月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(LaurylSulfateTryptoseBroth,簡稱LST)是一種選擇性液體培養(yǎng)基,主要用于檢測食品、水、奶制品中的大腸菌群和大腸埃希氏菌。它的原理和使用方法如下:1.**試驗原理**:LST培養(yǎng)基中的胰蛋白胨提供碳源和氮源,滿足細菌生長需求;氯化鈉維持滲透壓;乳糖作為可發(fā)酵的糖類;磷酸二氫鉀和磷酸氫二鉀作為pH緩沖劑;月桂基硫酸鈉抑制非大腸菌群細菌的生長。2.**培養(yǎng)基配方**:每升培養(yǎng)基包含胰蛋白胨20.0g、氯化鈉5.0g、乳糖5.0g、磷酸二氫鉀2.75g、磷酸氫二鉀2.75g、月桂基硫酸鈉0.1g,pH值調節(jié)至6.8±0.2(25℃)。3.**試驗方法**:稱取35.6克LST培養(yǎng)基,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝到帶有倒立發(fā)酵管的試管中,每管10ml,121℃高壓滅菌15分鐘,備用。4.**質量控制和典型特征**:在36±1℃培養(yǎng)48±2小時,大腸菌群、大腸桿菌和發(fā)酵乳糖的革蘭氏陰性細菌產(chǎn)生氣體,在小倒管內有氣泡;其他細菌無氣泡。5.**微生物靈敏度試驗**:接種特定的質控菌株,如鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028、弗氏檸檬酸桿菌ATCC43864、陰溝腸桿菌ATCC23355、大腸埃希氏菌ATCC8739、糞腸球菌ATCC29212和金黃色葡萄球菌ATCC25923,放置36±1℃需氧培養(yǎng)24-48小時,觀察結果。去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基通常被用于分離和鑒定腸道細菌,尤其是腸桿菌科的細菌。NA0.25%青霉素酶培養(yǎng)皿
乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基(TrypticSoyAgar,TSA)是一種用于培養(yǎng)乳酸桿菌和其他需氧或兼性厭氧微生物的培養(yǎng)基,具有以下特點:1.**成分**:通常包含胰酪蛋白胨、酵母浸粉、葡萄糖、磷酸二氫鉀、檸檬酸銨、硫酸鎂、硫酸錳、亞硫酸鐵、吐溫80和乙酸鈉等。這些成分為細菌提供氮源、維生素、生長因子以及必需的礦物質。2.**pH值**:乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基的pH值一般調節(jié)至5.5±0.2(25℃),這是為了抑制其他非目標細菌的生長,同時促進乳酸桿菌的生長。3.**選擇性**:檸檬酸銨和乙酸鈉能夠抑制一些雜菌的生長,包括鏈球菌、霉菌和除乳酸桿菌外的大多數(shù)口腔微生物菌群。乙酸的加入使pH值降低,進一步抑制其他細菌的生長。4.**用途**:主要用于乳酸菌的檢測和分離培養(yǎng),特別適用于食品、乳制品、飲料、飼料和醫(yī)藥等領域中的乳酸桿菌。5.**制備方法**:稱取培養(yǎng)基粉末,加熱溶解于蒸餾水中,并加入冰乙酸調節(jié)pH值,加熱至完全溶解后分裝,通常不需要高壓滅菌。6.**培養(yǎng)條件**:乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基通常在36±1℃下培養(yǎng)24-48小時。7.**結果觀察**:乳酸桿菌在該培養(yǎng)基上通常形成白色、半透明、光滑形凸起的圓形菌落。LB預裝培養(yǎng)基平板不同的菌落形態(tài)和顏色可以幫助鑒定革蘭氏陰性腸道細菌的類型。
強化梭菌培養(yǎng)基(ReinforcedClostridiumMedium,RCM)是一種專門用于培養(yǎng)梭菌屬(Clostridium)細菌的培養(yǎng)基,具有以下特點:1.**營養(yǎng)成分**:RCM培養(yǎng)基包含蛋白胨、牛肉浸粉、酵母粉、葡萄糖、可溶性淀粉、氯化鈉、醋酸鈉和L-半胱氨酸鹽酸鹽等,這些成分為梭菌提供碳源、氮源、維生素和生長因子。2.**pH值**:培養(yǎng)基的pH值一般控制在6.8±0.1(25℃),為梭菌提供適宜的生長環(huán)境。3.**用途**:主要用于梭菌的增菌培養(yǎng)和計數(shù),特別適用于厭氧條件下梭菌的培養(yǎng)。4.**抑制作用**:醋酸鈉成分有助于抑制革蘭氏陰性菌和一些非目標細菌的生長,使得RCM培養(yǎng)基更適合梭菌屬細菌的選擇性培養(yǎng)。5.**穩(wěn)定性**:微量瓊脂(0.5g/L)的添加增加了培養(yǎng)基還原環(huán)境的穩(wěn)定性,有助于厭氧環(huán)境的形成,防止二氧化碳、氧氣和還原產(chǎn)物的擴散。6.**生長表現(xiàn)**:無動力的細菌在RCM培養(yǎng)基中通常呈顆粒狀或條狀生長,便于計數(shù);而有動力的細菌則可能呈現(xiàn)渾濁生長,一般不適合計數(shù)。7.**制備方法**:將RCM培養(yǎng)基粉末溶解于蒸餾水中,加熱至完全溶解后分裝,進行高壓滅菌以備使用。8.**質控結果**:RCM培養(yǎng)基適用于生孢梭菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌等梭菌的生長,這些菌株在培養(yǎng)基中的生長情況良好。
葉酸測定培養(yǎng)基是一種專門用于測定食品中葉酸含量的微生物培養(yǎng)基,具有以下特點:1.**營養(yǎng)成分**:該培養(yǎng)基包含酪蛋白氨基酸和葡萄糖作為氮源和碳源,乙酸鈉作為選擇劑和能量物質,以及氯化鈉、硫酸錳等鹽離子和多種維生素成分,為鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)等微生物提供所需的生長因子。2.**pH值**:培養(yǎng)基的pH值調節(jié)至6.8±0.2,以適應特定微生物的生長需求。3.**用途**:主要用于食品中葉酸的微生物測定,如GB5009.211-2022《食品安全國家標準食品中葉酸的測定》中所述。4.**制備方法**:通常將干粉培養(yǎng)基與蒸餾水或去離子水混合,攪拌加熱煮沸至完全溶解,分裝試管中,每管5ml,加入標準品或測試樣品,用無菌蒸餾水或去離子水調整體積至10ml,121℃高壓滅菌5分鐘。5.**質量控制**:使用特定的質控菌株(如鼠李糖乳桿菌ATCC7469)接種待測試培養(yǎng)基,在36±1℃下培養(yǎng)20-40小時,觀察生長情況,如肉湯混濁和試管呈梯度渾濁。6.**儲存條件**:應在避光、干燥處儲存,未開封保質期通常為三年。7.**注意事項**:在配制和使用過程中,應遵循無菌操作,避免污染,確保水的潔凈程度,因為水中的葉酸殘留或容器的污染直接影響試驗結果。去氧膽酸是一種抑制腸道細菌生長的化合物,因此對于從非腸道來源中分離出的微生物具有選擇性。
大豆酪蛋白肉湯培養(yǎng)基(胰酪胨大豆肉湯)是一種廣泛應用于微生物培養(yǎng)的通用培養(yǎng)基,它具備以下特點:1.**成分**:該培養(yǎng)基主要由胰蛋白胨、大豆蛋白胨、氯化鈉、磷酸氫二鉀、葡萄糖和亞硫酸鐵組成,其中胰蛋白胨和大豆蛋白胨提供氮源、維生素和生長因子,氯化鈉維持滲透壓平衡,磷酸氫二鉀作為緩沖劑,葡萄糖提供碳源,亞硫酸鐵則用于抑制非目標細菌的生長。2.**pH值**:培養(yǎng)基的pH值控制在7.3±0.2,以適應微生物生長的需要。3.**應用**:大豆酪蛋白肉湯培養(yǎng)基特別適用于沙門氏菌的前增菌培養(yǎng),也適用于其他多種微生物的培養(yǎng),包括需氧菌和厭氧菌。4.**使用方法**:通常按照一定的比例稱取培養(yǎng)基粉末,溶解在蒸餾水中,經(jīng)過高溫滅菌后使用。例如,可以稱取30.0g培養(yǎng)基粉末,溶解在1000mL蒸餾水中,分裝后進行高壓滅菌。5.**質控**:該培養(yǎng)基可用于微生物質控,例如接種傷寒沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌,觀察其生長情況和特征性反應,如渾濁度等。6.**儲存與保質期**:培養(yǎng)基應儲存在干燥、避光的環(huán)境中,并在開封后立即封閉以保持其穩(wěn)定性,通常保質期為三年。EMB培養(yǎng)基的特點是它對大腸桿菌等產(chǎn)酸革蘭氏陰性菌的選擇性較強。TSAST培養(yǎng)皿
將純培養(yǎng)的菌株涂布在TSA板上,培養(yǎng)至單一菌落后,將培養(yǎng)皿密封保存在4℃或-80℃的環(huán)境中。NA0.25%青霉素酶培養(yǎng)皿
膽鹽乳糖培養(yǎng)基(BL)是一種專門用于增菌培養(yǎng)的微生物培養(yǎng)基,它具有以下特點:1.**用途**:主要用于藥品和生物制品中大腸桿菌、沙門氏菌和綠膿桿菌的增菌培養(yǎng)。2.**成分**:包括蛋白胨、乳糖、牛膽鹽、氯化鈉、磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀。蛋白胨提供碳氮源,乳糖作為可發(fā)酵的糖類,氯化鈉維持滲透壓,磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀作為緩沖劑,牛膽鹽和去氧膽酸鈉作為選擇性抑菌劑。3.**pH值**:通常調節(jié)至7.4±0.2(25℃)。4.**使用方法**:首先將培養(yǎng)基粉末加入蒸餾水或去離子水,攪拌加熱煮沸至完全溶解,分裝后進行高壓滅菌。然后,將樣品處理后加入培養(yǎng)基中,放入恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)18至24小時,必要時可延長至48小時,觀察結果。5.**應用**:膽鹽乳糖培養(yǎng)基也用于乳品中大腸菌群的快速檢測研究,通過構建檢測片法和細胞培養(yǎng)瓶劑法,可以快速檢測乳品中的大腸菌群。6.**選擇性**:膽鹽的存在使得培養(yǎng)基能夠選擇性地促進革蘭氏陰性菌的生長,抑制革蘭氏陽性菌的生長,這使得BL培養(yǎng)基在分離和鑒定腸道細菌中非常有用。7.**檢測乳糖發(fā)酵能力**:由于含有乳糖,該培養(yǎng)基能夠用于檢測細菌的乳糖發(fā)酵能力,革蘭氏陰性細菌如大腸桿菌等通常能夠將乳糖發(fā)酵產(chǎn)生酸或氣體。NA0.25%青霉素酶培養(yǎng)皿