在PCR產(chǎn)物的克隆中,Lambda核酸外切酶(λExonuclease)有其特定的應(yīng)用和優(yōu)勢(shì),但它不能完全替代其他酶。以下是一些替代酶和它們的特點(diǎn):1.**ExonucleaseIII(ExoIII)**:-ExoIII具有3'→5'外切脫氧核糖核酸酶活性,尤其適合雙鏈DNA的平末端、5'-突出末端或切口,從DNA鏈的3'-端釋放5'-單磷酸核苷酸,產(chǎn)生單鏈DNA片段。-與Lambda核酸外切酶相比,ExoIII對(duì)具有3'-突出末端的DNA有活性,而Lambda核酸外切酶則對(duì)5'-磷酸化的雙鏈DNA有更高的活性。2.**TaqDNA聚合酶**:-在平端克隆中,可以使用TaqDNA聚合酶和dATP進(jìn)行“3'dA加尾”,以提高連接效率。-這種方法通過在PCR產(chǎn)物的3'端添加突出的腺嘌呤(dA),增加了與載體連接的可能性,從而提高克隆效率。3.**TOPO克隆載體**:-TOPO克隆載體含有共價(jià)連接的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I,可同時(shí)作為限制性內(nèi)切酶和連接酶。-與傳統(tǒng)PCR克隆載體相比,TOPO克隆載體具有更短的連接反應(yīng)時(shí)間、更高的克隆效率以及更簡單的分子克隆實(shí)驗(yàn)方案。綜上所述,雖然Lambda核酸外切酶在特定情況下非常有用,但它不能完全替代其他酶。每種酶都有其獨(dú)特的特性和應(yīng)用場(chǎng)景,選擇合適的酶取決于具體的克隆需求和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。泛素從E1轉(zhuǎn)移到泛素結(jié)合酶E2的活性位點(diǎn)半胱氨酸殘基上,形成E2-泛素硫酯中間體。Recombinant Human CYR61
磁珠法在基因克隆中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:1.**質(zhì)粒DNA的提取**:磁珠法可以用于從細(xì)菌細(xì)胞中提取質(zhì)粒DNA,這對(duì)于質(zhì)粒的克隆和表達(dá)至關(guān)重要。通過磁珠法提取的質(zhì)粒DNA純度高,適合用于后續(xù)的酶切、連接、轉(zhuǎn)化等分子克隆步驟。2.**基因組DNA的提取**:磁珠法可以用于從各種生物樣本中提取基因組DNA,這對(duì)于基因組的克隆和分析非常重要。提取的基因組DNA可以用于PCR擴(kuò)增、基因表達(dá)分析、基因突變檢測(cè)等。3.**mRNA的提取和純化**:在mRNA克隆中,磁珠法可以用于提取和純化mRNA,這對(duì)于cDNA的合成和基因表達(dá)分析非常關(guān)鍵。磁珠法提取的mRNA純度高,可以用于后續(xù)的cDNA合成和RT-PCR等實(shí)驗(yàn)。4.**PCR產(chǎn)物的純化**:磁珠法可以用于純化PCR產(chǎn)物,去除反應(yīng)中的酶、dNTPs和其他雜質(zhì),為克隆PCR產(chǎn)物提供高純度的DNA模板。5.**DNA片段的篩選和回收**:在基因克隆過程中,可能需要從多個(gè)DNA片段中篩選出特定大小或序列的片段。磁珠法可以用于DNA片段的篩選和回收,提高克隆效率。6.**自動(dòng)化和高通量操作**:磁珠法易于與自動(dòng)化設(shè)備結(jié)合,適合高通量樣本處理,這對(duì)于大規(guī)?;蚩寺№?xiàng)目尤為重要。自動(dòng)化操作減少了人為操作誤差,提高了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和可靠性。Recombinant Human HB-EGF泛素蛋白是一種在真核細(xì)胞中存在的小分子蛋白質(zhì),由76個(gè)氨基酸殘基組成,具有高度的保守性。
Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一種從嗜熱脂肪芽孢桿菌(Thermophilic Geobacillus sp)DNA聚合酶I衍生的酶,缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是關(guān)于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些關(guān)鍵信息:來源和特性:Bst Plus DNA Polymerase 具有更強(qiáng)的5'-3' DNA聚合酶活性、鏈置換活性和dUTP耐受性,適合用于抗污染的等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),如LAMP和CPA等。應(yīng)用:主要應(yīng)用于等溫DNA擴(kuò)增,包括環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)和其他等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。規(guī)格:活性定義:1 U指的是在65°C下30分鐘內(nèi)將10 nmol的dNTP整合到酸不溶物質(zhì)中的酶的量。溶液成分:包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油,pH 7.5 @ 25℃。產(chǎn)品形式:提供的產(chǎn)品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL),貨號(hào)14402ES,以及凍干粉形式的產(chǎn)品,貨號(hào)14405ES,不含甘油。靈敏度和穩(wěn)定性:Bst Plus DNA Polymerase 具有高靈敏度,低至5copies目的基因可測(cè),且在飛克(fg)級(jí)別的模板量下也能快速達(dá)到閾值。在37°C下,該酶可以保持相對(duì)穩(wěn)定的效應(yīng)長達(dá)5天,并且在-20℃下可以穩(wěn)定保存2年。儲(chǔ)存條件:建議在-25℃至-15℃下儲(chǔ)存,以保持產(chǎn)品活性,并避免反復(fù)凍融。
牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)與細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的主要區(qū)別如下:1.**來源不同**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I來源于牛痘病毒,是一種真核生物病毒中的酶。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶則來源于原核生物,如大腸桿菌的ω蛋白等。2.**功能特性**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I能夠解旋DNA的超螺旋結(jié)構(gòu),并且識(shí)別并切割雙鏈DNA末端[5’C(T)CCTT],與DNA形成共價(jià)連接形成穩(wěn)定復(fù)合物,遇到DNA的5’-OH基團(tuán)后,重新連接形成完整DNA鏈。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶,如大腸桿菌的ω蛋白,主要功能是催化DNA鏈斷開和結(jié)合的偶聯(lián)反應(yīng),以改變DNA的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。3.**活性條件**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I即使在Mg2+不存在的條件下也顯示活性。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶可能需要Mg2+等金屬離子作為輔因子來發(fā)揮活性。4.**作用的DNA鏈**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I能使正負(fù)兩方的超螺旋分子均形成松散型。-原核生物由來的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I只作用負(fù)鏈的超螺旋分子。5.**共價(jià)鍵形成**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I與DNA形成共價(jià)連接,此酯鍵中所貯存的能量可能在切斷端的再結(jié)合上起著作用。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶在原核生物中是游離型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端與酶形成共價(jià)鍵。
FnCas12a包含約1300個(gè)氨基酸,含有RuvC-like結(jié)構(gòu)域,同時(shí)具有DNA和RNA內(nèi)切酶的活性。
磁珠法提取的DNA通常指的是通過磁珠吸附技術(shù)從樣本中純化得到的核酸,而基因組DNA(gDNA)是指一個(gè)生物體細(xì)胞核中包含的全套遺傳信息的DNA。兩者的主要區(qū)別在于:1.**來源和組成**:-磁珠法提取的DNA可以是基因組DNA,也可以是質(zhì)粒DNA、線粒體DNA等其他類型的DNA。它是一個(gè)廣的概念,指的是通過磁珠法技術(shù)提取的任何類型的DNA。-基因組DNA特指一個(gè)生物體細(xì)胞核中的DNA,包含了所有的基因信息,以及可能的非編碼區(qū)域。它通常包含了大量的堿基對(duì),如人類基因組由大約30億個(gè)堿基對(duì)組成。2.**純度和應(yīng)用**:-磁珠法提取的DNA的純度和質(zhì)量取決于提取過程中的裂解、吸附、洗滌和洗脫步驟,以及磁珠的質(zhì)量和操作條件。高質(zhì)量的磁珠法提取的DNA可以用于多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),如PCR、克隆、測(cè)序等。-基因組DNA的提取通常需要考慮其完整性和純度,以確保后續(xù)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性?;蚪MDNA提取的難點(diǎn)在于血液樣本成分復(fù)雜,且白細(xì)胞體積占比低,因此提取純化難度較高。3.**提取方法**:-磁珠法提取DNA是一種高效、快速的核酸提取技術(shù),它利用磁珠表面修飾的特定官能團(tuán)與核酸的特異性結(jié)合,通過外加磁場(chǎng)實(shí)現(xiàn)核酸與雜質(zhì)的快速分離。多泛素化的靶蛋白被26S蛋白酶體識(shí)別。26S蛋白酶體由一個(gè)20S顆粒和兩個(gè)19S調(diào)節(jié)顆粒組成。Recombinant Human Ubiquitin Activating Enzyme E1 (UBE1)
研究表明,優(yōu)化后的Cas12a系統(tǒng)在多種細(xì)胞類型中表現(xiàn)出良好的編輯效率。Recombinant Human CYR61
BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads是一種利用磁珠技術(shù)從血液中提取基因組DNA的試劑盒。以下是一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**高效提取**:該試劑盒采用特殊的磁珠和緩沖體系,能夠快速且高效地從100μl至1ml的血液中分離和純化高質(zhì)量的基因組DNA。2.**磁珠特性**:獨(dú)特的磁珠具有很強(qiáng)的核酸親和力,在特定條件下可以快速分離和純化核酸。這些磁珠對(duì)磁場(chǎng)響應(yīng)迅速,使得提取過程既安全又便捷。3.**提取過程**:血液樣本在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解,釋放出的基因組DNA與磁珠特異性結(jié)合。通過磁分離架的作用,磁珠與溶液快速分離,經(jīng)過洗滌去除雜質(zhì),用洗脫液將基因組DNA從磁珠上洗脫下來。4.**應(yīng)用廣**:提取的基因組DNA可用于多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),如PCR擴(kuò)增、酶切、基因分型、Southern雜交、高通量測(cè)序、基因組DNA文庫構(gòu)建等。5.**操作簡便**:整個(gè)抽提過程大約需要50分鐘,操作簡便,無需使用有毒有害的有機(jī)試劑,如酚或氯仿,提高了實(shí)驗(yàn)的安全性。6.**高純度和高回收率**:提取的DNA純度高,A260/A280通常在1.7-1.9之間,表明蛋白和RNA的污染低?;厥章释ǔ3^80%。