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鼠尾Ⅰ型膠原:材料與方法:1.主要材料、試劑和儀器鼠尾、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液、磷液均購(gòu)自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司);多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈,用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開,去掉皮毛,并剪成小段,抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中,用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液,將肌鍵置于平皿中剪碎,按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃,將肌鍵分散于醋酸溶液中,4℃放置一周,然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下,肌腱水解成膠凍狀凝膠,置于冰箱4℃保存。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉。細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例。北京鼠尾膠原平均價(jià)格
鼠尾膠原使用方法:1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例,用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺(tái)上過夜晾干,也可以在室溫放置1小時(shí)后,用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個(gè)月以上的時(shí)間。三維膠原凝膠的制備:A、無細(xì)胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)將200μL本品加到置于冰浴的離心管中,加入690μL雙蒸水,然后加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要測(cè)定pH值)。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。長(zhǎng)沙鼠尾膠原供應(yīng)商我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白。
鼠尾膠原蛋白等實(shí)驗(yàn)技術(shù)應(yīng)用:干細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等多種「難伺候」的細(xì)胞,以及一些組織在體外培養(yǎng)時(shí),需要在模擬體內(nèi)環(huán)境的細(xì)胞外基質(zhì)中生長(zhǎng),膠原蛋白和纖粘蛋白正是細(xì)胞外基質(zhì)的主要組成部分,富含1型膠原蛋白大鼠尾部也成了實(shí)驗(yàn)室用膠原蛋白的較主要來源。鼠尾取血剪下幾毫米小鼠尾巴、在小鼠尾靜脈上劃一道小口、用注射器抽取的操作都可以得到這種鮮紅的。它可以用于監(jiān)測(cè)小鼠血液成分的變化,確認(rèn)小鼠是否患上了糖尿病或者某些治好能夠改變小鼠的血糖等。比起心臟和眼部取血,實(shí)驗(yàn)用鼠尾尖取血的取血量較小,但取血之后,小鼠還能繼續(xù)下一步建模或者實(shí)驗(yàn),完全沒有性命之憂。
除了讓細(xì)胞更好貼上去,鼠尾膠原蛋白還能用于制備三維膠,這樣可以在培養(yǎng)皿中一定程度上模擬身體內(nèi)部的生長(zhǎng)環(huán)境,讓細(xì)胞在更真實(shí)地條件下進(jìn)行生長(zhǎng)。當(dāng)然,除了這些,耗子尾汁還能做到很多事情,只需要打開網(wǎng)站——知網(wǎng),輸入鼠尾膠原蛋白就能看到,例如鼠尾膠原蛋白可用于制備防皺保濕或美白產(chǎn)品,制作止血海綿敷料等各種用途。NO.3鼠尾DNA除了從整條鼠尾中提取的鼠尾膠原蛋白,老鼠的尾巴尖尖也是制備「耗子尾汁」的好材料。這類「耗子尾汁」通常用來鑒別耗子的基因型,對(duì)于轉(zhuǎn)基因小鼠而言,如果無法通過毛色來分辨動(dòng)物的基因型,往往會(huì)選用經(jīng)典的PCR法。通過蛋白酶K裂解,「剪尾、加堿、加熱」三連的方法都能制備一管(香噴噴)的「耗子尾汁」,從而獲取遺傳信息。將黏稠的膠體溶液進(jìn)行高速冷凍離心處理。
鼠尾Ⅰ型膠原:組裝液的配置:1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL,用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構(gòu)吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中,倒入0.5mL自組裝液,室溫放置20min。予自組裝液自組裝24h。吸取0.05%戊二醛2mL至小培養(yǎng)皿中,將自組裝24h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經(jīng)去離子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后進(jìn)行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10mmol/L二水氯化鈣+150mmol/L氯化鈉+50mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中,滴入聚丙烯(PAA)至濃度350μg/mL;滴加1mol/L的氯化氫,調(diào)節(jié)酸堿度至7.4,然后緩慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氫二鈉),約16滴/min。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉。鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來的物質(zhì)。廣州鼠尾膠原廠家推薦
一種基于鼠尾膠原蛋白:根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料。北京鼠尾膠原平均價(jià)格
鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用:膠原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實(shí)驗(yàn)室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,對(duì)于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究。目的:探討鼠尾膠原對(duì)過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實(shí)驗(yàn)組)和普通培養(yǎng)皿(對(duì)照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導(dǎo)。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)心肌細(xì)胞存活率,TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測(cè)丙二醛水平,Western-Blot檢測(cè)凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達(dá)。結(jié)果與結(jié)論:兩組培養(yǎng)皿中,隨著過氧化氫濃度的增高,均可見細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯加重,細(xì)胞存活率及細(xì)胞內(nèi)過氧化氫活力明顯下降,細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高,Bcl-2/Bax比值明顯降低,呈劑量依賴性。北京鼠尾膠原平均價(jià)格