Recombinant Human FLRT1 Protein

IdeSProtease是一種免疫球蛋白G（IgG）特異性降解酶，它能夠在IgG的鉸鏈區(qū)下方的一個(gè)特定位點(diǎn)進(jìn)行切割，產(chǎn)生F(ab')2和Fc片段。這種酶是通過(guò)大腸桿菌（E.coli）表達(dá)系統(tǒng)重組表達(dá)生產(chǎn)的，并且經(jīng)過(guò)分子改造，使其具有更高的酶活和更廣的底物特異性。在生產(chǎn)過(guò)程中，確保IdeSProtease符合GMP（良好生產(chǎn)規(guī)范）標(biāo)準(zhǔn)，需要進(jìn)行以下步驟：1.**分子改造**：通過(guò)分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)IdeS進(jìn)行改造，增強(qiáng)其穩(wěn)定性和比活性。2.**大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)**：利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行IdeS的重組表達(dá)，確保無(wú)動(dòng)物源性成分，減少病毒污染風(fēng)險(xiǎn)。3.**純化**：通過(guò)高度純化過(guò)程，確保IdeS的純度達(dá)到≥95%。4.**酶活定義**：1個(gè)酶活力單位定義為在37°C條件下，30分鐘內(nèi)酶切1μg重組單克隆IgG所需的酶量。5.**質(zhì)量控制**：每批產(chǎn)品都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制，以確保產(chǎn)品批間穩(wěn)定性和高穩(wěn)定性。6.**儲(chǔ)存條件**：采用適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存條件，如-30℃至-10℃凍存，確保產(chǎn)品在有效期內(nèi)保持活性和穩(wěn)定性。7.**微生物學(xué)安全性檢測(cè)**：進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)、體內(nèi)有毒物質(zhì)的檢測(cè)、抗生物質(zhì)殘留檢測(cè)、宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)和病毒安全性檢測(cè)，確保產(chǎn)品符合微生物學(xué)安全性要求。

N末端His標(biāo)簽的泛素蛋白（RecombinantHumanUbiquitinProteinTagged-HisTag,UB）是一種經(jīng)過(guò)遺傳工程改造，在其N末端融合了His標(biāo)簽的泛素蛋白。以下是這種蛋白的一些特點(diǎn)：1.**His標(biāo)簽**：N末端His標(biāo)簽是一種常見(jiàn)的融合標(biāo)簽，用于提高蛋白質(zhì)的可溶性和便于通過(guò)親和層析進(jìn)行純化。His標(biāo)簽通常由6到10個(gè)組氨酸（His）組成。2.**重組表達(dá)**：這種泛素蛋白通常在大腸桿菌（E.coli）或其他宿主細(xì)胞中通過(guò)重組DNA技術(shù)表達(dá)。3.**高度保守**：泛素蛋白是一個(gè)76個(gè)氨基酸殘基的多肽，在真核生物中高度保守。4.**分子量**：由于N末端添加了His標(biāo)簽，重組泛素蛋白的分子量會(huì)略大于天然泛素（約8.5kDa）。5.**純度**：重組泛素蛋白通常具有高純度（>95%bySDS-PAGE），適合用于各種生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。6.**溶解性**：His標(biāo)簽的添加可以提高蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解性，便于實(shí)驗(yàn)操作。7.**穩(wěn)定性**：凍干粉形式的重組泛素蛋白在-25~-15℃保存，具有較長(zhǎng)的有效期，通常為一年。8.**應(yīng)用廣**：N末端His標(biāo)簽的泛素蛋白可用于多種實(shí)驗(yàn)，包括蛋白質(zhì)泛素化、E3泛素連接酶活性測(cè)定、蛋白質(zhì)相互作用研究等。Recombinant Human IL-1 Rrp2/IL-1 R6 Protein,hFc Tag將含有重組質(zhì)粒的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞中，通常是大腸桿菌或其他合適的細(xì)胞系。

通過(guò)SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）和Westernblot（西方印跡）可以有效地檢測(cè)帶有His標(biāo)簽的泛素蛋白的純度和完整性。以下是進(jìn)行這些檢測(cè)的步驟：###SDS-PAGE步驟：1.**樣品準(zhǔn)備**：-將重組泛素蛋白溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中，通常含有還原劑（如DTT或β-巰基乙醇）以斷裂二硫鍵。-將樣品在95-100°C下加熱5分鐘以變性蛋白質(zhì)。2.**凝膠準(zhǔn)備**：-根據(jù)需要的分辨率選擇合適的凝膠濃度（例如，12%或15%凝膠用于檢測(cè)20-100kDa的蛋白質(zhì)）。3.**上樣**：-將變性后的樣品加入到凝膠的相應(yīng)孔中，同時(shí)加入分子量標(biāo)記物作為參照。4.**電泳**：-在恒定電壓或恒定電流下進(jìn)行電泳，直到樣品在凝膠中充分分離。5.**染色**：-使用考馬斯亮藍(lán)或其他蛋白質(zhì)染色劑對(duì)凝膠進(jìn)行染色，以可視化蛋白質(zhì)條帶。6.**分析**：-通過(guò)比較樣品條帶與分子量標(biāo)記物，評(píng)估蛋白質(zhì)的分子量和純度。###Westernblot步驟：1.**轉(zhuǎn)膜**：-將SDS-PAGE分離的蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到PVDF或硝酸纖維素膜上。2.**封閉**：-使用封閉液（如5%脫脂奶粉或1%BSA溶液）封閉膜上未被蛋白占據(jù)的部分，以減少非特異性結(jié)合。3.**一抗孵育**：-使用特異性識(shí)別His標(biāo)簽的抗體（一抗）與膜上的蛋白質(zhì)孵育，通常在4°C過(guò)夜。

重組人血清白蛋白（rHSA），特別是通過(guò)植物表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)產(chǎn)品，以其高純度和質(zhì)量一致性而受到科研和工業(yè)界的重視。以下是高純度rHSA的一些關(guān)鍵特點(diǎn)和意義：1.**純度標(biāo)準(zhǔn)**：高純度的rHSA通常意味著蛋白質(zhì)含量達(dá)到99%以上，這通常通過(guò)高效液相色譜（HPLC）、SDS-PAGE電泳等方法進(jìn)行驗(yàn)證。2.**內(nèi)素水平**：內(nèi)素水平是衡量蛋白質(zhì)純度的一個(gè)重要指標(biāo)。高純度rHSA的內(nèi)素水平通常非常低（例如，≤0.5EU/ml），這有助于減少細(xì)胞培養(yǎng)中潛在的內(nèi)素污染。3.**宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留**：高純度rHSA的宿主細(xì)胞蛋白殘留量非常低，這有助于減少細(xì)胞培養(yǎng)中外來(lái)蛋白的干擾。4.**無(wú)動(dòng)物源成分**：由于rHSA是通過(guò)植物表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的，因此不含有動(dòng)物源性成分，這降低了動(dòng)物源性疾病傳播的風(fēng)險(xiǎn)。5.**批次一致性**：高純度rHSA的生產(chǎn)過(guò)程通常在嚴(yán)格控制的條件下進(jìn)行，確保不同批次之間的質(zhì)量一致性，這對(duì)于科學(xué)研究和商業(yè)生產(chǎn)至關(guān)重要。6.**應(yīng)用廣**：高純度rHSA在細(xì)胞培養(yǎng)、生物制藥、藥物載體、疫苗開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域有著廣的應(yīng)用。7.**安全性**：高純度rHSA的生產(chǎn)過(guò)程不涉及動(dòng)物源材料，因此可以降低血源性疾病的風(fēng)險(xiǎn)，提高產(chǎn)品的安全性。通過(guò)SDS-PAGE、Western blot、質(zhì)譜等方法驗(yàn)證蛋白的純度和分子量。通過(guò)活性測(cè)試評(píng)估蛋白的生物活性。

PreScissionProtease（PSP）在去除融合蛋白標(biāo)簽時(shí)，對(duì)目的蛋白的純度和活性的影響通常是積極的，具體表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：1.**小化污染**：由于PSP具有高度的特異性，它在特定的肽鍵處切割，從而減少了非特異性切割可能導(dǎo)致的蛋白質(zhì)片段，這有助于保持目的蛋白的純度。2.**減少蛋白質(zhì)修飾**：PSP的特異性切割有助于避免在切割過(guò)程中對(duì)目的蛋白引入額外的修飾，如磷酸化或糖基化，這些修飾可能會(huì)影響蛋白質(zhì)的活性和穩(wěn)定性。3.**保持活性**：如果融合蛋白標(biāo)簽的設(shè)計(jì)和切割位點(diǎn)選擇得當(dāng)，PSP切割后的目的蛋白通常能夠保持其原有的生物活性。切割位點(diǎn)通常位于標(biāo)簽和目的蛋白之間，這樣切割后不會(huì)在目的蛋白上留下額外的氨基酸，從而減少了對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的影響。4.**提高純度**：PSP切割后，可以通過(guò)親和層析等方法將標(biāo)簽、PSP以及未切割的融合蛋白分離，從而獲得高純度的目的蛋白。5.**便于后續(xù)分析**：去除標(biāo)簽后的目的蛋白更易于進(jìn)行后續(xù)的質(zhì)譜分析、晶體學(xué)研究或其他生物化學(xué)分析，因?yàn)槿コ丝赡芨蓴_分析的標(biāo)簽部分。6.**穩(wěn)定性**：在某些情況下，融合蛋白的標(biāo)簽可能有助于穩(wěn)定目的蛋白的構(gòu)象，因此在去除標(biāo)簽后，需要適當(dāng)處理以維持目的蛋白的穩(wěn)定性。TBE (Thymine base editor)：這是一種新型的堿基編輯工具，不依賴脫氨酶，能夠通過(guò)人源化尿嘧啶DNA-糖基化酶。Recombinant Canine GDF15 Protein,His Tag

在目標(biāo)蛋白的C末端添加His標(biāo)簽和Avi標(biāo)簽。有助于通過(guò)親和層析進(jìn)行蛋白純化，而Avi標(biāo)簽則可以用于生物素。Recombinant Human FLRT1 Protein,His Tag

EndoS糖苷內(nèi)切酶S在抗體藥物偶聯(lián)物（ADCs）研究中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在糖鏈定點(diǎn)偶聯(lián)技術(shù)上。通過(guò)上海藥物所的研究，開(kāi)發(fā)了一種新穎的糖鏈定點(diǎn)ADC制備策略，利用EndoS2這種糖苷內(nèi)切酶，可以將小分子細(xì)胞毒藥物“一步”定點(diǎn)連接到抗體的糖基化位點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了糖鏈定點(diǎn)ADC化合物的制備。定點(diǎn)偶聯(lián)技術(shù)相比傳統(tǒng)的隨機(jī)偶聯(lián)具有更好的方法指數(shù)，能夠提高ADC的均一性和穩(wěn)定性，是當(dāng)前ADC領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。在抗體的Fc結(jié)構(gòu)域N297位，這是一個(gè)保守的糖基化位點(diǎn)，通過(guò)在該位點(diǎn)引入細(xì)胞物質(zhì)，可以形成具有優(yōu)勢(shì)的糖鏈定點(diǎn)ADC化合物（glycosite-specificADCs,gsADCs）。此外，EndoS2對(duì)多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性，能夠高效獲得功能修飾的糖工程抗體，并且可以用于抗體的內(nèi)吞成像研究及糖鏈延伸等功能化研究。研究人員通過(guò)這種“一步”制備策略得到的糖鏈定點(diǎn)ADC化合物，在結(jié)構(gòu)均一性、親水性、體外穩(wěn)定性以及體外活性方面表現(xiàn)良好，并且在體內(nèi)瘤抑制活性方面，相比陽(yáng)性對(duì)照ADC化合物，在低載藥量的情況下具有更強(qiáng)的抑制效果。EndoS酶的這些應(yīng)用，不僅展示了其在簡(jiǎn)化ADC制備流程中的潛力，還有助于推動(dòng)定點(diǎn)ADC藥物的深入發(fā)展，為未來(lái)的生物藥物開(kāi)發(fā)提供了新的思路和方法。Recombinant Human FLRT1 Protein,His Tag