AFIP甲酸-檸檬酸脫鈣液

方便快捷的LSMTM淋巴細(xì)胞分離液：早期分離白細(xì)胞的方法，會用一種化合物混合血液。此化合物能夠聚集紅細(xì)胞，只輕微影響白細(xì)胞。通過離心，紅細(xì)胞由于密度增加而聚集沉淀，同時從離心管內(nèi)上層收集白細(xì)胞。后來，B?yum提出的以Ficoll?-甲泛影鈉溶液為介質(zhì)進(jìn)行離心。稀釋的血液在Ficoll?-甲泛影鈉溶液中分層，之后低速短時離心。紅細(xì)胞和多形核粒細(xì)胞沉降到管底，單個淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和血小板可以從兩個分層間的分界面處收集。而MP Biomedicals出品的淋巴細(xì)胞分離液，不同于B?yum的配方，由于LSM中含有聚蔗糖和泛影酸鹽，能夠形成特定的密度梯度1.077 g/mL（20℃）。只需要將血液樣品輕置于淋巴細(xì)胞分離液上層，經(jīng)過簡單的一步離心(400 xg，30分鐘)，就能夠分離獲得淋巴細(xì)胞。從滴瓶中取用液體試劑時，要用滴瓶中的滴管，滴管決不能伸入所用的容器中。AFIP甲酸-檸檬酸脫鈣液

液體培養(yǎng)基接種向肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種少量菌體時，其操作步驟基本與斜面接種時相同，不同之處是挑取菌體的接種環(huán)放入液體培養(yǎng)基后，應(yīng)在液體表面處的管內(nèi)壁上輕輕磨擦，使菌體從環(huán)上脫落，混進(jìn)液體培養(yǎng)基，塞好試管塞后，搖動液體，使菌體在液體中分布均勻，或用試管振蕩器混勻。向液體培養(yǎng)基中接種量大或要求定量接種時，可將無菌水或液體培養(yǎng)基注入菌種試管，用接種環(huán)將菌苔刮下，再將菌種懸液以無菌吸管定量吸出加入，或直接倒入液體培養(yǎng)基。如果菌種為液體培養(yǎng)物，則可用無菌吸管定量吸出加入或直接倒入液體培養(yǎng)基。整個接種過程都要求無菌操作。Tris-HCl緩沖液(0.5mol/L,pH7.0-9.0,無菌)冬季檢測試劑盒的正確保存：血清標(biāo)本如是以無菌操作別離。

取用液體試劑時要注意什么？從滴瓶中取用液體試劑時，要用滴瓶中的滴管，滴管決不能伸入所用的容器中，以免接觸器壁而沾污藥品。如用滴管從試劑瓶中取少量液體試劑時，則需用附于該試劑瓶的專門滴管取用。裝有藥品的滴管不得橫置或滴管口向上斜放，以免液體流入滴管的橡皮頭中。從細(xì)口瓶中取用液體試劑時，用傾注法。先將瓶塞取下，反放在桌面上，手握住試劑瓶上貼標(biāo)簽的一面，逐漸傾斜瓶子，讓試劑沿著潔凈的試管壁流入試管或沿著潔凈的玻璃棒注入燒杯中。注出所需量后，將試劑瓶口在容器上靠一下，再逐漸豎起瓶子，以免遺留在瓶口的液滴流到瓶的外壁。

檢測試劑盒樣品收集:血清：全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒液試管。血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，血脂高樣品。組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。檢測試劑盒在生產(chǎn)過程中，不同批次的試劑的質(zhì)量是確保完全一致非常困難。

檢測試劑盒操作注意事項(xiàng)：檢測試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液即可視為陰性對照或者空白；預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可。嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。所有液體組分使用前充分搖勻。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。pH緩沖溶液有何用途：在一般精度測量時檢pH計(jì)是否需要重新標(biāo)定。鹽酸萬古霉素溶液(Vancomycin,10mg/ml)

但若加入酸，堿的量多時，緩沖溶液就失去了它的緩沖作用。AFIP甲酸-檸檬酸脫鈣液

人外周血單核細(xì)胞（PBMC）分離：PBMC（peripheral blood mononuclear cell），外周血單個核細(xì)胞，顧名思義，其主要細(xì)胞類型為血液里邊具有單個核的細(xì)胞，主要包括淋巴細(xì)胞（Ｔ/Ｂ），單核細(xì)胞，吞噬細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞和其他少量細(xì)胞類型。其中淋巴細(xì)胞占很大一部分。分離ＰＢＭＣ的主要目的是為了將多核細(xì)胞和紅細(xì)胞去除，收集單個核細(xì)胞，從而能夠很方便地模擬體外的血液免疫環(huán)境。臍帶血單個核細(xì)胞（MNC）分離臍血是指胎兒出生時臍帶內(nèi)及胎盤近胎兒一側(cè)血管內(nèi)的血液，含有豐富的干細(xì)胞和祖細(xì)胞，主要包含造血干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞。臍血MNC能治好多種病種，包括：神經(jīng)系統(tǒng)疾病，呼吸系統(tǒng)疾病，消化系統(tǒng)疾病，心臟疾病，內(nèi)分泌疾病以及小兒腦癱等。用于簡便、高效地提取臍血單個核細(xì)胞。AFIP甲酸-檸檬酸脫鈣液