asce外泌體

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-04-02

外泌體的提取分離方法:1、PEG-base沉淀法:聚乙二醇可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等,因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑。2、試劑盒提取:近幾年來,市場(chǎng)上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,有的是通過特殊設(shè)計(jì)的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化,也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。在免疫系統(tǒng)中,據(jù)報(bào)道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制。asce外泌體

asce外泌體,外泌體提取試劑盒

AFC自動(dòng)收集器是將qEV分離法這一過程自動(dòng)化的儀器,將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi),根據(jù)稱重精確測(cè)量流體體積,可精確的測(cè)量到樣品中每一個(gè)液滴的重量并精確測(cè)量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨(dú)中心孔中并送至廢液桶,避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中。在提取期間,當(dāng)達(dá)到設(shè)定的提取體積后,轉(zhuǎn)盤會(huì)自動(dòng)旋轉(zhuǎn)到下一個(gè)微量離心管繼續(xù)收集,到收集完成后自動(dòng)停止。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴(kuò)增效率,而且由于采用微滴計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行定量,可以不依賴與RT-PCR的熒光信號(hào)和Ct值,對(duì)所測(cè)樣品中的核酸分子進(jìn)行一定定量。海洋生物外泌體PKH26電子顯微鏡下外泌體大小不一,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。

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外泌體生物學(xué)功能:1、在心血管系統(tǒng)中,據(jù)報(bào)道,源自人胚胎干細(xì)胞(ESC)的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷;2、在免疫系統(tǒng)中,據(jù)報(bào)道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制;3、在中樞的神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中,外泌體的作用是消除廢物并介導(dǎo)大腦活動(dòng),從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)理;迄今為止,尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體-細(xì)胞結(jié)合的途徑。然而,比較明顯,其結(jié)合過程從外泌體識(shí)別受體細(xì)胞PM上的特定受體開始。膜受體的識(shí)別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ),它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號(hào)通路的活躍,外泌體與PM融合或外泌體的內(nèi)吞作用,從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)和RNA直接釋放到受體細(xì)胞中。從研究上來講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡。

肉瘤細(xì)胞可以通過產(chǎn)生異常的抗肉瘤或肉瘤免疫應(yīng)答并促進(jìn)瘤子細(xì)胞的活動(dòng)而大量產(chǎn)生外泌體,這些外泌體富含促病的細(xì)胞成分,例如PD-L1、mRNA和micro-RNA等免疫阻止蛋白,參與病癥的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和耐藥性。值得注意的是,肉瘤分泌的外泌體表面和外泌體顆粒中均存在的PD-L1。ESCRT(運(yùn)輸所需的內(nèi)體分選復(fù)合體)參與將生物分子包裝到外泌體中,nSMase2(中性鞘磷脂酶2)和Rab蛋白調(diào)節(jié)外泌體分泌。已確定ESCRT、Rab27a和nSMase2參與外泌體PD-L1的包裝和分泌。外泌體可以將PD-L1轉(zhuǎn)運(yùn)至其他PD-L1表達(dá)低或沒有PD-L1的細(xì)胞,并可能與PD-1結(jié)合。外泌體屬于胞外囊泡類,除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。

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外泌體提取在短時(shí)間(一周之內(nèi))使用,可以放在4度保存,如果長時(shí)間保存可以放在-20度或-80度保存。也可以將外泌體進(jìn)行分裝,分別放在-20度或-80度。外泌體檢測(cè)方法:外泌體分離之后,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,多角度進(jìn)行鑒定。l、透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。2、納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度快,檢測(cè)后能提供外泌體粒徑和濃度信息。NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一。外泌體制備流程

外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。asce外泌體

外泌體生物學(xué)功能:1、在心血管系統(tǒng)中,據(jù)報(bào)道,源自人胚胎干細(xì)胞(ESC)的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷;2、在免疫系統(tǒng)中,據(jù)報(bào)道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制;3、在中樞的神經(jīng)系統(tǒng)中,外泌體的作用是消除廢物并介導(dǎo)大腦活動(dòng),從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)理;迄今為止,尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體-細(xì)胞結(jié)合的途徑。然而,比較明顯,其結(jié)合過程從外泌體識(shí)別受體細(xì)胞PM上的特定受體開始。膜受體的識(shí)別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ),它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號(hào)通路的活躍,外泌體與PM融合或外泌體的內(nèi)吞作用,從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)和RNA直接釋放到受體細(xì)胞中。asce外泌體

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