胎牛血清(FBS)是來自胎牛的凝結(jié)血液的液體部分,不含細胞、纖維蛋白和凝血因子,但含有大量對細胞生長至關(guān)重要的營養(yǎng)和大分子因子。牛血清白蛋白是FBS的主要成分。FBS中的生長因子對于培養(yǎng)細胞的維持和生長至關(guān)重要。FBS還含有多種小分子,如氨基酸、糖、脂質(zhì)和Hormone。FBS應(yīng)用普遍。FBS的主要用途之一是在真核細胞培養(yǎng)中,其濃度高達20%甚至更高,它提供許多促進細胞存活和增殖的必需營養(yǎng)素和生長因子。然而,需要注意的是,人類細胞培養(yǎng)物中的FBS可能會引入研究成果。用人類血清培養(yǎng)的人類細胞與用FBS培養(yǎng)的細胞表現(xiàn)不同。FBS還用于人類和獸用疫苗以及生物技術(shù)藥物的研究、制造和控制,并用于阻止胰蛋白酶消化或用作冷凍保存中的保護劑。因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分較少。黃山標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清品牌
胎牛血清:胎牛血清初次解凍后,應(yīng)按單次習(xí)慣用量分裝,分裝后的血清仍-20°C凍存。若置于4°C的血清,應(yīng)在一周內(nèi)用完。為保證細胞培養(yǎng)的較佳效果,血清和培養(yǎng)基的配置,應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”原則。配好的培養(yǎng)液,應(yīng)于一周內(nèi)用完。血清避免反復(fù)凍融,避免在4°C或更高溫度儲存過久,否則會破壞血清中有效活性成分,影響血清品質(zhì)。胎牛血清是由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等,其組成成份大部分已知,但還有一部分尚不清楚,這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。其中不含細胞、纖維蛋白和凝血因子。宿遷標(biāo)準(zhǔn)級血清廠家胎牛血清FBS一般需要冷凍保存。
如何區(qū)別真假胎牛血清:外觀,拿到血清,較先接觸的是血清外觀,對于缺少細胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人來說,外觀的判斷尤為重要,顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,我國的細胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl,實際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響,這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采的血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的點很分散,大多是由屠戶采的血后馬上離心收集,所以很少會有溶血,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色,當(dāng)然,國產(chǎn)血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清。進口胎牛血清或多或少總有點溶血,因為真正的胎牛血清凝血功能差,紅細胞容易破裂??偟膩碚f,國產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進口的血清,質(zhì)量較好的呈現(xiàn)出談黃、微紅色,差點的呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。當(dāng)然,熱滅活胎牛血清或保存不當(dāng)?shù)难?,由于血紅蛋白的破壞氧化,會呈現(xiàn)出暗紅,甚至咖啡色。
用于體外細胞培養(yǎng)的胎牛血清及其制備方法:將已存放血漿的試管置入-20~0℃環(huán)境下保存?zhèn)溆?;將血漿分離提取胎牛血清,具體步驟如下:取6-12g氯化鈉、0.1-0.5g磷酸二氫鉀和1.4-2.4g磷酸二氫鉀放入容器中,向其中加入300-700mL去離子水,攪拌均勻,使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10-20%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH為7.0-7.3,將上述所收集的血漿倒入容器中,攪拌均勻,溫度設(shè)定為25-38℃,靜置8-20min,得混合液C;22)將上述的混合液C放入離心機中離心分離8-20min,轉(zhuǎn)速設(shè)定為3000-10000r/min,取上清液。胎牛血清在細胞培養(yǎng)方面通常優(yōu)于其他類型的血清。
如何區(qū)別真假胎牛血清:主要技術(shù)指標(biāo),1、內(nèi)的毒性,標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml。內(nèi)的毒性是細菌破碎后細胞壁的成分,因此內(nèi)的毒性含量的高低可表現(xiàn)出采的血到生產(chǎn)一系列過程中的無菌操作情況。目前,國產(chǎn)血清基本都能達到這一要求,很多進口胎牛血清內(nèi)的毒性含量反而更高,只要求不高于50EU/ml,高出我國標(biāo)準(zhǔn)10倍??梢?,內(nèi)的毒性含量偏高不影響質(zhì)量,除非含量極高,預(yù)示著已經(jīng)污染。2、總蛋白含量,胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明牛齡偏大,不是胎牛,數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。胎牛血清提供對維持細胞指數(shù)生長的Hormone。黃山標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清品牌
FBS的常見處理方法是熱滅活,其中將FBS在56°C的水浴中加熱30分鐘,偶爾搖晃。黃山標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清品牌
胎牛血清中沉淀物該如何處理?胎牛血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但較普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。所有胎牛血清均在當(dāng)?shù)孬F醫(yī)部門的監(jiān)督下從注冊的出口屠場采集,符合國際動物協(xié)會要求。胎牛血清參與細胞培養(yǎng),是細胞生長天然的培養(yǎng)基,它為細胞提供生長因子、結(jié)合蛋白、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附和鋪展因子等來促進體外細胞培養(yǎng)。黃山標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清品牌
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