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總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見(jiàn)許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項(xiàng):樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個(gè)月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,2-8°C可以保存一周,-20°C條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短,容易降解,建議提取后盡快進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),如反轉(zhuǎn)錄成cDNA,NorthernBlot等。β-巰基乙醇主要破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑平均價(jià)格
植物RNA快速提取試劑盒:是一種單相RNA快速提取試劑盒,可高效裂解堅(jiān)固的植物細(xì)胞并強(qiáng)烈壓制RNA酶活性。細(xì)胞破碎之后,植物多糖立即被PlantRNAtrip獨(dú)特的成分結(jié)合。離心抽提步驟將RNA與滅活的RNA酶、蛋白、基因組DNA污染分離,并清理植物多糖多酚以及次生代謝產(chǎn)物。在RNA沉淀之前加入PlantRNAAid清理植物多酚,并清理殘余的多糖。提取可在60分鐘內(nèi)完成,所提取的RNA純度極高,不含DNA和多糖和多酚污染,可用于構(gòu)建cDNA文庫(kù)、RT-PCR、Northern轉(zhuǎn)印分析、Poly(A)mRNA純化、體外翻譯、和RNA酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)。杭州正規(guī)RNA提取試劑進(jìn)貨價(jià)rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質(zhì)合成的工作場(chǎng)所。
眾所周知,RNA提取是一項(xiàng)困難的工作。常見(jiàn)的挑戰(zhàn)包括RNA降解、低產(chǎn)率和/或純度以及DNA污染。此外,不同的樣品類型有自己獨(dú)特的特性,需要特別注意。例如,微生物(如革蘭氏陽(yáng)性/陰性細(xì)菌、菌類、古生菌等)的細(xì)胞壁堅(jiān)硬,不易被化學(xué)和酶解。其他樣本類型,如糞便和植物含有壓制劑(如多酚類、腐殖酸/黃腐酸、單寧酸等),可與RNA共沉淀,并可壓制下游分析,如RT-qPCR。RNA是不穩(wěn)定的,極易降解。許多樣品含有高水平的RNase,會(huì)快速降解RNA。為了使之較小化,較好在采集時(shí)穩(wěn)定樣本中的RNA。常用的樣品穩(wěn)定方法包括液氮快速冷凍、干冰乙醇浴或-80°C冷凍室。然而,這些方法也有缺點(diǎn),如核酸的凍融損傷,并不是所有的研究人員在采集樣品時(shí)都能立即使用這些方法。
RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時(shí),操作方便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用。對(duì)于動(dòng)物組織、簡(jiǎn)單的植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線。該產(chǎn)品采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解系統(tǒng),無(wú)需苯酚氯仿抽提等步驟,簡(jiǎn)單快捷。組織或細(xì)胞裂解后,提取操作光需20分鐘便可完成~研缽150度烘烤4小時(shí),離心管、吸頭用DEPC處理。
昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法:將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。加0.7mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。加0.3mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。此步可以省略。室溫12000rmp離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中,加入50~100μLRNA洗脫液,室溫放置1~2分鐘。12000rmp室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為RNA樣品,可以立即使用或存放于-80℃待用RNA提取試劑注意事項(xiàng):硫氰酸胍/苯酚法的一種即用的從細(xì)胞和組織中提取總RNA的試劑。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑平均價(jià)格
即用型RNA,可在絕大多數(shù)下游應(yīng)用。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑平均價(jià)格
如果把一個(gè)細(xì)胞比作一個(gè)城市,那么DNA就像是一個(gè)管理人員,它坐在細(xì)胞核內(nèi),監(jiān)視著“細(xì)胞城”的一舉一動(dòng),像哪里細(xì)胞膜破了需要修補(bǔ),什么時(shí)候需要合成蛋白質(zhì),顯而易見(jiàn),光靠我們DNA管理人員一個(gè)人自然忙不過(guò)來(lái)啦,于是我們的DNA管理人員決定給自己找一些“打工仔”,它們就是RNA,但是近年來(lái)越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn),這些RNA似乎遠(yuǎn)遠(yuǎn)不止一個(gè)普通默默無(wú)聞的“公務(wù)員”那樣簡(jiǎn)單,它們?cè)诨虮磉_(dá)中發(fā)揮著不亞于DNA的巨大的作用,如2006年諾貝爾獎(jiǎng)生理/醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)就頒發(fā)給了RNA干擾的兩位發(fā)現(xiàn)者。RNA干擾現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)為遺傳研究提供了一種強(qiáng)大的研究手段,這也說(shuō)明這些對(duì)RNA的研究有著巨大的前景.而作為南大較好科研接班人的我們自然也不能甘于人后,于是我們決定從酵母RNA的提取開(kāi)始做起。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑平均價(jià)格