外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是外泌體提取比較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時,量少。四是免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進(jìn)行下一步的實驗。五是PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態(tài)完整,純度比較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法比較新數(shù)據(jù),表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體外泌體檢測,外泌體檢測服務(wù),醫(yī)學(xué)科研實驗服務(wù)。廣西哪家做外泌體實驗
外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合,有文獻(xiàn)報道稱RAB4, RAB5和 RAB11主要出現(xiàn)于早期以及回收的核內(nèi)體中,RAB7 和 RAB9主要出現(xiàn)于晚期的核內(nèi)體?,F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白(包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63, CD81 和CD9))、熱休克蛋白家族((HSP60, HSP70, HSPA5, CCT2 和HSP90以及一些細(xì)胞特異性的蛋白包括A33(結(jié)腸上皮細(xì)胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細(xì)胞來源)、CD86(抗原提呈細(xì)胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細(xì)胞)。河北推薦的外泌體提取外泌體關(guān)鍵知識,你必須知道的那些事,南京英瀚斯生物。
外泌體的主要功能被認(rèn)為是細(xì)胞之間的信息傳遞,了解它帶有的蛋白質(zhì)和多種RNA上的信息就變得尤其重要。2019年外泌體中標(biāo)項目中帶有熱門話題miRNA、lncRNA和環(huán)狀RNA的項目數(shù)量,我們可以看到,外泌體中的miRNA和lncRNA過去研究的是比較多了,例如發(fā)表在Hepatology(IF=14.971)上的一篇文章表明肝ai細(xì)胞釋放的外泌體miRNA調(diào)控巨噬細(xì)胞程序性死亡配體1的表達(dá)。另一篇文章發(fā)現(xiàn)膽管細(xì)胞來源的外泌體LncRNA H19促進(jìn)肝星狀細(xì)胞活化和膽汁淤積性肝纖維化。相對的,外泌體中的circRNA研究目前還較少,而circRNA分子自身獨特的穩(wěn)定性、組織特異性、時序和疾病特異性等,使它很有可能成為外泌體檢測的下一個熱門分子。
外泌體提取,PEG-base沉淀法,聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等,因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑。通過差速超速離心法(Differential Ultracentrifugation)從細(xì)胞培養(yǎng)基上清或血漿血清中提取外泌體。南京英瀚斯,專業(yè)的外泌體提取、鑒定服務(wù)。
外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn), 1987年Johnstone將其命名為“exosome”?,F(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中 。外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年, Valadi等發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細(xì)胞分泌 的 exosome可以被人的肥大細(xì)胞捕獲,并且其攜帶的mRNA成分可以進(jìn)入細(xì)胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì),不僅只是mRNA,exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性,在進(jìn)入靶細(xì)胞后可以靶向調(diào)節(jié)細(xì)胞中mRNA的水平。這一發(fā)現(xiàn)使得研究人員對exosome的研究熱情激增,截止已經(jīng)通過286項研究發(fā)現(xiàn)了41860種蛋白質(zhì)、2838種microRNA、3408種mRNA。外泌體提取,實驗經(jīng)驗豐富。河南靠譜的外泌體檢測
外泌體(Exosomes)鑒定+外泌體示蹤方法 南京英瀚斯生物。廣西哪家做外泌體實驗
外泌體的產(chǎn)生過程為:細(xì)胞膜內(nèi)陷,形成內(nèi)體(endosome),再形成多泡體(multivesicularbodies,MVB),比較后分泌到胞外成為外泌體。外泌體中攜帶有母細(xì)胞的多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息。外泌體比較早見于1981年,EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡,并命名為exosome。對于外泌體的作用,當(dāng)時推測為細(xì)胞排泄廢物的一種方式。1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會分泌抗原呈遞外泌體(antigenpresentingvesicle),所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+細(xì)胞的抗**反應(yīng)。2007年HValadi等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質(zhì)。隨著有關(guān)外泌體研究越來越多,研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機體免疫應(yīng)答、抗原呈遞、細(xì)胞分化、**生長于侵襲等各種生物過程中。廣西哪家做外泌體實驗
南京英瀚斯生物科技有限公司擁有醫(yī)學(xué)實驗外包、動物實驗外包、細(xì)胞實驗外包、分子實驗檢測、病理染色檢測、科研實驗外包、動物模型構(gòu)建、第三方檢測、病理組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)、電生理檢測、醫(yī)學(xué)研究和試驗發(fā)展、生物醫(yī)藥技術(shù)研發(fā)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)咨詢及技術(shù)服務(wù)等多項業(yè)務(wù),主營業(yè)務(wù)涵蓋實驗外包,動物模型構(gòu)建,細(xì)胞分子實驗,病理檢測。目前我公司在職員工以90后為主,是一個有活力有能力有創(chuàng)新精神的團隊。公司業(yè)務(wù)范圍主要包括:實驗外包,動物模型構(gòu)建,細(xì)胞分子實驗,病理檢測等。公司奉行顧客至上、質(zhì)量為本的經(jīng)營宗旨,深受客戶好評。公司深耕實驗外包,動物模型構(gòu)建,細(xì)胞分子實驗,病理檢測,正積蓄著更大的能量,向更廣闊的空間、更寬泛的領(lǐng)域拓展。