雞血紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)樣品制作過程昭下:取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑:雞血=1:4),經(jīng)PBS清洗3次,再用5~10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細(xì)胞混合,室溫下振蕩醛化24h,Z后經(jīng)PBS再清洗,貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因?yàn)槲唇?jīng)熒光染色,所測(cè)光信號(hào)為雞血紅蛋白的自發(fā)熒光。流式細(xì)胞儀的使用方法:1、打開流式細(xì)胞儀的電源,對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)熱;2、打開氣體閾,調(diào)節(jié)壓力,獲得適宜的液流速度;開啟光源冷卻系統(tǒng);3、在樣品管中加入去離子水,沖洗液流的噴嘴系統(tǒng);4、利用校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)樣品,調(diào)整流式細(xì)胞儀,使在激光功率、光電倍增管電壓、放大器電路增益調(diào)定的基礎(chǔ)上,0°和90°散射的熒光強(qiáng)度強(qiáng),并要求變異系數(shù)為小;細(xì)胞分析儀可以通過化學(xué)反應(yīng)、節(jié)段反應(yīng)技術(shù)等獲取細(xì)胞的生化信息。上海Agilent流式細(xì)胞儀求購
流式細(xì)胞術(shù)為一種生物學(xué)技術(shù),計(jì)數(shù)和分選懸浮于流體中的微小顆粒是它的主要用途。這種技術(shù)能夠用來連續(xù)的多參數(shù)的分析流過光學(xué)或電子檢測(cè)器的一個(gè)個(gè)細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytoMetry,F(xiàn)CM)是通過檢測(cè)標(biāo)記的熒光信號(hào)使高速、逐一的定量分析和分選懸液中的單細(xì)胞或其他生物粒子得以實(shí)現(xiàn)的技術(shù)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則有哪些呢?將紅細(xì)胞去除的方法:紅細(xì)胞裂解法,有著簡(jiǎn)單的操作,比較快的速度,并且使原始標(biāo)本的白細(xì)胞分布盡可能保持。建議在染色后溶血。若需要在染色前溶血,則應(yīng)當(dāng)確保:溶血過程中不能改變抗原性。徹底洗去溶血?jiǎng)?,沒有影響到細(xì)胞和抗體結(jié)合的動(dòng)力反應(yīng)。固定劑不包含在所用的溶血?jiǎng)┲?,不然?huì)對(duì)細(xì)胞活性及表面標(biāo)記結(jié)果產(chǎn)生影響。密度梯度離心法,能夠比較好的回收靶細(xì)胞,并且可能得到富集,同時(shí)將紅細(xì)胞、碎片等去除。寧波實(shí)時(shí)無標(biāo)記活細(xì)胞3D成像系統(tǒng)細(xì)胞分析儀可通過快速識(shí)別和分析細(xì)胞,為新藥研發(fā)和臨床診療提供支持。
流式細(xì)胞儀在臨床細(xì)菌學(xué)中的應(yīng)用有:流式細(xì)胞儀泛用于細(xì)菌、病原體、血清抗體及藥敏試驗(yàn)。在免疫熒光方法中的流式微球捕獲芯片技術(shù)是流式細(xì)胞儀的一個(gè)新應(yīng)用,它將近似于細(xì)胞大小的微珠作為捕獲載體,使其攜帶已知熒光抗原或抗體,來捕獲檢測(cè)物中的相關(guān)抗體或抗原。由于遮蔽效應(yīng)可以使熒光微球的發(fā)散光減弱,應(yīng)用不同大小的熒光微球,可同時(shí)檢測(cè)同一標(biāo)本的多種抗原或抗體。這種方法能同時(shí)檢測(cè)單一液相樣本中多個(gè)目的蛋白(如同時(shí)測(cè)定多種細(xì)胞因子、多種自身抗體),檢測(cè)需用標(biāo)本量少,靈敏度高,重復(fù)性好,直接熒光標(biāo)記易于使用,檢測(cè)線性范圍寬,避免酶聯(lián)反應(yīng)所致的人工假象,可用于單細(xì)胞分子水平的多參數(shù)檢驗(yàn),也可用于寄生蟲、病毒或混合傳染的檢測(cè)。
細(xì)胞分析儀在生物學(xué)及微生物學(xué)上的用途:從早期到現(xiàn)在,在細(xì)胞及細(xì)胞器方面很多已被人們所接受的科技,都經(jīng)細(xì)胞分析儀研究過。在細(xì)胞功能的早期研究中,研究者只能通過觀測(cè)微生物的吞噬來研究噬中性粒子,而細(xì)胞分析儀可以通過它們的大小、形狀、抗體及吞噬過程中微生物種類、數(shù)量的變化更深入的辨別、研究這些噬中性粒子;氧自由基的實(shí)時(shí)、單細(xì)胞繁殖評(píng)價(jià),DNA倍體分析,細(xì)胞循環(huán)中細(xì)胞增殖和凋亡分析等都會(huì)用到細(xì)胞分析儀;細(xì)胞分析儀對(duì)細(xì)胞周期可以輕松分析,促進(jìn)了以此為基礎(chǔ)的植物學(xué)的發(fā)展,輔以成像儀器,細(xì)胞分析儀可以對(duì)微生物的成長(zhǎng)、繁殖進(jìn)行3-D研究。細(xì)胞分析儀非常適合進(jìn)行單個(gè)細(xì)胞熒光檢測(cè)、單個(gè)細(xì)胞質(zhì)量控制、單個(gè)細(xì)胞精確鑒定等操作。
在一個(gè)細(xì)胞中,除分析前向角和側(cè)向角的散射光參數(shù)外,還可以檢測(cè)到3種、4種、6種,甚至到8種熒光參數(shù),這明顯增加了流式細(xì)胞儀的信息量,提高了工作效率和科學(xué)性。流式細(xì)胞儀的重要功能之一是能分選出實(shí)驗(yàn)者所需要的任何細(xì)胞。其分選指標(biāo)主要包括:分選速度、分選純度和細(xì)胞回收率。這些指標(biāo)均隨流式細(xì)胞儀的技術(shù)發(fā)展而逐漸得到改善和提高。目前流式細(xì)胞儀分選細(xì)胞速度已達(dá)到6×104~1×105個(gè)/s,分選純度為99.9%以上,分選回收率也達(dá)90%以上。細(xì)胞分析儀可以進(jìn)行盡可能非侵入性的多重參數(shù)分析,即可同時(shí)獲得多種信息。上海Agilent流式細(xì)胞儀求購
細(xì)胞分析儀普遍應(yīng)用于生命科學(xué)、藥理學(xué)、遺傳學(xué)等領(lǐng)域。上海Agilent流式細(xì)胞儀求購
流式細(xì)胞儀的高速度:分析速度以每秒可分析的細(xì)胞數(shù)來表示。流式細(xì)胞儀是以高速度的數(shù)據(jù)處理電子系統(tǒng)信號(hào),配合GX的液流控制系統(tǒng),有力地保證了流式細(xì)胞儀的檢測(cè)功能。流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞的檢測(cè)速度一般為1000~5000個(gè)/s;而到目前為止,對(duì)細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)分析速度已達(dá)到了2×104個(gè)/s,Zda分析速度可達(dá)到6×104個(gè)/s。高靈敏度:靈敏度的高低是衡量流式細(xì)胞儀檢測(cè)微弱熒光信號(hào)的重要指標(biāo),一般是以能檢測(cè)到單個(gè)微球上Z少標(biāo)記有異硫氫酸熒光素(FITC)或藻紅蛋白(PE)熒光分子數(shù)目來表示。以前,每個(gè)細(xì)胞要帶有1000~3000個(gè)FITC分子才能在流式細(xì)胞儀上測(cè)量出來;目前,一個(gè)細(xì)胞上只要帶600個(gè)熒光分子,甚至帶100個(gè)FITC分子,即可以被檢測(cè)和分選出來。上海Agilent流式細(xì)胞儀求購