在一個(gè)細(xì)胞中,除分析前向角和側(cè)向角的散射光參數(shù)外,還可以檢測(cè)到3種、4種、6種,甚至到8種熒光參數(shù),這明顯增加了流式細(xì)胞儀的信息量,提高了工作效率和科學(xué)性。流式細(xì)胞儀的重要功能之一是能分選出實(shí)驗(yàn)者所需要的任何細(xì)胞。其分選指標(biāo)主要包括:分選速度、分選純度和細(xì)胞回收率。這些指標(biāo)均隨流式細(xì)胞儀的技術(shù)發(fā)展而逐漸得到改善和提高。目前流式細(xì)胞儀分選細(xì)胞速度已達(dá)到6×104~1×105個(gè)/s,分選純度為99.9%以上,分選回收率也達(dá)90%以上。細(xì)胞分析儀可根據(jù)熒光識(shí)別細(xì)胞內(nèi)不同的成分如蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞器等,并對(duì)這些成分進(jìn)行分析。上海Seahorse細(xì)胞能量代謝分析儀供貨商
由于各細(xì)胞或顆粒的大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、蛋白質(zhì)含量、核酸(DNA或RNA)含量等的不同,使得接收到的熒光信號(hào)和非熒光散射信號(hào)也不同,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)不同性質(zhì)的細(xì)胞或群體進(jìn)行分析和分類(lèi)。細(xì)胞分選原理:細(xì)胞分析儀的分選功能是由細(xì)胞分選器來(lái)完成的。在分選過(guò)程中,細(xì)胞分析儀通過(guò)高頻振蕩對(duì)液流施加液滴驅(qū)動(dòng)能量,使其斷離為均勻的液滴,根據(jù)事先確定的分選標(biāo)準(zhǔn)由系統(tǒng)判斷是否將被分選,由充電電路對(duì)選定的細(xì)胞液滴進(jìn)行充電。當(dāng)帶電液滴通過(guò)電場(chǎng)時(shí),會(huì)在電場(chǎng)的作用下向左或向右偏轉(zhuǎn),具體方向取決于液滴的電荷極性,未帶電荷的液滴不受電場(chǎng)的影響,它們將在ZX位置通過(guò),Z后進(jìn)入廢液抽吸器,發(fā)生偏轉(zhuǎn)的液滴落入相應(yīng)的收集器中,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分選。上海Seahorse細(xì)胞能量代謝分析儀供貨商細(xì)胞分析儀還可以進(jìn)行大規(guī)模細(xì)胞分離、定量分析等。
流式細(xì)胞術(shù)為一種生物學(xué)技術(shù),計(jì)數(shù)和分選懸浮于流體中的微小顆粒是它的主要用途。這種技術(shù)能夠用來(lái)連續(xù)的多參數(shù)的分析流過(guò)光學(xué)或電子檢測(cè)器的一個(gè)個(gè)細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytoMetry,F(xiàn)CM)是通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記的熒光信號(hào)使高速、逐一的定量分析和分選懸液中的單細(xì)胞或其他生物粒子得以實(shí)現(xiàn)的技術(shù)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則有哪些呢?將紅細(xì)胞去除的方法:紅細(xì)胞裂解法,有著簡(jiǎn)單的操作,比較快的速度,并且使原始標(biāo)本的白細(xì)胞分布盡可能保持。建議在染色后溶血。若需要在染色前溶血,則應(yīng)當(dāng)確保:溶血過(guò)程中不能改變抗原性。徹底洗去溶血?jiǎng)?,沒(méi)有影響到細(xì)胞和抗體結(jié)合的動(dòng)力反應(yīng)。固定劑不包含在所用的溶血?jiǎng)┲?,不然?huì)對(duì)細(xì)胞活性及表面標(biāo)記結(jié)果產(chǎn)生影響。密度梯度離心法,能夠比較好的回收靶細(xì)胞,并且可能得到富集,同時(shí)將紅細(xì)胞、碎片等去除。
細(xì)胞分析儀性能的技術(shù)指標(biāo)主要有熒光分辨率、熒光靈敏度、分析參數(shù)多少及分析、分選速度及純度等。熒光分辨率是指分辨兩個(gè)相鄰峰的Z小距離,通常用變異系數(shù)(CV值)來(lái)表示?,F(xiàn)在市場(chǎng)上主流型號(hào)的熒光分辨率小于2.0%,有的甚至在1%之內(nèi)。熒光靈敏度反映了儀器探測(cè)Z小熒光光強(qiáng)的能力,一般用熒光微球上可測(cè)出的熒光(FITC)的Z小分子數(shù)來(lái)表示。目前細(xì)胞分析儀可以達(dá)到100以?xún)?nèi)。一般分析速度為500-10000個(gè)細(xì)胞/s,分選速度控制在1000個(gè)細(xì)胞/s以下,分選純度>98%,有的細(xì)胞分析儀分析速度可達(dá)100000個(gè)細(xì)胞/s,分選速度可達(dá)70000個(gè)細(xì)胞/s,分選純度>98%。細(xì)胞分析儀可以分析細(xì)胞分子,如分析細(xì)胞分子的來(lái)源、種類(lèi)、數(shù)量等。
染色待測(cè)細(xì)胞,之后將單細(xì)胞懸液制作成功。用一定壓力往流動(dòng)室內(nèi)壓入待測(cè)樣品,在高壓下從鞘液管?chē)姵霾缓?xì)胞的磷酸緩沖液,待測(cè)樣品流與鞘液管入口方向成一定角度,如此,鞘液就可以包繞著樣品高速流動(dòng),使一個(gè)圓形的流束組成,在鞘液的包被下待測(cè)細(xì)胞單行排列,依次從檢測(cè)區(qū)域通過(guò)。流式細(xì)胞儀的發(fā)光源一般是激光。在樣品流上垂直照射著經(jīng)過(guò)聚焦整形后的光束,在激光束的照射下的被熒光染色的細(xì)胞,會(huì)有激發(fā)熒光和散射光產(chǎn)生。90度方向的光電倍增管和前向光電二極管同時(shí)接收這兩種信號(hào)。在前向小角度進(jìn)行光散射信號(hào)的檢測(cè),細(xì)胞體積的大小基本上由這種信號(hào)來(lái)反映。細(xì)胞分析儀主要應(yīng)用于生命科學(xué),藥理學(xué)和遺傳學(xué)。黑龍江細(xì)胞外囊泡分離分析系統(tǒng)
細(xì)胞分析儀可以準(zhǔn)確識(shí)別極度稀有的細(xì)胞,如干細(xì)胞、白血病細(xì)胞等。上海Seahorse細(xì)胞能量代謝分析儀供貨商
細(xì)胞分析儀性能的技術(shù)指標(biāo):細(xì)胞分析儀性能的技術(shù)指標(biāo)主要有熒光分辨率、熒光靈敏度、分析參數(shù)多少及分析、分選速度及純度等。熒光分辨率是指分辨兩個(gè)相鄰峰的Z小距離,通常用變異系數(shù)(CV值)來(lái)表示?,F(xiàn)在市場(chǎng)上主流型號(hào)的熒光分辨率小于2.0%,有的甚至在1%之內(nèi)。熒光靈敏度反映了儀器探測(cè)Z小熒光光強(qiáng)的能力,一般用熒光微球上可測(cè)出的熒光(FITC)的Z小分子數(shù)來(lái)表示。目前細(xì)胞分析儀可以達(dá)到100以?xún)?nèi)。一般分析速度為500-10000個(gè)細(xì)胞/s,分選速度控制在1000個(gè)細(xì)胞/s以下,分選純度>98%,有的細(xì)胞分析儀分析速度可達(dá)100000個(gè)細(xì)胞/s,分選速度可達(dá)70000個(gè)細(xì)胞/s,分選純度>98%。上海Seahorse細(xì)胞能量代謝分析儀供貨商