CD42b免疫組化

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-07-09

細(xì)胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),細(xì)胞免疫熒光技術(shù)是利用免疫技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合,原理就是利用抗原-抗體反應(yīng)之后,采用熒光標(biāo)記,標(biāo)記完成后,顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞內(nèi)某種抗原成分的多少,從而做出一個(gè)定位研究,也可以為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)提供一個(gè)明確的指導(dǎo),細(xì)胞免疫熒光具有敏感性強(qiáng)、特異性高、速度快的特點(diǎn),是目前比較常用的組織學(xué)技術(shù),也是比較精確的。免疫熒光染色的主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結(jié)合來(lái)顯示目的蛋白,主要包括蛋白和一抗結(jié)合,其次是帶有熒光基團(tuán)的二抗識(shí)別并結(jié)合一抗,熒光顯微鏡下即可觀(guān)察到熒光。免疫熒光是一種常用的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù),用于檢測(cè)和定位特定抗原或抗體。CD42b免疫組化

CD42b免疫組化,免疫

熒光色素:異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,F(xiàn)ITC)為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末,易溶于水或酒精等溶劑。分子量為389.4,較大吸收光波長(zhǎng)為490495nm,較大發(fā)射光波長(zhǎng)520530nm,呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光,結(jié)構(gòu)式如下:有兩種同分異結(jié)構(gòu),其中異構(gòu)體Ⅰ型在效率、穩(wěn)定性、與蛋白質(zhì)結(jié)合能力等方面都更好,在冷暗干燥處可保存多年,是應(yīng)用較普遍的熒光素。其主要優(yōu)點(diǎn)是:①人眼對(duì)黃綠色較為敏感,②通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。四乙基羅丹明(rhodamine,RIB200)為橘紅色粉末,不溶于水,易溶于酒精。性質(zhì)穩(wěn)定,可長(zhǎng)期保存。結(jié)構(gòu)式如下:較大吸收光波長(zhǎng)為570nm,較大發(fā)射光波長(zhǎng)為595~600nm,呈橘紅色熒光。CD42b免疫組化熒光抗體技術(shù)可用于檢測(cè)和定位各種抗原,也可以用于檢測(cè)和定位抗體。

CD42b免疫組化,免疫

細(xì)胞免疫熒光:細(xì)胞種板與細(xì)胞爬片制備:1) 細(xì)胞密度在90%-95%左右,用預(yù)熱胰酶消化細(xì)胞后重懸細(xì)胞于完全培養(yǎng)基中,充分吹打,使之成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)。2)取細(xì)胞培養(yǎng)12孔板,在每個(gè)孔放爬片的位置根據(jù)爬片的大小,先在每個(gè)孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴幾滴培養(yǎng)基,然后將爬片置于液滴上,壓緊,使爬片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,防止加細(xì)胞懸液時(shí)爬片漂起,造成雙層細(xì)胞貼片。根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入12孔板培養(yǎng)板內(nèi)。3)24h或者48h后,根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速度快慢,觀(guān)察判斷細(xì)胞密度,約90%時(shí)進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光。

免疫熒光注意事項(xiàng):對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)置:1、內(nèi)源性組織背景對(duì)照:某些細(xì)胞和組織可能有固有的生物學(xué)性質(zhì),會(huì)產(chǎn)生背景熒光,對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響,例如色素脂褐質(zhì)。因此在孵育一抗前,應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行觀(guān)察,確??乖旧頉](méi)有信號(hào)。2、陽(yáng)性對(duì)照:用確認(rèn)含有待測(cè)抗原的組織或細(xì)胞,與待測(cè)標(biāo)本進(jìn)行統(tǒng)一處理,結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性,可證明待測(cè)抗原有一定活性并且實(shí)驗(yàn)過(guò)程中用的試劑及方法均可靠。3、陰性對(duì)照:與陽(yáng)性對(duì)照相反,用明確不含有待測(cè)抗原的細(xì)胞或組織切片染色,結(jié)果若為陰性,可排除染色過(guò)程中由于非特異性染色造成的假陽(yáng)性結(jié)果。免疫熒光技術(shù)可以用于研究免疫相關(guān)疾病和自身免疫病。

CD42b免疫組化,免疫

其他熒光物質(zhì):1.酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)某些化合物本身無(wú)熒光效應(yīng),一旦經(jīng)酶作用便形成具有強(qiáng)熒光的物質(zhì)。例如4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮,后者可發(fā)出熒光,激發(fā)光波長(zhǎng)為360nm,發(fā)射光波長(zhǎng)為450nm。其他如堿性酸酶的底物4-甲基傘酮磷酸鹽和辣根過(guò)氧化物酶的底物對(duì)羥基乙酸等。2.鑭系螯合物某些3價(jià)稀土鑭系元素如銪(Eu3+)、鋱(Tb3+)、鈰(Ce3+)等的螯合物經(jīng)激發(fā)后也可發(fā)射特征性的熒光,其中以Eu3+應(yīng)用較廣。Eu3+螯合物的激發(fā)光波長(zhǎng)范圍寬,發(fā)射光波長(zhǎng)范圍窄,熒光衰變時(shí)間長(zhǎng),較適合用于分辨熒光免疫測(cè)定。所需要的儀器:熒光顯微鏡、顯微熒光分光光度計(jì)、流式細(xì)胞儀和時(shí)間分辨熒光計(jì)等儀器激光共聚焦顯微鏡。在1941年,Coons初次成功地使用熒光素作為標(biāo)記物質(zhì)進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)。CX43免疫組化

免疫熒光技術(shù)在免疫學(xué)研究中發(fā)揮重要作用,幫助揭示細(xì)胞和分子的功能和相互關(guān)系。CD42b免疫組化

基于熒光成像的技術(shù)對(duì)于查詢(xún)細(xì)胞和組織的結(jié)構(gòu)和功能方面非常有用。當(dāng)與免疫化學(xué)結(jié)合時(shí),熒光成像技術(shù)的分析能力增加,增強(qiáng)了這種技術(shù)在普遍的研究和臨床應(yīng)用中的實(shí)用性,使其成為寶貴的工具。免疫熒光顯微鏡通過(guò)使活細(xì)胞成像能夠可視化整個(gè)細(xì)胞器,徹底改變了細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域。免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)是結(jié)合抗原抗體結(jié)合能力進(jìn)行細(xì)胞分析的常用熒光成像技術(shù)。免疫熒光(IF)是一種強(qiáng)大的免疫染色技術(shù),利用顯微鏡觀(guān)察與靶蛋白和其他目標(biāo)分子結(jié)合的熒光素標(biāo)記抗體。免疫熒光用于鑒定細(xì)胞中的細(xì)胞和組織特異性抗原;可視化蛋白質(zhì)的存在與否、細(xì)胞定位和活化狀態(tài);并分析免疫反應(yīng)。CD42b免疫組化

上海睿寶和生物科技有限公司位于上海市閔行區(qū)都莊路2350號(hào)2幢201室,交通便利,環(huán)境優(yōu)美,是一家服務(wù)型企業(yè)。是一家私營(yíng)有限責(zé)任公司企業(yè),隨著市場(chǎng)的發(fā)展和生產(chǎn)的需求,與多家企業(yè)合作研究,在原有產(chǎn)品的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)不斷改進(jìn),追求新型,在強(qiáng)化內(nèi)部管理,完善結(jié)構(gòu)調(diào)整的同時(shí),良好的質(zhì)量、合理的價(jià)格、完善的服務(wù),在業(yè)界受到寬泛好評(píng)。公司業(yè)務(wù)涵蓋病理檢測(cè)服務(wù),免疫組化檢測(cè)服務(wù),分子檢測(cè)服務(wù),全景掃描服務(wù),價(jià)格合理,品質(zhì)有保證,深受廣大客戶(hù)的歡迎。睿寶和生物將以真誠(chéng)的服務(wù)、創(chuàng)新的理念、***的產(chǎn)品,為彼此贏得全新的未來(lái)!