閔行區(qū)C57小鼠疾病動(dòng)物模型建模

疾病動(dòng)物模型和人類的關(guān)系科學(xué)研究是探索未知，實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果往往會(huì)出乎意外，不受人為的控制，所以關(guān)乎人類本身的研究，在人體上進(jìn)行試驗(yàn)，風(fēng)險(xiǎn)很大；對(duì)一些數(shù)量很少的珍稀動(dòng)物，或一些因體型龐大，不易實(shí)施操作的種類，往往用取材容易，操作簡(jiǎn)便的另一種動(dòng)物來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，代替人類或原來(lái)的目標(biāo)動(dòng)物，這就是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。為了保證這些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)更科學(xué)、準(zhǔn)確和重復(fù)性好，用各種方法把一些需要研究的生理或病理活動(dòng)相對(duì)穩(wěn)定地顯現(xiàn)在標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物身上，供實(shí)驗(yàn)研究之用。這就稱之為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的動(dòng)物模型。早期階段科學(xué)假說(shuō)與疾病潛在藥物治療效果評(píng)價(jià)始于小鼠疾病模型構(gòu)建及其實(shí)驗(yàn)室研究。閔行區(qū)C57小鼠疾病動(dòng)物模型建模

    ng）=×片段堿基對(duì)數(shù)（單片段）；適片段用量（ng）=×片段堿基對(duì)數(shù)（多片段）。注1：?jiǎn)纹沃亟M反應(yīng)，若單個(gè)插入片段的長(zhǎng)度大于載體，則應(yīng)將載體與插入片段的計(jì)算公式互換；注2：?jiǎn)纹沃亟M反應(yīng)，若單個(gè)插入片段的長(zhǎng)度小于200bp，則插入片段應(yīng)使用5倍的用量；注3：多片段重組反應(yīng)，各個(gè)插入片段的用量應(yīng)不少于10ng，使用上述公式計(jì)算適使用量低于此值時(shí)，直接使用10ng；注4：若按上述公式計(jì)算出的線性化載體用量低于50ng或高于200ng，建議按50ng或200ng用量使用；注5：線性化載體過(guò)長(zhǎng)，插入片段過(guò)長(zhǎng)或片段數(shù)過(guò)多，克隆陽(yáng)性率均會(huì)降低。2、體系反應(yīng)；1、配制完成后，用移液器輕輕吸打混勻各組分，避免產(chǎn)生氣泡，切勿渦旋；2、將反應(yīng)體系置于50℃，反應(yīng)5~60min。3、將反應(yīng)液離心管置于冰上冷卻，之后進(jìn)行轉(zhuǎn)化或者儲(chǔ)存于-20℃注1：推薦使用PCR儀等溫控的儀器進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間不足或太長(zhǎng)克隆效率均會(huì)降低；注2：插入1~2個(gè)片段時(shí)，推薦反應(yīng)時(shí)間為5~1min；插入3~5個(gè)片段時(shí)，推薦反應(yīng)時(shí)間為15~30min；注3：當(dāng)載體骨架在10kb以上或插入片段總長(zhǎng)在4kb以上時(shí)，推薦延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間至30~60min；注4：建議在50℃反應(yīng)完成后進(jìn)行瞬時(shí)離心，將反應(yīng)液收集至管底。注5：-20℃儲(chǔ)存的重組產(chǎn)物。纖維化疾病動(dòng)物模型建模原理動(dòng)物疾病模型廣泛應(yīng)用于新藥靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)及篩選。

建立一種理想的腰椎間盤(pán)突出的動(dòng)物模型對(duì)本病的機(jī)制研究和臨床防治具有重要意義?，F(xiàn)有模型對(duì)腰椎間盤(pán)突出癥的模擬均存在明顯不足，或與臨床實(shí)際病變部位有一定差距，如慢性坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型；或操作難度大，對(duì)動(dòng)物損傷重，如自體髓核移植模型，選擇性神經(jīng)根結(jié)扎模型。因此，急需一種新的操作簡(jiǎn)單，重復(fù)率高，穩(wěn)定且能準(zhǔn)確模擬腰椎間盤(pán)突出后癥狀的動(dòng)物模型。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了建立一種操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定好且能準(zhǔn)確模擬腰椎間盤(pán)突出后癥狀的動(dòng)物模型，本發(fā)明提供了一種大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型的制備方法。其包括以下步驟：步驟一、麻醉大鼠；步驟二、于大鼠腰4到骶1水平左側(cè)或右側(cè)作縱行切口，切開(kāi)皮膚，鈍性分離椎旁肌，暴露腰4椎間孔和腰5椎間孔；步驟三、將壓迫元件插入到左側(cè)或右側(cè)腰4椎間孔及腰5椎間孔中，得到大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型。其中，步驟一具體為：腹腔注射1％戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉大鼠后，將大鼠背部剃毛，碘伏消毒背部皮膚，俯臥位固定于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上，鋪無(wú)菌巾。在一個(gè)具體實(shí)施方式中，壓迫元件為l型棒；步驟三具體為：將2根l型棒的***端分別插入到左側(cè)或右側(cè)腰4椎間孔及腰5椎間孔中，l型棒的第二端置于腰4椎間孔及腰5椎間孔外。

pcrmix：反應(yīng)條件：pcr擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳鑒定結(jié)果如圖3所示，從圖3中可以看出，6、8、9號(hào)為pirb基因敲入小鼠在、，wt小鼠pcr產(chǎn)物沒(méi)有這兩個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物。(c)短鏈pcr反應(yīng)，引物如下：primers(℃):forwardprimer(f4):5’-aacaatcaggctgccgaatctg-3’reverseprimer(r4):5’-ctttattagccagaagtcagatgc-3’expectedpcrproduct:targetedallele:344bppirb基因敲入型小鼠能夠擴(kuò)增出344bp的產(chǎn)物，而野生型沒(méi)有。pcr體系：反應(yīng)條件：(2)f1代小鼠測(cè)序：通過(guò)pcr擴(kuò)增后測(cè)序鑒定小鼠基因型，如圖4所示，為6號(hào)pirb基因敲入小鼠測(cè)序峰圖，pcr所用引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1：5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer(r3):5’-atactccgaggcggatcacaa-3’(3)southern雜交檢測(cè)f1代小鼠基因型：采用bamhi和avrii核酸內(nèi)切酶切割dna分子，切割示意圖如圖5。具體的southern雜交檢測(cè)過(guò)程如下：步驟a、提取f1代小鼠尾部dna；步驟b、制備探針，通過(guò)pcr方法將dig-dutp滲入到步驟a的dna分子中。上海東寰告訴您如何選擇好的動(dòng)物模型。

    流水線作業(yè)，這樣能節(jié)省時(shí)間，并且能保證樣品的質(zhì)量。如果請(qǐng)人，每個(gè)人需要負(fù)責(zé)哪一板塊的工作，比如誰(shuí)負(fù)責(zé)麻醉，誰(shuí)負(fù)責(zé)取血液，誰(shuí)負(fù)責(zé)取，誰(shuí)負(fù)責(zé)拍照、誰(shuí)負(fù)責(zé)儲(chǔ)存，都需要提前規(guī)劃交代清楚。實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)如果是需要自己做的檢測(cè)，比如常見(jiàn)的WesternBlot、PCR，建議提前可以看看教程（無(wú)論是視頻還是貼吧，都要自己多方參考）。有了一定的理論基礎(chǔ)后，再向老師、師兄師姐學(xué)習(xí)經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)，如果實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的儀器需要提前預(yù)約，建議提前規(guī)劃好使用的時(shí)間。反復(fù)總結(jié)尋找答案在整個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中可能會(huì)出現(xiàn)很多問(wèn)題。比如造模效果欠佳、灌胃操作不當(dāng)、腹腔注射操作失誤、使用不當(dāng)?shù)纫饎?dòng)物死亡。每遇到問(wèn)題都需要自己想辦法解決，可以從導(dǎo)師、師兄師姐、文獻(xiàn)、貼吧、視頻教程等找到答案。比如筆者曾遇到同樣的給藥，發(fā)現(xiàn)有的大鼠麻醉得很深，有的大鼠還活蹦亂跳，在反復(fù)嘗試調(diào)整濃度，給藥劑量，更換麻醉方式，后來(lái)才發(fā)現(xiàn)是動(dòng)物體重秤的準(zhǔn)度有問(wèn)題，導(dǎo)致體重秤得不準(zhǔn)。因此，需要自己反復(fù)琢磨到底是實(shí)驗(yàn)過(guò)程中哪一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題，逐一排除。也要求在每一個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟需要標(biāo)準(zhǔn)化，統(tǒng)一化，盡可能的排除干擾因素，這樣方便在遇到問(wèn)題快的找到答案。同時(shí)，建議每日總結(jié)。疾病動(dòng)物模型建模好做嗎？泰州疾病動(dòng)物模型建模優(yōu)勢(shì)

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誘導(dǎo)模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：小鼠、豚鼠、大鼠造模試劑：煙霧、空氣污染物及有害氣體（PM2.5、臭氧、二氧化氮）、脂多糖、彈性蛋白酶獲得方式：動(dòng)物全身長(zhǎng)時(shí)間放置在密閉容器內(nèi)，暴露于煙霧、空氣污染物或者有害氣體；氣管內(nèi)滴注脂多糖或者彈性蛋白酶。模型特點(diǎn)：煙霧、空氣污染物或者有害氣體誘導(dǎo)模型使用的物質(zhì)、暴露的劑量、頻次和時(shí)間不盡相同；脂多糖造模時(shí)間短，可用來(lái)模擬急性加重反應(yīng)，但不能反應(yīng)慢性病變的過(guò)程，通常需要和其他造模方法聯(lián)用。2.基因模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：α1-抗胰蛋白酶等基因敲除小鼠獲得方式：直接購(gòu)買(mǎi)模型特點(diǎn)：α1-抗胰蛋白酶基因敲除小鼠是經(jīng)典的COPD轉(zhuǎn)基因模型，更準(zhǔn)確地理解易感基因的致病機(jī)制。閔行區(qū)C57小鼠疾病動(dòng)物模型建模