外泌體細胞培養(yǎng)

外泌體為細胞療法中的不同合成分子和生物分子的遞送提供了廣闊的前景和嶄新的診療領(lǐng)域。外泌體還顯示出了在診療各種疾病（如心肌病和神經(jīng)?。┓矫娴臐摿Α５?，在實際應(yīng)用外泌體之前，需要使用大型動物模型進行進一步研究和臨床試驗。同時需要開發(fā)大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術(shù)和策略。另外，在研究和評估外泌體的副作用和功效時，必須考慮到肉瘤細胞來源的外泌體可能增強肉瘤生長的潛在風(fēng)險。外泌體給藥途徑：給藥途徑是獲得所需功效的重要參數(shù)。外泌體可以通過多種方法給藥，但是，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑。通過利用增強通透性和保留（EPR）效應(yīng)，在荷瘤動物中靜脈內(nèi)遞送外來體似乎是有用的。在某些容易達到肉瘤部位的不同惡性肉瘤中，外泌體療法的給藥途徑是瘤內(nèi)注射。在疾病部位直接注射外泌體的優(yōu)點是可以特異性地運送裝載的藥物。另外口服給藥，腹腔給藥，皮內(nèi)給藥和鼻內(nèi)給藥途徑已成功用于外泌體遞送。外泌體屬于胞外囊泡類，除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。外泌體細胞培養(yǎng)

PEG沉淀法分離外泌體：通常通過將無水聚合物，如聚乙二醇（PEG），與樣品混合來沉淀外泌體。PEG聚合物競爭性結(jié)合水分子，增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結(jié)合力從而沉淀外泌體，然后通過離心分離外泌體。這種分離的方法快速，簡便，可用于各種起始體積（從100μL到幾毫升）適合于各種研究和臨床設(shè)定。然而，這種方法缺乏選擇性，PEG聚合物不只會導(dǎo)致外泌體小泡沉淀，還會引起其他細胞外囊泡、細胞外蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)聚集體沉淀。因此，在使用這種方法之前，必須進行樣品預(yù)處理，例如過濾或超速離心，以減少較終的外泌體制劑的污染。廣州外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)外泌體在免疫調(diào)控、肉瘤轉(zhuǎn)移和血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域發(fā)揮著非常重要的作用。

近年來，外泌體的捕獲技術(shù)越來越多，微流體系也被用于外泌體提取，此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高，且可及時獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測。在初次注射時外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面，并在隨后的PBS注射中沖洗掉。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜，所需的樣本量取決于流動通道的長度。另外，樣品量的注入速率比較低，因此，對于大樣品量，將需要較長的處理時間。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機理中具有重要的功能。目前，研究人員已開發(fā)了多種方法來分離外泌體，離心技術(shù)仍然是常用方法，其他方法，例如過濾、磁珠分離和色譜法等，也顯示出獨特的優(yōu)勢，但目前仍然沒有一種公認(rèn)有效的提取方法，研究人員應(yīng)針對不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。

外泌體研究背景：胞外囊泡是從細胞膜上脫落或者由細胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體，主要由微囊泡、凋亡小體、外泌體組成。而外泌體是其中一類小囊泡，直徑為30~150nm，密度1.10~1.18g/ml，可攜帶核酸、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等，存在于血液、唾液、尿液等多種體液中。越來越多的研究證實，外泌體可以通過細胞間轉(zhuǎn)移核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等特定物質(zhì)，發(fā)揮特殊的功能。如在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中、腫細胞細胞發(fā)生了發(fā)展、神經(jīng)細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價和預(yù)后分析。外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學(xué)活性。外泌體的直徑比微泡的要小，后者直徑為100nm-1μm。

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動力學(xué)特性，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應(yīng)方面發(fā)揮作用。除了它們的診療潛力，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報道，并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復(fù)雜貨物的組成。基于外泌體的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價值。疾病的進展和對診療的反應(yīng)也可以通過外泌體的多組分分析來確定。外泌體提取在短時間（一周之內(nèi)）使用，可以放在4度保存，如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存。外泌體膠原蛋白

外泌體作為核酸的藥物遞送載體。外泌體細胞培養(yǎng)

細胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細胞、成纖維細胞和間充質(zhì)細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產(chǎn)生特定的作用，包括新抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的。完整的外泌體的進入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用、網(wǎng)格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體內(nèi)容物的進入或外泌體信號的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細胞內(nèi)信號或融合，從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細胞質(zhì)中。外泌體細胞培養(yǎng)

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