河北IdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

如果您想分析單克隆抗體或單克隆抗體分子，現(xiàn)在有了Genovis的一些新產(chǎn)品（IgA酶，IgM酶），其他的模式和分子形式（IdeS高通量的產(chǎn)品形式）來測定和監(jiān)測許多不同的CQA，Genovis可以緩解使用不同分析方法時可能出現(xiàn)的瓶頸。 生產(chǎn)大量的樣品當(dāng)然很好，但如果分析團(tuán)隊不能足夠快地處理它們，那就沒有什么意義了。 高通量分析需要一致的、易于使用的方法，當(dāng)然這些方法要快速，而且可能易于自動化。 這正是我們所能提供的，這使Genovis能夠支持更多不同功能的客戶。Genovis提供具有低水平內(nèi)du素的FabRICATOR （IdeS）凍干。河北IdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

IgA 消化酶的 IgASAP 家族特異性消化血清和分泌型人 IgA 以生成 Fab 和 Fc 片段。IgASAP Sub1 特異性消化人 IgA1，而 IgASAP Sub1+2 同時消化人 IgA1 和 IgA2m1。 Sub1+2 特異性消化鉸鏈上方的 IgA1 和 IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的 Fab 和 Fc 片段。為了獲得純和完整的Fab片段，使用Genovis的GingisKHAN Fab Kit進(jìn)行人IgG1的消化和抗體片段的后續(xù)純化。通過與 GingisKHAN 孵育，然后在 CaptureSelect? 人 CH1 離心柱上親和純化，在曲妥珠單抗上證明了完整的片段生成。樣品的酶和Fc部分存在于色譜柱的流通中，F(xiàn)ab很容易通過降低pH洗脫。使用該試劑盒，可以制備 0.5 mg 至 2 mg 人 IgG1 的 Fab 片段。Genovis同時提供IdeS酶的純化試劑盒。 甘肅GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復(fù)雜性并明顯簡化IgA分析表征的寶貴工具。

蛋白酶用于生成肽，用于質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)。這些應(yīng)用包括蛋白質(zhì)組學(xué)和生物制藥的深度表征。由于遺漏了切割和樣品制備誘導(dǎo)的偽影，傳統(tǒng)的蛋白酶并不總是理想的，因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶，可將蛋白質(zhì) C 末端消化為精氨酸殘基。與胰蛋白酶肽相比，所得肽更長，并可能導(dǎo)致序列覆蓋率增加。質(zhì)譜分析中蛋白酶的特異性對于獲得高質(zhì)量的數(shù)據(jù)集和避免復(fù)雜的數(shù)據(jù)解釋至關(guān)重要。作為模型底物，使用胰島素氧化β鏈來比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性。胰島素氧化β鏈含有一個精氨酸和一個賴氨酸殘基。在RP-HPLC和質(zhì)譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒有酶活性或其他額外活性，即使在長時間孵育過夜后，酶與底物的比例也很高（1：5）。然而，ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性，但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1：20 和過夜孵育下，證明了 ArgC 的額外非特異性活性。在相同條件下，GingisREX未檢測到這種情況。數(shù)據(jù)證實了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性，并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化。

與IdeS不同，Genovis的GingisREX（RgpB）是一種精氨酸特異性蛋白酶，可消化精氨酸殘基的C末端蛋白質(zhì)，包括難以與其他酶消化的Arg-Pro鍵。該酶可用于肽圖分析、從頭肽測序和翻譯后修飾分析。精氨酸殘基的特異性C-末端消化；在其他困難的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化；產(chǎn)生更長的肽-提高序列覆蓋率。GingisREX是一種半胱氨酸蛋白酶，可特異性地消化肽鍵C末端到精氨酸殘基，包括與脯氨酸相連的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。與胰蛋白酶消化相比，可生成更長的肽，胰蛋白酶消化可以通過高分辨率質(zhì)譜進(jìn)行分離和鑒定。這為自下而上方法的樣品制備提供了更多選擇，以實現(xiàn)替代的酶解曲線和更高的序列覆蓋率。GingisREX在賴氨酸上沒有活性，通常使用Arg-C觀察到。該酶在5.0-9.0的寬pH值范圍內(nèi)具有活性，它需要半胱氨酸并被鹽酸胍抑制。該酶是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。Genovis的FabRICATOR（IdeS） MagIC 以較少的用戶交互減少實驗和操作時間。

一些應(yīng)用（如結(jié)合研究）具有高度靈敏度，因此在制備中需要不含殘留酶的純抗體片段。因此，Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供，可快速輕松地生成均質(zhì) F（ab'）2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR （IdeS），用于制備來自多種 IgG 的 F（ab'）2 和 Fc 片段（對于兔 IgG，請咨詢），而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 試劑盒進(jìn)行處理 。 為了生成和純化完整的 F（ab'）2 和 Fc/2 片段，使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒處理曲妥珠單抗，并通過 SDS-page 進(jìn)行分析。首先，在室溫下在FabRICATOR固定化離心柱上消化抗體15分鐘，然后進(jìn)行短離心步驟。在 CaptureSelect ? 離心柱上純化 F（ab'）2 片段，并通過降低 pH 值，然后立即調(diào)整回中性 pH 值，一步洗脫結(jié)合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒從酶切到收集片段的過程大約需要 1 小時為了分別研究度拉糖肽的肽和 Fc 區(qū)域，從而鑒定結(jié)構(gòu)域特異性 PTM。陜西FabULOUSIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

該酶在pH 值范圍為 5.0 至 9.0 時顯示出活性。河北IdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis的FabDELLO在鉸鏈上方的單個位點消化人IgG1，并在兩小時內(nèi)生成均質(zhì)的Fab和Fc片段（Genovis的IdeS在鉸鏈區(qū)下方的單個位點進(jìn)行消化）。生成的片段可用于結(jié)晶和高階結(jié)構(gòu)（HOS）的NMR研究、結(jié)合研究等。突變的鉸鏈區(qū)域是zhiliao性候選抗體的常見修飾，以降低效應(yīng)器功能。這些突變可能會影響具有高底物特異性的酶的抗體消化效率。例如，高度特異性的FabRICATOR（IdeS）消化效率對含有常見LALA突變的抗體產(chǎn)生負(fù)面影響。FabDELLO作用于人IgG1鉸鏈上方的單個暴露賴氨酸殘基，能夠?qū)哂型蛔冦q鏈區(qū)域的抗體進(jìn)行流行的中級LC-MS分析。例如，用FabDELLO消化市售的IgG1risankizumab，在下鉸鏈區(qū)域具有LALA突變，并通過反相LC-MS進(jìn)行分析。消化產(chǎn)生均勻的Fab和Fc片段。用20mMDTT還原片段，用于中級LC-MS分析，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生了均相的Fc/2、輕鏈（LC）和Fd片段。用FabDELLO消化后觀察到的定義峰顯示出均勻的片段生成和酶的穩(wěn)健性能。河北IdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶