ER培養(yǎng)基

丁胺卡那霉素功能與主治：①本品適用于綠膿桿菌及其他假單胞菌屬、大腸桿菌、變形桿菌（吲哚陽性和吲哚陰性）、普魯威登菌、克雷伯菌、腸桿菌、沙雷菌屬、不動桿菌屬與葡萄球菌屬等所致的菌血癥、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、敗血癥（包括新生兒膿毒癥）、呼吸道傳染、骨關(guān)節(jié)傳染、神經(jīng)系統(tǒng)傳染（包括腦膜炎）、皮膚軟組織傳染、膽道傳染、腹腔傳染（包括腹膜炎）、燒傷、手術(shù)后傳染（包括血管外科手術(shù)后傳染）及復(fù)發(fā)性尿路傳染等。②阿米卡星不宜用于單純性尿路傳染初治病例，除非致病菌對其他毒性較低的克菌藥均不敏感。③阿米卡星對大部分氨基糖苷類純化酶穩(wěn)定，故適用于治好革蘭陰性桿菌中卡那霉素、慶大霉素或妥布霉素耐藥菌株，尤其如普魯威登菌屬、粘質(zhì)沙雷菌和綠膿桿菌所致傳染。氨芐青霉素溶液配置：加入40ml滅菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。ER培養(yǎng)基

加藥時間:由于基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)之后要一段時間才能表達(dá)出蛋白質(zhì)。所以篩選不能太早；但是也不能太晚，因為轉(zhuǎn)染了外源基因的細(xì)胞代謝負(fù)荷較大，增值較慢，時間長了就會被沒有外源基因轉(zhuǎn)入的細(xì)胞所淹沒，終導(dǎo)致篩選不出陽性克隆，一般要在轉(zhuǎn)染24小時之后才開始加G418篩選。隨著細(xì)胞的代謝G418的濃度和活性都回下降，所以每3~5天都要更換一次含有G418的篩選液。這時藥物濃度可以降至200ug/ml。培養(yǎng)液:加藥篩選約6天左右，細(xì)胞會大量死亡，孔中只剩下的細(xì)胞。這時會出現(xiàn)兩個問題：1.死亡的細(xì)胞會裂解釋放出有害物質(zhì)，導(dǎo)致那些有neo表達(dá)的陽性細(xì)胞死亡，即非選擇性死亡。2.孔中細(xì)胞數(shù)目很少，細(xì)胞之間的信號會變得很弱，也會導(dǎo)致陽性細(xì)胞的狀態(tài)不佳甚至死亡。這個時候需要一種特殊的培養(yǎng)液：假如你要轉(zhuǎn)染3T3細(xì)胞，在3T3細(xì)胞匯合度達(dá)到80%的時候，換液，培養(yǎng)過夜之后收集培養(yǎng)液，通過濾器消毒，和新鮮的培養(yǎng)液按1：1混合備用。再轉(zhuǎn)染后篩選過程中就可以應(yīng)用這種培養(yǎng)基。ER培養(yǎng)基室溫條件，水平轉(zhuǎn)子離心400g，離心30-40min，可見細(xì)胞分層。

G418又稱遺傳霉素,新霉素,對細(xì)菌、酵母、高等植物、原生生物、哺乳動物細(xì)胞具有氨基苷類毒性,對真核細(xì)胞進(jìn)行篩選。G418(G418,G 418,G-418,Geneticin)是一種氨基糖苷類 ,這種氨基糖類的結(jié)構(gòu)和新霉素、慶大霉素、卡那霉素相似，在分子遺傳試驗中,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染常用的抗性篩選試劑。它通過克制轉(zhuǎn)座子Tn601，Tn5的基因,干擾核糖體功能而阻斷蛋白質(zhì)合成,對原核和真核等細(xì)胞產(chǎn)生東西,包括細(xì)菌、酵母、植物和哺乳動物細(xì)胞 ,也包括原生動物和蠕蟲。當(dāng)neo基因被整合進(jìn)真核細(xì)胞DNA后 ,則能啟動neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為ｍＲＮＡ ,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的表達(dá) ,使細(xì)胞獲得抗性而能在含有Ｇ418的選擇性培養(yǎng)基中生長。Ｇ418的這一選擇特性 ,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面得以普遍應(yīng)用。

兩性霉素B溶液（10mg/ml）：注意事項：兩性霉素B作用原理在于其與菌類細(xì)胞膜上的Ergosterol結(jié)合導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性發(fā)生變化，使菌類細(xì)胞內(nèi)鉀離子、氨基酸通透到到膜外，破壞菌類正常代謝，進(jìn)而使菌類細(xì)胞死亡。儲存條件：4℃，避光，12個月。兩性霉素B又稱廬山霉素，是從鏈霉菌(Streptomycesnodosus)的培養(yǎng)液中分離而得的一種多烯類克菌類，其抑菌機(jī)制是能與菌類細(xì)胞膜上的麥角甾醇結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)胞膜受損，通透性提高，細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外漏，破壞正常代謝而起抑菌作用。細(xì)菌因其細(xì)胞膜上不含麥角甾醇成分，故無效。兩性霉素B克菌類譜廣，幾乎對絕大部分菌類均有效，耐藥菌株少見，高濃度時呈殺菌作用。兩性霉素B溶液在室溫不穩(wěn)定，易被光、熱和酸破壞，在pH6.0～7.5下克菌作用很好。殺滅曲線的建立：每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

緩沖溶液的配制和應(yīng)用：為了配制一定pH的緩沖溶液，首先選定一個弱酸，它的pKaφ盡可能接近所需配制的緩沖溶液的pH值，然后計算酸與堿的濃度比，根據(jù)此濃度比便可配制所需緩沖溶液。以上主要以弱酸及其鹽組成的緩沖溶液為例說明它的作用原理、pH計算和配制方法。對于弱堿及其鹽組成的緩沖溶液可采用相同的方法。緩沖溶液在物質(zhì)分離和成分分析等方面應(yīng)用普遍，如鑒定Mg2 離子時，可用下面的反應(yīng)：白色磷酸銨鎂沉淀溶于酸，故反應(yīng)需在堿性溶液中進(jìn)行，但堿性太強(qiáng)，可能生成白色Mg（OH）2沉淀，所以反應(yīng)的pH值需控制在一定范圍內(nèi)，因此利用NH3·H2O和NH4Cl組成的緩沖溶液，保持溶液的pH值條件下，進(jìn)行上述反應(yīng)。丁胺卡那霉素給藥說明：燒傷患者中本品的半衰期較短（1—1.5小時）。ER培養(yǎng)基

固體試劑的取用:藥匙每取完一種試劑后都必須用干凈的紙擦拭干凈。ER培養(yǎng)基

潮霉素B溶液(Hygromycin B,50mg/ml)>20ml產(chǎn)品購須知：1、報價含普票含運費。2、可根據(jù)用戶提供配方生產(chǎn)配置，詳情咨詢客服人員。3、大包裝需求用戶可根據(jù)訂單生產(chǎn)。4、院校研究所支持貨到付款。院校單位訂購流程：咨詢客服確定產(chǎn)品→告知客服人員收貨開票信息→確立合同→等待收貨→轉(zhuǎn)賬付款潮霉素B溶液(Hygromycin B,50mg/ml)>20ml為什么選擇我們：1、3000余種實驗室試劑，2000余種中草藥標(biāo)準(zhǔn)品以及農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品現(xiàn)貨供應(yīng)，方便您的一站式采購。2、提供產(chǎn)品專業(yè)定*務(wù)，標(biāo)準(zhǔn)品可根據(jù)客戶要求的規(guī)格包裝。3、科研院校單位支持先發(fā)貨后付款，解除老師報賬上的困擾，免去您對產(chǎn)品質(zhì)量的后顧之憂4、專業(yè)的客服人員解答，消除您心中對實驗試劑選擇的各種不確定。5、完善的售后服務(wù)，解除您的后顧之憂。6、杜絕暴利，節(jié)約您的每一分科研經(jīng)費！ER培養(yǎng)基