所的相應課題組,可能需要對病毒的全基因組進行測序以后,結合其他上下游的研究數據,達到研究或者監(jiān)測疫病的目的。

目前對我國首例輸入性裂谷熱病例病毒進行全基因組測定,分析其進化來源及潛在變異.方法提取樣本核酸,非特異性反轉錄擴增病毒基因組RNA,使用IonTorrent二代測序儀進行病毒全基因組測定.對獲得的基因組數據進行序列拼接、比對、進化樹構建和關鍵位點分析.結果通過測定獲得了病毒全基因組11979nt,該測定病毒屬E基因分支,序列與先前南非分離株Kakamas相似度較高(>98%).病毒Gn蛋白C端信號肽區(qū)存在1個氨基酸突變.結論本研究分析測定的裂谷熱病毒全基因組與目前非洲流行株高度相似,病毒基因特征未出現明顯變異。傳統Sanger測序相比,NGS技術的發(fā)展使得一個小的研究小組可以擁有大量病毒株的全基因組序列。

病毒全基因組測序定:探普生物對病毒的全基因組進行測序的實驗基于二代測序技術。樣本經過核酸純化-文庫構建-生物信息學分析這3大基本流程后轉換成了序列數據。先,在核酸純化環(huán)節(jié),探普提供專門針對性的核酸純化樣本指南,以提高目的物種的核酸純度和得率,與此同時探普生物也提供核酸純化服務。第二,文庫構建環(huán)節(jié),樣本的核酸具備濃度低,總量少的特點。探普生物專門針對這一點開發(fā)了超微量核酸文庫構建,可以將0.01ng/μl甚至更低濃度的核酸構建成測序文庫。第三,生物信息學分析環(huán)節(jié)。生存環(huán)境和狀態(tài)決定了對病毒的全基因組進行測序的下機數據一般都伴隨大量的宿主和其他微生物的數據。探普生物基于該特點,優(yōu)化了自有數據庫,搭載了專門用的的生物信息學分析流程,可處理復雜背景下的目標物種序列。病毒全基因組測序是針對疑難報告,由**進行深度解析。病毒全序列測序分析原理

全基因組測序覆蓋面廣。RNA全基因組病毒二代測序

對病毒的全基因組進行測序:對病毒的全基因組進行測序主要是通過非特異性擴增+克隆結合sanger測序來完成的。當物種有了參考的序列之后,可以通過特異性擴增+sanger測序獲得全基因組序列。Sanger測序準確度高,讀長很長,但與此同時,擴增和克隆工作費時費力,由于流程繁瑣,加上快速變異導致引物無法通用,該方法對于大量基因組的測序工作而言,可操作性不強,這對于研究者一直是一個困擾。高通量測序技術正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標準濃度和體積后進行測序和分析,減少了工作量,增加了成功率。探普生物進行了大量有針對性的研發(fā)和測試,開發(fā)了全套的實驗和分析流程用于對病毒的全基因組進行測序,該流程自運行以來廣受研究者們好評。RNA全基因組病毒二代測序

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