細胞免疫抗體

來源: 發(fā)布時間:2023-09-25

免疫熒光-實驗步驟:細胞爬片免疫熒光:在培養(yǎng)板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次,每次5min;(圓蓋片:13mm24孔;18mm12孔;20mm6孔)用4%的多聚甲醛固定爬片15min,PBS浸洗玻片3次,每次5min0.5%TritonX-100(PBS配制)室溫通透20min(細胞膜上表達的抗原省略此步驟);PBS浸洗玻片3次,每次3min,吸水紙吸干PBS,在玻片上滴加3%的BSA(PBS配置),室溫封閉30min5,吸水紙吸掉封閉液,不洗,每張玻片滴加足夠量用PBS稀釋好的一抗并放入濕盒,4℃孵育過夜。加熒光二抗:PBS浸洗爬片3次,每次5min,吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗,濕盒中室溫孵育50min。免疫熒光技術可以用于研究植物病理學和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。細胞免疫抗體

細胞免疫抗體,免疫

免疫熒光間接法測抗體實驗步驟:滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于已知抗原標本片,10min后棄去,使標本片保持一定濕度。滴加以0.01mol/L,pH7.4的PBS適當稀釋的待檢抗體標本,覆蓋已知抗原標本片。將玻片置于有蓋搪瓷盒內(nèi),37℃保溫30min。取出玻片,置于玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗1-2次,然后按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸5min,不時振蕩。取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,滴加一滴一定稀釋度的熒光標記的抗人球蛋白抗體。將玻片平放在有蓋搪瓷盒內(nèi),37℃保溫30min。重復操作3。取出玻片,用濾紙吸去多余水分,滴加一滴緩沖甘油,再覆以蓋玻片。熒光顯微鏡高倍視野下觀察,結果判定同直接法。CD3免疫抗體免疫熒光技術可以用于研究動物模型和藥物篩選。

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細胞和組織樣品處理:準備熒光標記的細胞樣品:為實現(xiàn)較佳的圖像質(zhì)量,首先應建立針對目的蛋白和細胞結構的研究,同時將其他一切背景等排除在圖像之外。固定和破膜細胞樣品用于標記–首先將細胞結構、蛋白和核酸固定,然后使熒光染料和抗體滲入到細胞內(nèi)部,標記目的靶點。封閉細胞樣品,防止熒光標記物與研究無關的蛋白非特異性結合,較大限度提高信噪比。蛋白封閉液有助于減少非特異染色。抗體能夠取代封閉蛋白與其表位形成高親和力結合,而封閉液可防止樣品中的低親和力結合。

熒光抗體技術:抗原抗體反應后,利用熒光顯微鏡判定結果的檢測方法。免疫熒光測定:抗原抗體反應后,利用特殊儀器測定熒光強度而推算被測物濃度的檢測方法。免疫熒光實驗步驟:直接法測抗原:基本原理:將熒光素標記在相應的抗體上,直接與相應抗原反應。其優(yōu)點是方法簡便、特異性高,非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低;而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。免疫熒光技術具有高靈敏度和高特異性,可以檢測非常低濃度的目標分子。

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免疫熒光應用范圍:其應用范圍極其普遍,可以測定內(nèi)分泌、蛋白質(zhì)、細胞因子、細胞表面抗原、多肽、核酸、受體、神經(jīng)遞質(zhì)、肉瘤標志物、血藥濃度等各種生物活性物質(zhì)。根據(jù)診斷類別,又可分為傳染性疾病、內(nèi)分泌、藥物檢測、免疫學、血型鑒定等。免疫熒光實驗步驟:洗滌:PBS洗滌5min*3次。封閉:使用封閉液對樣本進行封閉,一般1h。加一抗:使用合適濃度的一抗與樣本4℃過夜。洗滌:PBS或PBST洗滌5min*3次。加二抗:使用間接法時需要加二抗處理,根據(jù)說明書使用合適的濃度,避光處理1h(后面步驟均需避光)。洗滌:PBS或PBST洗滌5min*3次。封片:滴一滴防淬滅劑,封片??闪⒓从^察后暫存4℃盡快觀察。免疫熒光技術可以用于研究內(nèi)臟移植和免疫抑制。HBCAg免疫組化

免疫熒光技術可以用于研究代謝疾病和內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能。細胞免疫抗體

通過不同顏色熒光標記不同的靶標,可以直觀的觀察同一樣品細胞內(nèi)不同結構和蛋白。熒光標記靶標的方法主要包括熒光染料、免疫標記、熒光融合蛋白等——這幾種方法均可選擇性標記細胞內(nèi)的結構和蛋白,讓您在成像時更輕松地進行觀察。細胞生物學采用的很多熒光工具基本上都是熒光基團。這些熒光基團經(jīng)過不同的方法修飾或結合到不同的分子上,從而具備了某些的功能與特定的細胞器或蛋白結合。通過化學修飾,單個熒光基團可以產(chǎn)生許多變體形式,且每種變體都有不同的特異性。細胞免疫抗體