冷凍與解凍過程中涉及多個環(huán)節(jié),包括溫度控制、時間控制、冷凍保護劑的添加與去除等。這些環(huán)節(jié)中的任何一步操作不當都可能導(dǎo)致紡錘體損傷。因此,需要不斷優(yōu)化冷凍與解凍技術(shù),以減少對紡錘體的不良影響。近年來,研究者們通過不斷嘗試和優(yōu)化冷凍保護劑的配方,取得了進展。例如,甘油、二甲基亞砜(DMSO)等滲透性保護劑被用于哺乳動物卵母細胞的冷凍保存中,它們能夠迅速降低細胞內(nèi)水分含量,減少冰晶形成。同時,一些非滲透性保護劑如蔗糖、海藻糖等也被發(fā)現(xiàn)對紡錘體具有一定的保護作用。紡錘體在細胞分裂中的精確調(diào)控是生物體發(fā)育的基礎(chǔ)。深圳無需染色紡錘體胚胎發(fā)育
染色體
當細胞從間期進入有絲分裂期,間期細胞微管網(wǎng)絡(luò)解聚為游離的αβ-微管蛋白二聚體,再重組成紡錘體,介導(dǎo)染色體的運動;分裂末期紡錘體微管解聚,又重組形成細胞質(zhì)微管網(wǎng)絡(luò)。
可分為:動粒微管:連接染色體動粒于兩極的微管。
極間微管:從兩極發(fā)出,在紡錘體中部赤道區(qū)相互交錯的微管。
星體微管:中心體周圍呈輻射分布的微管。
染色體的運動依賴紡錘體微管的組裝和去組裝。在這一過程中動粒微管與動粒之間的滑動主要是依靠結(jié)合在動粒部位的驅(qū)動蛋白和動力蛋白沿微管的運動來完成。極微管在紡錘體中部交錯,有些分布在極微管之間特殊的雙極馬達蛋白,其中2個馬達蛋白沿一條微管運動,另2個馬達結(jié)構(gòu)域沿另一條微管運動。由于2條微管分別來自二極,故極性相反。當雙極驅(qū)動蛋白四聚體沿微管向正極運動時,紡錘體二極間距離延長。反之紡錘體距離縮短。 昆明哺乳動物紡錘體兼容大部分顯微鏡紡錘體形態(tài)的變化反映了細胞分裂的不同階段。
紡錘體卵冷凍保存技術(shù)一直是研究的熱點。紡錘體作為卵母細胞減數(shù)分裂過程中的主要結(jié)構(gòu),其穩(wěn)定性和形態(tài)直接關(guān)系到卵母細胞的發(fā)育潛力和受精后的胚胎質(zhì)量。然而,傳統(tǒng)的紡錘體觀測方法往往需要對卵母細胞進行固定和染色,這不僅破壞了細胞的活性,還可能引入額外的損傷。因此,非侵入式成像技術(shù)作為一種新興的研究手段,在紡錘體卵冷凍研究中展現(xiàn)出了巨大的潛力和優(yōu)勢。非侵入式成像技術(shù)是指在不破壞細胞完整性和活性的前提下,通過光學(xué)、聲學(xué)、電磁等物理手段對細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)進行成像的方法。這類技術(shù)避免了傳統(tǒng)方法中細胞固定和染色帶來的損傷,能夠?qū)崟r、動態(tài)地觀察細胞內(nèi)部的變化,為研究者提供了更加真實、準確的細胞信息。在紡錘體卵冷凍研究中,非侵入式成像技術(shù)能夠直接觀測到冷凍和解凍過程中紡錘體的形態(tài)和動態(tài)變化,為評估冷凍效果和優(yōu)化冷凍方案提供了有力支持。
核移植,又稱體細胞核移植,是一種將體細胞的細胞核移入去核卵母細胞中的技術(shù)。這一技術(shù)的關(guān)鍵在于確保移植后的細胞核能夠在卵母細胞內(nèi)重新編程,恢復(fù)全能性,并引導(dǎo)后續(xù)的胚胎發(fā)育。自1996年克隆羊“多莉”誕生以來,核移植技術(shù)便引起了全球范圍內(nèi)的關(guān)注與研究熱潮。紡錘體是卵母細胞在減數(shù)分裂過程中形成的關(guān)鍵結(jié)構(gòu),負責精確分離染色體,確保遺傳信息的正確傳遞。然而,紡錘體對外部環(huán)境極為敏感,容易受到冷凍過程中溫度波動、滲透壓變化及冷凍保護劑毒性等因素的影響而發(fā)生損傷。因此,紡錘體卵冷凍技術(shù)的成功與否,直接關(guān)系到核移植后胚胎的發(fā)育潛力和質(zhì)量。紡錘體的形成需要多種蛋白質(zhì)的精確協(xié)作與調(diào)控。
什么是紡錘體?它有多重要?
紡錘體主要由微管蛋白組成,微管蛋白是一種含有α和β亞單位的異二聚體。紡錘體不是一成不變的,常常處于組裝和去組裝的動態(tài)變化過程中,一般在細胞分裂的中、后期,紡錘體結(jié)構(gòu)較為典型。紡錘體主要有兩個作用:其一,排列與分配染色體;其二,決定細胞胞質(zhì)分裂的分裂面。紡錘體的完整性決定了染色體分裂過程在時間和空間上的準確性。紡錘體就像一位聰明的大力士的雙手,在細胞分裂過程中,能精細的將等位染色體平均拉向細胞的兩極,確保分裂后的2個子細胞中的染色體數(shù)目相等。但是,如果這個大力士多了一只或幾只手,染色體的分配將紊亂,導(dǎo)致非整倍體。紡錘體損傷的增加多見于高齡婦女,或接觸某些化學(xué)物質(zhì)的卵母細胞。
在細胞分裂過程中,紡錘體對卵母細胞染色體的平衡、運動、分配、和極體的排出非常關(guān)鍵。卵母細胞成熟過程中的兩次減數(shù)分裂形成兩次紡錘體,卵母細胞受精、雌雄原核融合后又會形成有絲分裂紡錘體。 紡錘體在細胞分裂完成后迅速解體,為細胞質(zhì)分裂提供空間。北京雙折射性紡錘體卵細胞評價
紡錘體在減數(shù)分裂中也發(fā)揮重要作用,確保生殖細胞染色體正確分離。深圳無需染色紡錘體胚胎發(fā)育
近年來,隨著玻璃化冷凍技術(shù)的不斷發(fā)展,成熟卵母細胞紡錘體的冷凍保存研究取得了進展。研究表明,采用玻璃化冷凍法冷凍保存的成熟卵母細胞,在解凍后其紡錘體和染色體的形態(tài)及功能均能得到較好的保持。這主要得益于玻璃化冷凍過程中避免了冰晶形成對細胞的損傷,以及冷凍保護劑對細胞的有效保護。然而,值得注意的是,盡管玻璃化冷凍法在提高解凍存活率和妊娠成功率方面取得了成效,但仍存在一些問題。例如,冷凍過程中紡錘體的微管結(jié)構(gòu)可能受到低溫的影響而發(fā)生解聚,導(dǎo)致染色體分離異常。此外,冷凍保護劑的毒性也可能對卵母細胞造成一定的損傷。為了克服這些問題,研究者們進行了大量的實驗和優(yōu)化工作。例如,通過改進冷凍保護劑的配方和濃度,降低其對細胞的毒性;通過優(yōu)化冷凍速率和程序,減少冷凍過程中對細胞的機械損傷;以及通過篩選和評估不同冷凍載體和保存時間對卵母細胞冷凍效果的影響,尋找好的冷凍保存條件。深圳無需染色紡錘體胚胎發(fā)育