Tris-蔗糖溶液(10%)

丁胺卡那霉素給藥說明：1.患者應(yīng)給予足夠的水分，以減少腎小管損害。2.燒傷患者中本品的半衰期較短（1—1.5小時(shí)），因此可能需用5—75mg/kg，每6小時(shí)一次。3.長(zhǎng)期用藥可能導(dǎo)致耐藥菌過度生長(zhǎng)。4.配制靜脈用藥時(shí)，每500mg加入氯化鈉注射液，5%葡萄糖注射液或其他滅菌稀釋液100—200ml，上述溶液用于成人病例應(yīng)在30一60分鐘內(nèi)，嬰兒患者于1一2小時(shí)內(nèi)緩慢輸入，并相應(yīng)減少稀釋液量。本品不可直接靜脈推注，以免產(chǎn)生神經(jīng)肌肉阻滯和呼吸克制作用。室溫條件，水平轉(zhuǎn)子離心400g，離心30-40min，可見細(xì)胞分層。Tris-蔗糖溶液(10%)

檢測(cè)試劑盒樣品收集:血清：全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒液試管。血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)。避免使用溶血，血脂高樣品。組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。EDTA—Na4P2O7溶液(0.1 mol/L 非無菌)稀釋過的血液樣本小心鋪到Ficoll分離液上面。

注意事項(xiàng)：1.對(duì)診斷的干擾:可引起直接抗球蛋白試驗(yàn)(Coombs試驗(yàn))陽(yáng)性;干擾血清葉酸濃度和維生素B12濃度測(cè)定結(jié)果;可干擾利用分光光度計(jì)或顏色改變而進(jìn)行的各項(xiàng)尿液分析試驗(yàn)的結(jié)果，因使用利福平后可使尿液呈橘紅色或紅棕色。使用利福平可使血液尿素氮、血清堿性磷酸酶、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、血清膽紅素及血清尿酸濃度測(cè)定結(jié)果增高。2，酒精中毒，肝功能損害者慎用。一般肝病患者慎用。3.利福平可能引起白細(xì)胞和血小板減少，并導(dǎo)致齒齦出血和傳染，傷口愈合延遲等。此時(shí)應(yīng)避免拔牙手術(shù)，并注意口腔衛(wèi)生，刷牙及剔牙均需慎重，直至血象恢復(fù)正常。

檢測(cè)試劑盒安全性：試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻檢測(cè)試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。滴劑是指藥物與適宜的溶劑或分散介質(zhì)制成的滴至動(dòng)物的頭、背等部位局部給藥的液體試劑。

檢測(cè)試劑盒的要點(diǎn)有哪些？在儲(chǔ)存及孵育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。一切試劑瓶蓋須蓋緊以避免蒸騰和污染，試劑避免受到微生物的污染，由于蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)過錯(cuò)的成果。當(dāng)心汲取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)刻和溫度。請(qǐng)注意在汲取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，*個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)刻距離假如太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時(shí)刻，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。而且，洗滌不充分將影響實(shí)驗(yàn)成果。檢測(cè)試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，詳細(xì)以標(biāo)簽上的標(biāo)明為準(zhǔn)。試劑成份、純度、用量及穩(wěn)定性，才是保證試劑質(zhì)量的關(guān)鍵所在。Tris-HCl緩沖液(3mol/L,pH7.0-9.0,無菌)

殺滅曲線的建立：按照每2天進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)，來確定殺滅未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的恰當(dāng)濃度。Tris-蔗糖溶液(10%)

加藥時(shí)間:由于基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)之后要一段時(shí)間才能表達(dá)出蛋白質(zhì)。所以篩選不能太早；但是也不能太晚，因?yàn)檗D(zhuǎn)染了外源基因的細(xì)胞代謝負(fù)荷較大，增值較慢，時(shí)間長(zhǎng)了就會(huì)被沒有外源基因轉(zhuǎn)入的細(xì)胞所淹沒，終導(dǎo)致篩選不出陽(yáng)性克隆，一般要在轉(zhuǎn)染24小時(shí)之后才開始加G418篩選。隨著細(xì)胞的代謝G418的濃度和活性都回下降，所以每3~5天都要更換一次含有G418的篩選液。這時(shí)藥物濃度可以降至200ug/ml。培養(yǎng)液:加藥篩選約6天左右，細(xì)胞會(huì)大量死亡，孔中只剩下的細(xì)胞。這時(shí)會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)問題：1.死亡的細(xì)胞會(huì)裂解釋放出有害物質(zhì)，導(dǎo)致那些有neo表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞死亡，即非選擇性死亡。2.孔中細(xì)胞數(shù)目很少，細(xì)胞之間的信號(hào)會(huì)變得很弱，也會(huì)導(dǎo)致陽(yáng)性細(xì)胞的狀態(tài)不佳甚至死亡。這個(gè)時(shí)候需要一種特殊的培養(yǎng)液：假如你要轉(zhuǎn)染3T3細(xì)胞，在3T3細(xì)胞匯合度達(dá)到80%的時(shí)候，換液，培養(yǎng)過夜之后收集培養(yǎng)液，通過濾器消毒，和新鮮的培養(yǎng)液按1：1混合備用。再轉(zhuǎn)染后篩選過程中就可以應(yīng)用這種培養(yǎng)基。Tris-蔗糖溶液(10%)