北京外泌體提取

與PC-3細(xì)胞相比，PC-3細(xì)胞外泌體中含有較高豐度的鞘糖脂、鞘磷脂、膽固醇和磷脂酰絲氨酸。外泌體常見(jiàn)的表面蛋白質(zhì)包括四跨膜蛋白(如CD63、CD9、CD81)、黏附蛋白(如L1CAM、LAMP2)、整合素和糖蛋白(如纖連蛋白)等，而外泌體囊泡內(nèi)蛋白質(zhì)則與來(lái)源細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)密切相關(guān)，包含例如熱休克蛋白(HSP70、HSP90)和細(xì)胞骨架蛋白(actin、tubulin、cofilin)等。除此之外，外泌體中還攜帶有來(lái)源細(xì)胞的miRNAs、mRNAs、non-codingRNAs、circularRNAs和DNA等遺傳物質(zhì)。外泌體的完整囊泡結(jié)構(gòu)能夠保護(hù)其內(nèi)部生物分子不受體液中各種酶的影響從而保持其完整性和生物活性。外泌體在化療藥物的促轉(zhuǎn)移過(guò)程中具有重要的作用。北京外泌體提取

雖然外泌體作為藥物載體具有生物兼容性、穩(wěn)定性和內(nèi)在靶向性等潛在優(yōu)勢(shì)，但是外泌體在藥物遞送中的應(yīng)用研究才剛剛起步，尚有許多問(wèn)題需解決：選擇何種細(xì)胞作為外泌體的供體：如DCs來(lái)源的外泌體可用于免疫治理，因其富含組織相容復(fù)合物（MHC）及T細(xì)胞共刺激分子，能在體內(nèi)喚醒T淋巴細(xì)胞，進(jìn)而抑制瘤細(xì)胞增殖；骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）來(lái)源的外泌體對(duì)KRAS基因有抑制作用；γδT細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞（NK）、瘤細(xì)胞等均有研究報(bào)道可作為載藥級(jí)別外泌體的細(xì)胞來(lái)源。成都血清外泌體外泌體及其攜帶的組分參與肝臟細(xì)胞的增殖、再生和遷移等生理過(guò)程，在肝臟疾病和肝損傷中起著重要作用。

外泌體運(yùn)輸?shù)幕蝾?lèi)藥物也可以是miRNA，miRNA是一類(lèi)非編碼的內(nèi)源性RNA，主要用于調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄后的基因表達(dá)。miRNA主要通過(guò)與mRNA的未翻譯的區(qū)域(UTRs)結(jié)合起到抑制基因表達(dá)和降解mRNA的作用。與siRNA不同，miRNA抑制mRNA的表達(dá)不需要完美的堿基配對(duì)，因此每種miRNA可以抑制多種蛋白質(zhì)的表達(dá)，而每種siRNA只針對(duì)一種蛋白質(zhì)。miRNA的運(yùn)載也存在著種種挑戰(zhàn):miRNA體內(nèi)穩(wěn)定性差、生物分布不理想、易被體內(nèi)酶降解以及容易引起副反應(yīng)等。越來(lái)越多的研究表明外泌體也是體內(nèi)運(yùn)載miRNA的優(yōu)良載體，并且利用外泌體運(yùn)輸miRNA的zhiliao方法已經(jīng)在許多疾病模型中得以應(yīng)用。

外泌體是細(xì)胞間信息傳遞的重要“信使”,可通過(guò)三種方式介導(dǎo)細(xì)胞通訊:(1)外泌體以旁分泌的方式與靶細(xì)胞相互作用,通過(guò)受體–配體作用黏附到靶細(xì)胞表面,隨后被內(nèi)吞入靶細(xì)胞,或直接將內(nèi)容物釋放到靶細(xì)胞內(nèi),從而激huo靶細(xì)胞;(2)外泌體的胞外膜蛋白可以被蛋白酶切割,產(chǎn)生的片段可以與靶細(xì)胞的細(xì)胞表面受體結(jié)合,從而激huo靶細(xì)胞;(3)外泌體還可以與靶細(xì)胞直接接觸發(fā)生膜融合,導(dǎo)致外泌體中的蛋白和核酸非選擇性轉(zhuǎn)移到目標(biāo)細(xì)胞,從而引起靶細(xì)胞的響應(yīng)。通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞間的通訊,外泌體不jin能夠參與多種生理過(guò)程,比如消除胞內(nèi)陳舊分子、呈遞抗原、分化調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞或髓樣細(xì)胞以抑制免疫反應(yīng),而且還可以參與疾病形成的病理過(guò)程,如通過(guò)與受體細(xì)胞的相互作用傳播病原物質(zhì)、促進(jìn)中流轉(zhuǎn)移過(guò)程中的血管生長(zhǎng)和中流細(xì)胞遷移。外泌體給后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生了許多障礙。

由于卵巢中流細(xì)胞質(zhì)膜上的磷脂酰絲氨酸（phosphati[1]dylserine，PS）可以外泌體形式分泌入血，惡性卵巢ai患者血漿外泌體中的PS水平明顯高于卵巢良xing病變患者和健康對(duì)照者，因此外泌體中的PS可用于協(xié)助早期卵巢惡性中流的篩查和診斷。外泌體可穿透血-腦脊液屏障的特點(diǎn)也為腦中流患者提供了早期診斷的重要工具。血漿微囊泡EGFRvIIImRNA已被證明可作為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者診斷的支持證據(jù)。2020年，DavidLyden和WilliamR.Jarnagin教授團(tuán)隊(duì)合作，通過(guò)探究來(lái)自不同ai種組織、血漿和其他體液的426個(gè)人類(lèi)樣品中細(xì)胞外囊泡和顆粒（extracellularvesicleandparticle，EVP）的蛋白質(zhì)組學(xué)特征，鑒定出一批中流特異性血漿EVP蛋白（特異度和靈敏度分別為95%和90%），并可區(qū)分患者的中流類(lèi)型，使基于外泌體的中流診斷和鑒別診斷向前邁進(jìn)了一步。外泌體研究相對(duì)困難，需要盡快開(kāi)發(fā)操作簡(jiǎn)單、可提取高純度外泌體的技術(shù)。北京外泌體提取

外泌體被包裹在堅(jiān)硬的雙層膜中，雙層膜保護(hù)外泌體的內(nèi)容物，使外泌體能夠在組織中長(zhǎng)距離移動(dòng)。北京外泌體提取

一類(lèi)外泌體中常見(jiàn)的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥(niǎo)苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合，有文獻(xiàn)報(bào)道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)于早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)于晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易濉嵝菘说鞍准易?。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類(lèi)的酶、核糖體蛋白（RPS3）、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子（黑色素瘤分化相關(guān)因子,ARF1,CDC42,人類(lèi)紅細(xì)胞膜整合蛋白,SLC9A3R1）、粘附因子、細(xì)胞骨架蛋白以及泛素等。北京外泌體提取

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