紡錘體的完整性決定了染色體分裂的正確性。在有絲分裂前期,中心體被復(fù)制形成兩個中心體,并逐漸分離,形成兩個紡錘體。紡錘體的微管從中心體發(fā)出,與染色體上的著絲粒(kinetochore)結(jié)合。著絲粒是一組復(fù)雜的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),可以與微管的末端結(jié)合。當(dāng)纖維束的微管末端與著絲粒結(jié)合時,纖維束開始縮短,將染色體拉向兩端,實現(xiàn)染色體的精確分離。這一過程不僅確保了每個新細(xì)胞都能獲得正確數(shù)量的染色體,還保證了遺傳信息的穩(wěn)定傳遞。紡錘體在細(xì)胞分裂完成后迅速解體,為細(xì)胞進(jìn)入下一個周期做準(zhǔn)備。昆明無需染色紡錘體
在生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,卵母細(xì)胞的冷凍保存技術(shù)一直是研究的熱點之一。尤其是針對卵母細(xì)胞內(nèi)部高度復(fù)雜且精細(xì)的紡錘體結(jié)構(gòu),其冷凍過程中的穩(wěn)定性與完整性直接關(guān)系到解凍后卵母細(xì)胞的存活率及發(fā)育潛能。紡錘體作為卵母細(xì)胞內(nèi)部的關(guān)鍵結(jié)構(gòu),由微管等高分子物質(zhì)有序排列而成,具有雙折射性。這種特性使得紡錘體在偏振光下能夠呈現(xiàn)出獨特的形態(tài)和特征,從而被Polscope等偏振光顯微鏡捕捉并觀察。雙折射性紡錘體的形態(tài)、穩(wěn)定性和完整性對于卵母細(xì)胞的正常減數(shù)分裂及胚胎發(fā)育至關(guān)重要。北京哺乳動物紡錘體液晶偏光補償器紡錘體微管與染色體之間的相互作用是細(xì)胞分裂的重點事件。
哺乳動物卵母細(xì)胞的紡錘體由微管組成,這些微管結(jié)構(gòu)精細(xì)且高度動態(tài),對溫度、滲透壓和機(jī)械力等外界因素極為敏感。在冷凍過程中,紡錘體容易因冰晶形成、滲透壓變化或機(jī)械損傷而遭到破壞,導(dǎo)致染色體分離異常,進(jìn)而影響卵母細(xì)胞的發(fā)育潛力和受精后的胚胎質(zhì)量。選擇合適的冷凍保護(hù)劑是減少紡錘體損傷的關(guān)鍵。然而,不同濃度的冷凍保護(hù)劑對紡錘體的影響各異,且不同哺乳動物種類之間也存在差異。因此,需要通過大量實驗來優(yōu)化冷凍保護(hù)劑的配方,以大限度地保護(hù)紡錘體的完整性。
液晶偏振光顯微鏡是一種將液晶可變減速器、電子成像及數(shù)碼成像技術(shù)結(jié)合起來的成像系統(tǒng),能夠觀測到具有雙折性特征的細(xì)胞結(jié)構(gòu),如紡錘體和透明帶。Polscope成像系統(tǒng)無需對細(xì)胞進(jìn)行固定和染色,因此能夠評估卵母細(xì)胞的質(zhì)量與紡錘體、透明帶等的相關(guān)性。在紡錘體卵冷凍研究中,Polscope成像系統(tǒng)可用于實時監(jiān)測冷凍過程中紡錘體的形態(tài)變化,評估冷凍保護(hù)劑的效果和冷凍速率對紡錘體的影響。此外,解凍后也可利用Polscope成像系統(tǒng)評估紡錘體的恢復(fù)情況和穩(wěn)定性,從而篩選出高質(zhì)量的卵母細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)操作。紡錘體微管網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜性保證了染色體分離的準(zhǔn)確性。
紡錘體生成
在含中心體的細(xì)胞中,紡錘體的生成開始于細(xì)胞分裂前初期 - 即在細(xì)胞核膜分解(Nuclear Envelope Breakdown, NEB)之前。初期的結(jié)構(gòu)為兩個**的以中心體為核的星狀體(asters)。當(dāng)細(xì)胞核膜分解后,染色體和星狀體發(fā)生一系列復(fù)雜的互動反應(yīng)。**終結(jié)果為所有的染色體在紡錘體的**(赤道板,)排列整齊,每兩條染色體有一個著絲點,每一個著絲點被一束極性相同的微管(通常稱為紡錘絲)附著。此時細(xì)胞處于分裂中期,紡錘體生成完畢。實驗證明,中心體在這個過程中的作用不是必需的。動物細(xì)胞在中心體被激光搗毀后仍舊能夠筑構(gòu)紡錘體,但其位置通常不在細(xì)胞的大致幾何中心,其后的胞質(zhì)分裂也會受嚴(yán)重影響。紡錘體 [1]
在不含中心體的細(xì)胞中,紡錘體的生成是由染色體本身主導(dǎo)的。此過程由一小分子量的GTP連接蛋白(Ran GTPase)控制。細(xì)胞核分解后,紡錘絲由染色體周圍生成。其后這些紡錘絲會在動力分子與為微管動力的合作影響下自動排列為極性相反大致數(shù)目相同的兩組。每組的極性相對于一組著絲點。同時在微管遠(yuǎn)端的動力蛋白 dynein 會將這些微管束集中到一點,形成紡錘極區(qū)(Spindle Polar Zone)。與此同時,染色體會自動在赤道板排列整齊。紡錘體生成完畢。 研究紡錘體有助于理解細(xì)胞分裂的分子機(jī)制。昆明ICSI紡錘體卵質(zhì)量評估
紡錘體在減數(shù)分裂中也發(fā)揮重要作用,確保生殖細(xì)胞染色體正確分離。昆明無需染色紡錘體
在核移植過程中,紡錘體的穩(wěn)定性是首要考慮的問題。冷凍和解凍過程中的溫度變化和冷凍保護(hù)劑的毒性都可能對紡錘體造成損傷,導(dǎo)致染色體分離異常,進(jìn)而影響胚胎發(fā)育。因此,如何在冷凍過程中保持紡錘體的穩(wěn)定性,是核移植紡錘體卵冷凍研究面臨的重要挑戰(zhàn)。體細(xì)胞核在移入去核卵母細(xì)胞后,需要經(jīng)歷復(fù)雜的重新編程過程,以獲得全能性。然而,這一過程受到多種因素的調(diào)控,包括表觀遺傳修飾、轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)等。在冷凍過程中,這些調(diào)控機(jī)制可能受到干擾,導(dǎo)致重新編程失敗或異常,從而影響胚胎發(fā)育。昆明無需染色紡錘體