由于各細(xì)胞或顆粒的大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、蛋白質(zhì)含量、核酸(DNA或RNA)含量等的不同,使得接收到的熒光信號和非熒光散射信號也不同,從而實(shí)現(xiàn)對不同性質(zhì)的細(xì)胞或群體進(jìn)行分析和分類。細(xì)胞分選原理:細(xì)胞分析儀的分選功能是由細(xì)胞分選器來完成的。在分選過程中,細(xì)胞分析儀通過高頻振蕩對液流施加液滴驅(qū)動能量,使其斷離為均勻的液滴,根據(jù)事先確定的分選標(biāo)準(zhǔn)由系統(tǒng)判斷是否將被分選,由充電電路對選定的細(xì)胞液滴進(jìn)行充電。當(dāng)帶電液滴通過電場時(shí),會在電場的作用下向左或向右偏轉(zhuǎn),具體方向取決于液滴的電荷極性,未帶電荷的液滴不受電場的影響,它們將在ZX位置通過,Z后進(jìn)入廢液抽吸器,發(fā)生偏轉(zhuǎn)的液滴落入相應(yīng)的收集器中,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分選。細(xì)胞分析儀可以與流式細(xì)胞儀、顯微鏡等儀器聯(lián)動使用,可擴(kuò)展多種功能。江蘇外泌體分離分析系統(tǒng)經(jīng)銷商
溶血前標(biāo)記和溶血后標(biāo)記均屬于表面標(biāo)記。若標(biāo)記受到紅細(xì)胞或者血漿成分的影響,那么溶血后標(biāo)記應(yīng)當(dāng)被采用,然而,需要對溶血劑膜抗原的影響進(jìn)行留意,因此,固定劑一般不包含在溶血劑內(nèi)。如陣發(fā)性血紅蛋白尿的檢測和免疫球蛋白輕鏈檢測等。胞膜和胞內(nèi)染色:通常,先胞膜染色,固定,膜通透和胞內(nèi)染色,Z后是DNA染色。流式細(xì)胞儀集電子、計(jì)算機(jī)、激光、流體理論于一體,其是進(jìn)行流式細(xì)胞分析的儀器。在功能水平上定量分析和分選單細(xì)胞或其他生物粒子的一種檢測手段,即是流式細(xì)胞術(shù)。其能夠隨上萬個(gè)細(xì)胞進(jìn)行高速分析,并且可以同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中將多個(gè)參數(shù)測量出來,下面就讓小編帶你了解流式細(xì)胞儀的基本原理。南京BioTek酶標(biāo)儀現(xiàn)價(jià)細(xì)胞分析儀可以進(jìn)行單個(gè)細(xì)胞的分析,支持對個(gè)體差異的分析。
流式細(xì)胞儀的其他幾方面的技術(shù)改進(jìn):①熒光信號從線性測量到對數(shù)測量的改進(jìn),由于對數(shù)測量可以放大電信號,使之對弱熒光和某些藥物自發(fā)熒光標(biāo)本檢測才得到滿意的結(jié)果;②光譜重疊的校正,通過補(bǔ)償修飾軟件的開發(fā)應(yīng)用,從而保證了各種不同激發(fā)熒光檢測分析的質(zhì)量;③DNA含量分析時(shí),通過分析脈沖的面積、寬度,區(qū)分實(shí)體瘤組織標(biāo)本中的粘連細(xì)胞群體,剔除DNA檢測中的二聯(lián)體細(xì)胞,Zda程度地減少假陽性,從而解決了實(shí)體瘤DNA分析時(shí)長期存在的關(guān)鍵性的難題;④過去采用激光的一種波長(如488nm)的發(fā)射光只能激發(fā)樣品中一種波長的繼發(fā)光,因此,只能檢測細(xì)胞中一種細(xì)胞成分。現(xiàn)在流式細(xì)胞儀采用一種488nm激發(fā)波長的發(fā)射光,可以同時(shí)激發(fā)樣品中三種或四種不同波長的繼發(fā)光,這便可用于同一細(xì)胞不同成分的同步分析。
流式細(xì)胞儀的光學(xué)檢測系統(tǒng):流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦整形后的光束,垂直照射在樣品流上,被熒光染料染色的細(xì)胞在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。這兩種信號同時(shí)被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管接收。光散射信號在前向小角度進(jìn)行檢測,這種信號基本上反映了細(xì)胞體積的大小;熒光信號的接收方向與激光束垂直,經(jīng)過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離,形成多個(gè)不同波長的熒光信號。光電倍增管接收的信號被積分放大反轉(zhuǎn)換為電子信號輸入電子信息接收器,傳輸給與流式細(xì)胞儀相連的計(jì)算機(jī)。細(xì)胞分析儀可以進(jìn)行抗體檢測、細(xì)胞檢測、原核檢測等操作以便對已檢測的樣本進(jìn)行分析。
流式細(xì)胞儀在免疫學(xué)中的應(yīng)用有哪些呢?淋巴細(xì)胞分為T淋巴細(xì)胞(CD3)、B淋巴細(xì)胞(CD19)和NK細(xì)胞三大群。T淋巴細(xì)胞又分為輔助性T細(xì)胞(CD4)、細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CD8)。流式細(xì)胞儀檢測T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)可以用來判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病。CD4和CD8T淋巴細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)有助于監(jiān)測患有免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病或有免疫反應(yīng)的病人的免疫狀態(tài)。流式細(xì)胞儀在造血干細(xì)胞移植中的應(yīng)用:造血干細(xì)胞移植加強(qiáng)烈化療是醫(yī)治某些難治疾病的有效方法。外周血造血干細(xì)胞移植(PBSCT)的成功與否,除與是否合并并發(fā)癥有關(guān)外,移植物中CD34+細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)量是重要因素。細(xì)胞分析儀幫助研究人員更深刻了解如何抑制細(xì)胞分裂及如何預(yù)測細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化。南京BioTek酶標(biāo)儀現(xiàn)價(jià)
細(xì)胞分析儀在藥品篩選、細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染等領(lǐng)域中也有普遍應(yīng)用。江蘇外泌體分離分析系統(tǒng)經(jīng)銷商
流式細(xì)胞儀的維護(hù)保養(yǎng):選擇正確的熒光染料,一般原則是:低表達(dá)抗原標(biāo)記高S/N(信噪比)熒光素,高表達(dá)抗原標(biāo)記低S/N(信噪比)熒光素。當(dāng)樣品用2種以上熒光染料時(shí),為消除干擾,需要做熒光補(bǔ)償。在應(yīng)用流式細(xì)胞儀軟件作熒光補(bǔ)償時(shí),補(bǔ)償只應(yīng)用在同一個(gè)激光激發(fā)的不同熒光素之間,應(yīng)避免補(bǔ)償不足和過度補(bǔ)償。溶液使用前,所用溶液都要進(jìn)行過濾處理,以免出現(xiàn)沉淀物而堵塞噴嘴。流式細(xì)胞儀狀態(tài)穩(wěn)定后,要先排除進(jìn)樣針內(nèi)的氣泡以保證噴嘴暢通,之后再對樣本進(jìn)行檢測。江蘇外泌體分離分析系統(tǒng)經(jīng)銷商