用于體外細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛血清及其制備方法:包括以下步驟:采集懷孕母牛的胎牛血液獲得血漿,具體步驟如下:采用含有體積含量4-6%葡萄糖的注射液、含有質(zhì)量含量0.2-0.6%檸檬酸鈉的水溶液進(jìn)行混合,將上述兩者混合后的混合液A置入取血容器內(nèi)充分滋潤容器內(nèi)壁;將胎牛血液置入上述滋潤過的取血容器內(nèi),搖動使其與胎牛血液均勻混合;將混合均勻的含有胎牛血液的混合液B置入采的血試管,保持血液在40℃以下恒溫狀態(tài),然后將采的血試管在離心機(jī)中以3000-14000r/min轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)5-30分鐘,分離出血漿、血小板、血球,將所得血漿、血小板、血球分別采用采的血試管分離存放;好的的胎牛血清是讓細(xì)胞“快樂成長”的必備營養(yǎng)物。蘇州無外泌體血清價(jià)格
胎牛血清如何采取?在牛屠宰過程中,如發(fā)現(xiàn)母牛懷孕,就應(yīng)立即將生殖系統(tǒng)從尸體中分離出來,在無菌條件下從子宮中取出小牛,進(jìn)行臍帶打結(jié)處理,清理羊水并消毒。在胎兒兩肋之間直接插入一根針頭到心臟,在真空的條件下,血液通過導(dǎo)管被抽入無菌的血液收集袋內(nèi)。在沒有真空泵時(shí),也可將血液收集袋放在胎牛身體下面,通過重力作用或按摩方式進(jìn)行收集。血液收集后,放在低溫條件下凝集,經(jīng)過離心去掉凝集物而獲得血清。胎牛血清的獲得量取決于胎兒的大小和年齡。胎兒至少3個(gè)月,否則會因心臟太小而不便于操作。一個(gè)3月齡的胎兒可產(chǎn)生150mL的血清;6月齡和9月齡的胎兒可分別產(chǎn)生350mL和550mL血清。鎮(zhèn)江標(biāo)準(zhǔn)級血清價(jià)格胎牛血清非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng)。
胎牛血清的意義:胎牛血清是采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血,豐富的生長發(fā)育因子,胎牛血清非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng),胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中重要的天然培養(yǎng)基,胎牛血清起到為細(xì)胞提供營養(yǎng)、支持、保護(hù)的作用。好的的胎牛血清是讓細(xì)胞“快樂成長”的必備營養(yǎng)物,但劣質(zhì)的胎牛血清,也可能會成為導(dǎo)致細(xì)胞死亡的“定時(shí)炸雷”。因此,挑選需要擦亮們的雙眼。蛋白含量,總蛋白含量:胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,可能說明牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻入水或者其他溶劑。血紅蛋白含量:標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高;反之,數(shù)值越低。免疫球蛋白:免疫球蛋白的數(shù)值能側(cè)面反映出時(shí)的牛齡情況,新生牛血清中容易檢出IgM,IgG的含量也偏高,胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。
胎牛血清的主要成分有哪些?脂聯(lián)素,有人發(fā)現(xiàn),將牛脂聯(lián)素注射入C57小鼠,可降低循環(huán)血糖水平和在高脂飲食后提高脂肪清理率。持續(xù)注射牛脂聯(lián)素兩周后,胰島素敏感性和葡萄糖耐受性明顯增強(qiáng),高脂喂養(yǎng)小鼠肝臟脂質(zhì)堆積減少。這些結(jié)果提供了直接的證據(jù)表明內(nèi)源性牛脂聯(lián)素是一種調(diào)節(jié)脂肪和葡萄糖代謝的生理Hormone。以上可以看到,胎牛血清提供的一些活性因子參與營養(yǎng)的運(yùn)輸、促進(jìn)營養(yǎng)分子向細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)和利用,調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝和生理狀態(tài)??梢娞ヅQ逶诩?xì)胞環(huán)境中發(fā)揮著積極的作用,這是人工合成的基礎(chǔ)培養(yǎng)基所比擬不了的。胎牛血清能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用:1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的Hormone,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等,能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到釋放毒性作用。4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。7.參與細(xì)胞凍存。在細(xì)胞培養(yǎng)中,胎牛血清加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基的濃度大多為5%~20%(常見為10%)的。具體到不同試驗(yàn),應(yīng)依據(jù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),或細(xì)胞類型或基礎(chǔ)培養(yǎng)基的成分來確定較佳濃度。胎牛血清應(yīng)在-20℃儲存,運(yùn)輸應(yīng)干冰冷鏈運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融,確保血清中因子活性不受影響,保證血清優(yōu)良品質(zhì)。胎牛血清參與細(xì)胞培養(yǎng),是細(xì)胞生長天然的培養(yǎng)基。武漢OriCell胎牛血清
血清對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用:有一些細(xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶。蘇州無外泌體血清價(jià)格
如何區(qū)別真假胎牛血清:1、血紅蛋白,標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高,反之,數(shù)值越低。2、pH,國產(chǎn)血清,大多高于7.5,進(jìn)口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關(guān),這也能用來初步鑒別血清的來源。3、微生物。包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性的病毒等。隨著國內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高,細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制,支原體經(jīng)過0.1um過濾,大多也能清理。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的,主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入,又無法過濾,很難徹底清理,但對血清質(zhì)量影響不大。病原性的病毒,特別是BVDV,在國產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,這類微生物是影響國產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一,而進(jìn)口胎牛血清中基本都控制的很好。蘇州無外泌體血清價(jià)格
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