細(xì)胞上清外泌體芯片

外泌體的提取方法：免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不寬泛。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型。細(xì)胞上清外泌體芯片

目前市面上開發(fā)的外泌體提取試劑盒，是根據(jù)外泌體表面由類似于細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙分子層具有一定疏水性這一特性，用試劑捆綁水分子，從而可通過常規(guī)離心收集沉淀獲取外泌體。這種快速提取外泌體的方法雖簡便快捷、樣本需求少、對(duì)設(shè)備要求低，但與差速離心方法類似，其分離得到的沉淀包含其他細(xì)胞分泌的囊泡，且血清中含有大量血清蛋白分子，成分復(fù)雜，很可能摻雜一些未知的疏水大分子物質(zhì)。Sabapatha等曾根據(jù)來源于胎盤的外泌體表面特異表達(dá)這一特性，使用耦合到磁珠的抗抗體，采用磁珠分選方法分離血漿中胎盤來源外泌體。此法可以提取的胎盤外泌體量少，不適用于大規(guī)模提取制備，且免疫磁珠價(jià)格昂貴，不利于提取技術(shù)的普及。江西CD9外泌體慢病毒包裝臨床前研究的證據(jù)表明干細(xì)胞釋放的外泌體可作為心肌修復(fù)的潛在無細(xì)胞治理劑。

外泌體(exosomes)是一類由細(xì)胞分泌到胞外的囊泡。與其他兩種胞外囊泡(微囊泡和凋亡小體)相比，外泌體在產(chǎn)生方式、尺寸、密度和內(nèi)容物等方面存在明顯差異。不同于微囊泡“出芽”的形成方式，外泌體主要通過胞吐過程釋放至細(xì)胞外:首先細(xì)胞膜向內(nèi)凹陷形成早期核內(nèi)體(earlyendosomes)，早期核內(nèi)體進(jìn)一步內(nèi)陷形成多泡體(multivesicularbodies，MVBs)，其中一部分多泡體與溶酶體(lysosome)融合，進(jìn)而降解;另一部分與細(xì)胞膜融合，將其內(nèi)部所包含的囊泡釋放至胞外，即為外泌體。外泌體具有獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)，其直徑為30～200nm，密度為1.13～1.19g/mL，組成包括細(xì)胞來源相關(guān)的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、RNA、DNA等物質(zhì)，在其表面連接有大量的糖鏈，如甘露糖、聚乳糖胺和α2，6-唾液酸等。

外泌體中包含的mRNAs和miRNAs在進(jìn)入受體細(xì)胞后仍具有翻譯蛋白質(zhì)、促進(jìn)病毒感ran等功能。據(jù)估計(jì)，單個(gè)外泌體含有約≤100拷貝數(shù)的蛋白質(zhì)和≤10000拷貝數(shù)的核苷酸。不同細(xì)胞來源的外泌體中既包含與細(xì)胞形成、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的共有成分，也包含與來源細(xì)胞的生物功能相關(guān)的特異分子。如B淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、肥大細(xì)胞和腸上皮細(xì)胞來源的外泌體含有大量的主要組織相容性復(fù)合體蛋白質(zhì)MHCclassⅡ和MHCclassⅠ，血小板和T細(xì)胞來源的外泌體則包含諸如血管性血友病因子、穿孔素和顆粒酶等特殊蛋白質(zhì)，而ai細(xì)胞來源的外泌體表面可能含有中流特異的蛋白質(zhì)分子。這類特異分子在外泌體介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、參與生理病理過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。外泌體其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。

利用抗ai癥藥物進(jìn)行中流zhiliao是抑制中流的一個(gè)重要方法，不過目前抗ai癥藥物的運(yùn)載存在著種種挑戰(zhàn)，主要體現(xiàn)在以下幾點(diǎn):(1)抗ai癥藥物的疏水性;(2)抗ai癥藥物的毒性以及非靶向性;(3)易被人體清chu，體內(nèi)循環(huán)的半衰期很短等。采用外泌體運(yùn)輸抗ai癥藥物，可以提高藥物體系的水溶性，降低藥物對(duì)人體的毒性以及避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉從而延長其循環(huán)時(shí)間。近期，兩種抗ai癥藥物———紫杉醇(PTX)和阿霉素(DOX)已經(jīng)成功被載入外泌體中，并對(duì)其抗中流作用進(jìn)行了研究。高濃度集聚誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的TNF-α，可使類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎惡化。asce外泌體

外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。細(xì)胞上清外泌體芯片

外泌體在神經(jīng)系統(tǒng)中與神經(jīng)回路的控制相關(guān)，同時(shí)各種神經(jīng)退行性疾病的致病蛋白還可以通過外泌體釋放到細(xì)胞外并傳遞到其他細(xì)胞，與病情發(fā)展密切相關(guān)。病細(xì)胞釋放的外泌體含有許多與血管新生和免疫逃逸相關(guān)的分子，構(gòu)建適合病細(xì)胞生長的微環(huán)境，促進(jìn)病細(xì)胞的發(fā)展。另外，病細(xì)胞來源的外泌體上粘著分子的表達(dá)形式?jīng)Q定著癥狀向身體部位的轉(zhuǎn)移途徑。近，有報(bào)告指出脂肪細(xì)胞釋放的外泌體對(duì)肝臟的遺傳基因表達(dá)有控制作用。許多病毒利用外泌體的產(chǎn)生路徑傳播細(xì)胞，受病毒傳播的細(xì)菌和寄生蟲通過外泌體控制其他受細(xì)胞傳播的細(xì)菌、寄生蟲的活動(dòng)。細(xì)胞上清外泌體芯片

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