中藥活性成分評估

蛋黃粉中60%為脂類，用蛋黃粉喂食斑馬魚，可以使斑馬魚血液中的脂肪含量快速升高，從而建立斑馬魚血脂高癥模型。經(jīng)過油紅O特異性脂肪染色（與組織內甘油三酯等脂肪滴結合呈橘紅色），血脂高斑馬魚血管內肉眼可見明顯的脂質聚積，通過靜脈注射，可見熒光標記膽固醇的積累。我們評價斑馬魚降低血脂功效有4個指標：1.斑馬魚血脂表型圖；2.斑馬魚總甘油三脂含量；3.斑馬魚膽固醇表型圖；4.斑馬魚總膽固醇含量。1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實驗，服用降脂產(chǎn)品組的血脂聚積情況與模型對照組比較明顯減少。2.本實驗證實了阿托伐他汀鈣、辛伐他汀、洛伐他汀類降脂產(chǎn)品具有明顯的降脂降膽固醇作用。利用斑馬魚模型評價鎮(zhèn)痛作用。中藥活性成分評估

我們將受測試斑馬魚分成兩組，分別是正常對照組和服用生長發(fā)育促進劑組（維生素D3、碳酸鈣之類的生長發(fā)育促進劑通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內）。服用一段時間生長發(fā)育促進劑后，我們對斑馬魚做骨骼特異性熒光染色，觀察斑馬魚脊椎骨的發(fā)育情況?？梢钥吹剑蒙L發(fā)育促進劑的脊椎骨數(shù)量明顯比正常對照組增多。 1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實驗，服用生長發(fā)育促進劑的斑馬魚脊椎骨數(shù)量比正常對照組增多。2.本實驗證實了維生素D3、碳酸鈣具有明顯促進生長發(fā)育功效?；瘜W藥品安全性評價藥物毒性試驗、毒理毒性檢測評價。

基于斑馬魚模型實驗，可進行活性化合物發(fā)現(xiàn)、高通量藥物篩選、藥效評價、安全性評價、生物學質量控制等臨床前研究，實驗周期短、成本低，結果直觀，助力醫(yī)藥企業(yè)的藥物研發(fā)、品控及宣傳推廣。利用斑馬魚模型評價氧化應激。斑馬魚的基因與人類基因的相似度達到87％，與哺乳動物對外源化學物質的防御機制相當，包括酶的誘導和氧化應激。當生物暴露在環(huán)境污染物中，生物可能會發(fā)生氧化應激，主要表現(xiàn)為活性氧（ROS）產(chǎn)生和消耗的不平衡。在需氧生物的活細胞中，活性氧被一種由水和脂溶性低分子量自由基清除劑、特異性抗氧化酶組成的抗氧化防御機制解。應用ROS特異性熒光檢測試劑，它的水解產(chǎn)物能被ROS氧化為高熒光物質，用多功能酶標儀檢測熒光值反映氧化應激的程度。本方法已被授予國家發(fā)明專利。

我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和腎保護劑組。其中正常對照組未攝入馬兜鈴酸，模型對照組和腎保護劑組都攝入了等量的馬兜鈴酸（馬兜鈴酸通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內）。腎保護劑組在攝入馬兜鈴酸的同時攝入山牡荊水提取物之類的腎保護劑。檢測腎小球濾過率的斑馬魚在實驗過程中需額外靜脈注射熒光物質。服用一段時間腎保護劑后，1.統(tǒng)計斑馬魚腎性水腫的發(fā)生率，2.用熒光顯微鏡拍照，通過斑馬魚全身熒光強度分析腎小球濾過率。斑馬魚評價胃腸道粘膜損傷輔助保護功效。

利用斑馬魚模型評價保護腎臟功效。腎臟是人體的重要組成部分,,發(fā)揮著從血液中濾過代謝廢物并維持體內正常酸堿和滲透壓平衡的重要作用。斑馬魚的腎臟與哺乳動物腎臟的發(fā)育及疾病的發(fā)生、發(fā)展存在很多相似之處，涉及的許多基因具有高度保守性。因此，斑馬魚適合用于評價保護腎臟功效。馬兜鈴酸主要損傷腎小管上皮細胞，導致腎間質纖維化及腎萎縮，并出現(xiàn)低分子蛋白尿、嚴重貧血癥狀，被稱為“馬兜鈴酸腎病”。在人體和斑馬魚上，馬兜鈴酸均可誘發(fā)腎性水腫和腎臟形態(tài)功能異常，引起不可逆性腎損傷并至死亡。評價保護腎臟功效有兩個指標：1.腎性水腫發(fā)生率。由于斑馬魚通體透明，腎性水腫可以明顯的被觀察到。2.腎小球濾過率。通過注射熒光物質，正常斑馬魚可將熒光物質排出體外，腎小球濾過功能損傷的斑馬魚不能將熒光物質排出體外。觀察斑馬魚全身熒光強度可分析腎小球濾過率。利用斑馬魚模型評價老年癡呆防治作用。藥效性試驗

利用斑馬魚模型評價腸道消化功能。中藥活性成分評估

腦出血是指非外傷性腦實質內部血管破裂引發(fā)的腦內出血病癥，占全部腦卒中的20%～30%，急性期病死率為30%～40%。羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMGCR)是他汀類藥物發(fā)揮抑制作用的直接作用點,HMGCR功能被抑制會影響血管的完整性和穩(wěn)定性，誘發(fā)腦出血。由于斑馬魚大腦具有典型脊椎動物腦部形態(tài)學特征，血管與神經(jīng)系統(tǒng)在分子信號通路上與人和哺乳動物的同源性達到85%以上。在大量攝入辛伐他汀后，斑馬魚腦部也會出現(xiàn)腦出血的情況，患有腦出血的斑馬魚的腦部會出現(xiàn)明顯的片狀出血，而正常斑馬魚沒有；由于腦出血斑馬魚的心搏輸出量和血流速度也會降低，利用血流分析儀可明顯觀察到。腦出血可直接造成反應遲鈍、運動功能障礙，可通過行為分析軟件觀察斑馬魚的行為軌跡。我們評價斑馬魚腦出血有4個指標：1.腦出血發(fā)生率；2.心搏輸出量；3.血流速度；4.行為學（運動改善）。中藥活性成分評估

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