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免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn):1、特異性強(qiáng) 免疫學(xué)的基本原理決定了抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性,因此,免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示,如角蛋白(keratin)顯示上皮成分,LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。2、敏感性高 在應(yīng)用免疫組化的起始階段,由于技術(shù)上的限制,只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù),那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現(xiàn)在由于ABC法或SP法的出現(xiàn),使抗體稀釋上千倍、上萬(wàn)倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合,這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng),使免疫組化方法越來(lái)越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。3、定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合 該技術(shù)通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位,因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察,這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,對(duì)病理學(xué)研究的深入是十分有意義的。為減少背景干擾,選用合適的修復(fù)液,封閉液,單克隆一抗等對(duì)提高免疫組化結(jié)果質(zhì)量至關(guān)重要。潮州組織芯片免疫組化價(jià)格
幾種常用免疫組織化學(xué)方法的原理:1、免疫熒光方法:利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,先將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。2、免疫酶標(biāo)方法:基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過(guò)光鏡或電鏡,對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前常用的技術(shù)。3、免疫膠體金技術(shù):免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠,它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白,對(duì)蛋白的生物學(xué)活性則沒(méi)有明顯的影響。因此,用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,就能對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位,甚至定量研究。潮州多重免疫組化原理免疫組化的結(jié)果判讀需要注意那些細(xì)節(jié)?
免疫組化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中,對(duì)照組選擇對(duì)確保結(jié)果特異性和有效性至關(guān)重要。關(guān)鍵對(duì)照類型包括:1、空白對(duì)照:用PBS替代一抗,檢驗(yàn)二抗非特異性結(jié)合及背景染色。2、陰性組織對(duì)照:選不表達(dá)目標(biāo)抗原組織,確認(rèn)抗體特異性,防假陽(yáng)性。3、陽(yáng)性組織對(duì)照:用已知陽(yáng)性樣本驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)敏感性及染色條件。4、同型對(duì)照:用非目標(biāo)抗原的相同物種抗體,檢測(cè)二抗非特異性。5、阻斷與預(yù)吸附對(duì)照:預(yù)飽和一抗以驗(yàn)證染色特異性。6、序列特異性抗體對(duì)照:多克隆抗體實(shí)驗(yàn)中,用單克隆抗體增強(qiáng)特異性驗(yàn)證。7、實(shí)驗(yàn)條件對(duì)照:調(diào)整修復(fù)條件等,優(yōu)化實(shí)驗(yàn)參數(shù)。
免疫組化7項(xiàng)檢查的具體內(nèi)容因?qū)嶒?yàn)室和診斷需求而異,但通常涵蓋以下方面:1、ER和PR:診斷的關(guān)鍵標(biāo)志物,陽(yáng)性通常表明患者可能受益于內(nèi)分泌醫(yī)療。2、HER-2(人表皮生長(zhǎng)因子受體-2):重要標(biāo)志物,陽(yáng)性者可能需要靶向醫(yī)療。3、Ki-67:用于評(píng)估多種Tumor的增殖活性,數(shù)值越高,Tumor復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的可能性越大。4、P53:抑Ca基因,突變與多種Tumor的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。5、EGFR(表皮生長(zhǎng)因子受體):在Tumor中表達(dá),過(guò)表達(dá)或突變與Tumor惡性程度和耐藥性相關(guān)。6、CK(細(xì)胞角蛋白):標(biāo)記不同的上皮細(xì)胞類型,用于確定Tumor的組織來(lái)源。7、其他特定Tumor標(biāo)志物:根據(jù)具體Tumor類型和診斷需求而定,如針對(duì)特定類型的Tumor標(biāo)志物。免疫組化可助力制定更合理的治療方案。
在免疫組化實(shí)驗(yàn)中,選擇合適的抗體并優(yōu)化其濃度是確保實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵步驟。以下是一些建議:1、選擇合適的抗體:根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮托枰獧z測(cè)的抗原特性,選擇特異性高、交叉反應(yīng)少的抗體。注意抗體的種屬來(lái)源,避免與樣本中的內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反應(yīng)??紤]抗體的單克隆或多克隆性質(zhì),單克隆抗體通常具有更高的特異性,而多克隆抗體可能具有更高的靈敏度。2、優(yōu)化抗體濃度:一般來(lái)說(shuō),初級(jí)抗體的推薦使用濃度范圍在1:500到1:5000之間,但具體濃度需根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件和目標(biāo)抗原的表達(dá)水平進(jìn)行調(diào)整。從制造商推薦的濃度范圍內(nèi)選擇幾個(gè)不同的濃度進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),觀察信號(hào)的強(qiáng)度和背景情況。逐步調(diào)整抗體濃度,直到獲得合適信號(hào)與背景比例??梢韵葟妮^高濃度開(kāi)始,然后逐漸降低,直至找到合適濃度。3、注意事項(xiàng):仔細(xì)閱讀抗體說(shuō)明書(shū),了解抗體的適用范圍、種屬反應(yīng)性和保存條件等信息。使用新鮮制備的抗體溶液,避免使用過(guò)期或變質(zhì)的抗體。優(yōu)化其他實(shí)驗(yàn)條件,如抗原修復(fù)方法、封閉條件、孵育時(shí)間和溫度等,以提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。免疫組化對(duì)Ca分期有重要作用。清遠(yuǎn)組織芯片免疫組化原理
在Tumor研究中,免疫組化是鑒定Tumor標(biāo)志物、了解其表達(dá)模式的關(guān)鍵工具。潮州組織芯片免疫組化價(jià)格
提高免疫組化實(shí)驗(yàn)信噪比,確保結(jié)果準(zhǔn)確,需采取以下策略:1. 精選抗體與滴定:選用高特異性抗體,通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定有效濃度。2. 封閉:用5%血清或BSA封閉,減少非特異性結(jié)合。3. 強(qiáng)化洗滌:每步后充分洗滌,減少殘留。4. 優(yōu)化修復(fù):依據(jù)抗原特性調(diào)整修復(fù)條件,避免過(guò)度。5. 抑制內(nèi)源酶:用過(guò)氧化氫處理,控制背景。6. 調(diào)控孵育:適當(dāng)溫度和時(shí)間孵育抗體,防非特異性結(jié)合。7. 精確顯色:密切監(jiān)控顯色過(guò)程,避免過(guò)顯。8. 減少熒光干擾:選用特異熒光標(biāo)記,采用淬滅劑或光譜分離。9. 材料與無(wú)菌操作:確保試劑新鮮,操作無(wú)污染。10. 對(duì)照設(shè)置:設(shè)立陰性和陽(yáng)性對(duì)照,驗(yàn)證特異性。11. 樣本標(biāo)準(zhǔn)化處理:規(guī)范固定、脫蠟等,保持樣本質(zhì)量。綜合運(yùn)用這些策略,針對(duì)具體條件調(diào)整,持續(xù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程,可明顯提升實(shí)驗(yàn)質(zhì)量和可靠性。潮州組織芯片免疫組化價(jià)格