外泌體細胞培養(yǎng)

透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像，以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒，該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別，在SEM中，電子與樣品中的粒子相互作用時會發(fā)生散射，捕獲并檢測散射的電子，從而生成粒子圖像。但是，在TEM中，不與粒子相互作用的電子穿過樣品，并使用熒光屏進行檢測。電子顯微鏡下外泌體大小不一，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預(yù)處理和制備要求較高，外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響；另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜，不適合進行大量快速的測量；而且由于樣本經(jīng)過了干燥、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過程，對生物樣本的結(jié)構(gòu)會造成一定的破壞，從而影響觀察的效果，無法準(zhǔn)確測量外泌體濃度。安徽植物外泌體鑒定磁珠免疫法分離的外泌體，生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。外泌體作為小分子的藥物傳遞載體。外泌體細胞培養(yǎng)

全轉(zhuǎn)錄組測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA，主要為mRNA和lncRNA、circRNA等非編碼RNA。外泌體中攜帶有來自母本細胞的多種蛋白質(zhì)、脂類、短鏈RNA和長鏈RNA等重要信息。對外泌體中的長鏈RNA進行全轉(zhuǎn)錄組測序及分析，不只能夠篩選外泌體攜帶的特異Biomarker，同時對深入了解疾病或不同發(fā)育階段的內(nèi)在機制也有重要意義。外泌體全轉(zhuǎn)錄組測序體系，充分結(jié)合了微量核酸建庫技術(shù)、NGS技術(shù)和全新的生物信息序列比對算法，可實現(xiàn)對1mL血漿中的外泌體即可進行mRNA、lncRNA和circRNA等RNAs充分測序，獲取周全的外泌體轉(zhuǎn)錄組信息。乳液提取試劑盒成分外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）：將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中，由于抗體-抗原相互作用，表達抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉，并使用另一種抗體檢測固定的外泌體。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體，當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)液（已知外泌體的量）創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時，甚至可以進行定量。但是，此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進行預(yù)處理。同樣，流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度。

外泌體的臨床應(yīng)用：間充質(zhì)干細胞是目前較普遍使用的細胞類型，它具有自我更新，多向分化、分泌細胞因子和細胞外囊泡體、免疫調(diào)節(jié)、來源普遍等特點，在流感病毒的臨床診療中取得了良好的成果。間充質(zhì)干細胞來源外泌體與間充質(zhì)干細胞有著相似的功能，包括修復(fù)與再生組織、阻止炎癥反應(yīng)及調(diào)節(jié)機體免疫，但外泌體相對于間充質(zhì)干細胞又有許多優(yōu)勢。首先，間充質(zhì)干細胞來源外泌體更穩(wěn)定，更好保存，易于管理和控制，可以人為改變其內(nèi)容物的種類和數(shù)量。其次，它們沒有活細胞，不會像間充質(zhì)干細胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導(dǎo)致疾病加重；另外，它有可能避免某些針對間充質(zhì)干細胞的調(diào)控問題，間充質(zhì)干細胞來源外泌體有代替間充質(zhì)干細胞的趨勢。外泌體是包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30–150nm)，由所有體外和體內(nèi)細胞持續(xù)分泌。

質(zhì)膜的連續(xù)內(nèi)陷較終導(dǎo)致多泡體的形成，多泡體可與細胞內(nèi)的其他囊泡和細胞器交叉，從而增加了外泌體成分的多樣性。根據(jù)細胞來源的不同，細胞外囊泡，包括外泌體，可以包含細胞的許多成分，包括DNA、RNA、脂質(zhì)、代謝物、胞質(zhì)和細胞表面蛋白。目前產(chǎn)生外泌體的生理目的尚不清楚，需要進一步研究。一個推測的作用是外泌體可能從細胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。較近的研究也表明外泌體中特定細胞成分的功能、靶向、機制驅(qū)動的積累，提示它們在調(diào)節(jié)細胞間通訊中發(fā)揮作用。1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn)。血清肌酐與外泌體

一個推測的作用是外泌體可能從細胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。外泌體細胞培養(yǎng)

外泌體較有用的特性之一是它們穿過屏障（如細胞質(zhì)膜和血/腦屏障）的能力。這使它們成為理想的診療傳遞分子。外泌體由于其天然的材料運輸特性，固有的長期循環(huán)能力和出色的生物相容性而具有比較大的潛力成為藥物遞送載體，其適合于遞送各種化學(xué)物質(zhì)，蛋白質(zhì)，核酸和基因診療劑。（1）外泌體作為小分子的藥物傳遞載體：關(guān)于外泌體遞送姜黃素，多巴胺，PTX和DOX等化學(xué)診療藥物的報道已有充分文獻記載。（2）外泌體作為蛋白質(zhì)的藥物遞送載體：已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體可遞送多種蛋白質(zhì)，例如酶，細胞骨架蛋白質(zhì)和跨膜蛋白質(zhì)。（3）外泌體作為核酸的藥物遞送載體：研究表明，外泌體天然的可以攜帶遺傳（例如miRNA，siRNA）到靶細胞中，從而在生物學(xué)和致病過程中誘導(dǎo)遺傳修飾。外泌體的這些特征已成為涉及遺傳療法和使用外泌體進行研究的主要策略。外泌體細胞培養(yǎng)

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