蛋白酶K緩沖液(10×)

注意事項：1.全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得較佳的實驗結(jié)果，較好在取樣 2h內(nèi)進行實驗，樣品存放時間越長，細胞分離效果越差。樣品放置超過 6h后分離效果更差甚至不能達到分離目的。2.本實驗較好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離 心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會變成毛面，影響細胞分離效果。3.吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒 細胞數(shù)量增加。4.分離液用量大于組織單細胞懸液樣本時，分離效果更佳。檢測試劑盒吸入液體時的的方法是吸兩檔打一檔。蛋白酶K緩沖液(10×)

測定血清中的某些酶，如CK，離體(采集血液)后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基(一SH)被氧化造成的。只有通過適當(dāng)?shù)倪€原作用才能重新開始。如CK—NAC檢測試劑盒即含有CK活化劑，名為N一乙酰半胱氨酸。實驗研究證明，NAC對血清中已失活的CK活化過程約需180 S。這就是CK測定為什么要延遲時間較長的理論依據(jù)。在AST，ALT采用IFCC推薦方法測定時需要磷酸吡哆醛預(yù)活化。需要強調(diào)：含有活化劑的生化試劑，其測定酶活性的結(jié)果要高些。鞭毛染色液(改良Ryu法)檢測試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運用。

怎樣減少檢測試劑盒誤差？嚴控反應(yīng)時間，反應(yīng)時間過長，酶失活；反應(yīng)時間過短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。注意檢測試劑盒保存期，過保存期的試劑不能使用。評估試劑的實用性，試劑的穩(wěn)定與否，對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應(yīng)進行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗，判定試劑符合要求后方可使用。嚴格掌握顯色時間，顯色時間過短，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應(yīng)判為假陽性，這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結(jié)果。

檢測試劑盒的實驗步驟有哪些呢？檢測試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排加樣。請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。固體試劑的取用:貼標(biāo)簽的一面必須朝向手心處【防止藥液灑出腐蝕標(biāo)簽】。

檢測試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為根底，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗刷除去剩余的游離反應(yīng)物，從而確保試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。運用雙抗體夾心法測定標(biāo)本水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP符號的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，通過完全洗刷后加底物TMB顯色。檢測試劑盒TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線核算樣品的濃度。普遍使用液體試劑的基本原理，因此液體試劑在藥劑學(xué)上的應(yīng)用具有普遍意義。蛋白酶K緩沖液(10×)

檢測試劑盒可在板孔中參加稀釋液，再在其中參加血清標(biāo)本。蛋白酶K緩沖液(10×)

pH緩沖溶液的類型與作用：pH緩沖溶液包括兩大類：標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液和普通緩沖溶液。標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液主要用在酸度計測量溶液pH值時的儀器校正和定位，要求數(shù)值準(zhǔn)確、精確。因此對試劑純度、濃度準(zhǔn)確性、溫度等都有嚴格要求，這類緩沖溶液有專門的化學(xué)試劑商品，可以購買配制，也可以用優(yōu)級純試劑按資料的配比配制。普通緩沖溶液主要用于化學(xué)分析和儀器分析中要控制一定pH值的測定過程中。幾乎所有的EDTA絡(luò)合滴定都必須在一定的pH范圍內(nèi)進行，因此，需要加入pH緩沖溶液，例如，測定鉛、鋅用到HAc緩沖溶液，測定鈣、鎂、鋅用到氨緩沖溶液。又如，氧化還原滴定中，碘量法測銅要用到NH4HF2，碘量法測砷、銻要加NaHCO3。蛋白酶K緩沖液(10×)

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