磷酸鹽緩沖液（pH5.8）

檢測方法的三大特點：穩(wěn)定性好：包被的抗原的穩(wěn)定性可使試劑盒的效期得到確保，早期以合成肽為包被抗原的試劑盒效期只有3-4個月，選用基因工程抗原后效期很大程度延長了?；蚬こ炭乖瓕⑻禺愋钥乖瓫Q定簇基因融合表達，表達產(chǎn)物包含更多的抗原決定簇，可提高試劑盒的靈敏度，提高檢出率。分子量大：合成肽選用化學辦法制備，因為工藝的限制，合成數(shù)量有限，只能達到數(shù)百個氨基酸。而使用基因工程制備的抗原，分子量更大。用EDTA2K離心搜集在真空血液搜集管中的血液，5,000×g，15分鐘，4℃，分離血漿樣品，然后儲存在零下80℃直到使用。一般植物細胞篩選濃度在 20～200μ g/ml，動物細胞篩選濃度 50～1000μ g/ml。磷酸鹽緩沖液（pH5.8）

科研實驗中試劑取用應注意事項：1. 取用少量的液體—使用膠頭滴管a. 應在容器的正上方垂直滴入；膠頭滴管不要接觸容器壁【防止沾污試管或污染試劑】；b. 取液后的滴管，應保持橡膠膠帽在上，不要平放或倒置【防止液體倒流，沾污試劑或腐蝕橡膠膠帽】；c. 用過的試管要立即用清水沖洗干凈；但滴瓶上的滴管不能用水沖洗，也不能交叉使用。2. 取用一定量的液體—使用量筒a. 當向量筒中傾倒液體接近所需刻度時，停止傾倒，余下部分用膠頭滴管滴加藥液至所需刻度線；b. 讀數(shù)時量筒必須放平穩(wěn)，視線與量筒內液體的凹液面的低處保持水平。堿性凝膠加樣緩沖液(6×)檢測試劑盒汲取液體時速度不易太快，以免發(fā)生氣泡。

檢測試劑盒實驗經(jīng)驗分析：洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加徹底。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干（報紙就免了吧?。Ｏ匆翰粔驎r，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存（洗液先用現(xiàn)配不費多少事的）。底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配（同前，避光?。?。檢測前，要打開酶標儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸（終止液為硫酸，小心毀容）。待檢樣品要澄清，否則會影響結果。溫浴時間應遵守檢測試劑盒規(guī)定。應盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準確性。

試劑盒實驗技巧：濃洗刷液或許會有結晶分出，檢測試劑盒稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗刷時不影響效果。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，核算時請后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。各步加樣均應運用加樣器，并經(jīng)常校正其正確性，以避免實驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數(shù)目多，舉薦運用排加樣。封板膜只限一次性運用，以避免交叉污染。嚴格按照說明書的操作進行，檢測試劑盒實驗效果斷定有必要以酶標儀讀數(shù)為準。液體培養(yǎng)基接種向肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種少量菌體時，其操作步驟基本與斜面接種時相同。

使用方法：1， 固定細胞或組織樣品，經(jīng)過固定后，適當洗滌除去固定劑。如果需要進行免疫熒光染色，可先進行免疫熒光染色，染完畢后再進行染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行染色。 2， 對于貼壁細胞或組織切片，加入少量染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品體積 3 倍的染色液，混勻。 3， 室溫染色 5-10 分鐘。 4， 吸除染色液，生理鹽水洗滌 2-3 次，每次 3-5 分鐘。 5， 置于熒光顯微鏡下觀察，激發(fā)波長 360-400nm。 溶液注意事項： dapi 被普遍認為具有致性，操作時應戴手套，并避免交叉污染。 本產(chǎn)品需避光，并盡量避免反復凍融。熒光染料都存在淬滅問題，建議染色后盡量當天完成檢測。 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光衰減封片劑。室溫條件，水平轉子離心400g，離心30-40min，可見細胞分層。堿性凝膠加樣緩沖液(6×)

稀釋過的血液樣本小心鋪到Ficoll分離液上面。磷酸鹽緩沖液（pH5.8）

說明?檢測試劑盒的具體規(guī)則:汲取液體時要選用量程和需要量挨近的微量加樣器吸，削減誤差。液體全部參加酶標孔后，將酶標板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充沛混合均勻，也使其得到充沛的反響。孵育時要使蓋板膜封好酶標板，避免水分蒸發(fā)，以防曲線不成線性。實驗前的30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，檢測試劑盒使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標板只需取出所需量。因為底物顯色劑對光及其靈敏，因而要避光保存。手藝洗板時每次參加洗滌液后。應靜置15～30s，不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，避免穿插污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。磷酸鹽緩沖液（pH5.8）