四川N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究

為了證明Genovis的PNGase F凍干和PNGase F固定在各種底物上的去糖基化能力，用PNGase F凍干或PNGase F固定化處理了一系列糖蛋白。使用天然反應(yīng)條件在一小時(shí)內(nèi)有效去除曲妥珠單抗和依那西普上的所有N-糖，以及西妥昔單抗上的Fc-糖。當(dāng)加入RapiGest?并在變性條件下進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，西妥昔單抗的所有N-聚糖（包括Fab-聚糖）在PNGase F固定化10分鐘內(nèi)完全去除，PNGase F固定化15分鐘內(nèi)完全去除。在變性反應(yīng)條件下，PNGase F 在 30 分鐘內(nèi)成功將更復(fù)雜的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用變性和還原反應(yīng)條件，將常用的糖蛋白標(biāo)準(zhǔn)品RNase B在10或15分鐘內(nèi)完全去糖基化，分別使用PNGase F凍干或PNGase F固定化。在天然和變性條件下生成的去糖基化樣品與LC-MS分析兼容。O-糖基化蛋白和肽的特異性富集：包括抑制病原體引起的gan染、炎癥反應(yīng)、造血和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)。四川N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究

GlycOCATCH設(shè)計(jì)用于特異性結(jié)合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。親和樹(shù)脂基于無(wú)活性的Genovis的OpeRATOR酶，該酶經(jīng)過(guò)工程設(shè)計(jì)，可以高親和力結(jié)合O-糖基化蛋白和肽。 結(jié)合在pH 5-8的生理緩沖液中進(jìn)行。由于GlycOCATCH樹(shù)脂和O-糖蛋白/肽之間的強(qiáng)相互作用，可以用8M尿素進(jìn)行洗脫。或者，可以使用活性O(shè)peRATOR酶進(jìn)行洗脫，該酶消化O-聚糖位點(diǎn)的N末端結(jié)合的O-糖蛋白。在后一種情況下，肽在天然條件下回收。OpeRATOR 凍干酶包含在購(gòu)買(mǎi)中。由于 O-糖蛋白上的旋亞氨酸化 O-聚糖與樹(shù)脂結(jié)合效率更高，因此唾液酸酶混合物 SialEXO 凍干也包含在購(gòu)買(mǎi)中。上海用于自動(dòng)化系統(tǒng)的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開(kāi)發(fā)ImpaRATOR 酶不會(huì)消化未修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基，也不會(huì)在糖蛋白的N-糖基化位點(diǎn)。

用于離心柱中糖蛋白去膠基化的固定化酶。Genovis的FucosEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的FucosEXO酶，用于糖蛋白的去氟糖基化，而不會(huì)用酶污染z終制劑。Microspin 色譜柱可用于 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去膠基化。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3. z終樣品中不含酶。有效去除α1-2,3,4連接巖藻糖：分析用復(fù)雜聚糖結(jié)構(gòu)修飾的糖蛋白可能具有挑戰(zhàn)性，需要高效和特異性的酶學(xué)工具。Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物，用于有效水解 N-和 O-糖蛋白或寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4 連接的巖藻糖殘基，無(wú)需輔助因子或添加

OglyZOR 來(lái)源于口腔鏈球菌，在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 227 kDa。SialEXO來(lái)源于Akkermansia muciniphila，在大腸桿菌中表達(dá)。SialEXO酶含有His標(biāo)簽，組分的分子量分別為42 kDa和66 kDa。1.高效O-糖苷酶；2. 降低樣品異質(zhì)性，揭示潛在的關(guān)鍵蛋白質(zhì)修飾；3. 完全、穩(wěn)健地去除 O-糖he心 1 二糖。Genovis的凍干酶，用于水解糖蛋白上的he心1 O-聚糖。OglyZOR 凍干劑以?xún)龈煞鄣男问教峁?，裝在 2000 個(gè)單位的小瓶中，用于在 2 mg 糖蛋白上水解he心 1 O-聚糖。它需要去除唾液酸助劑才能發(fā)揮作用，因此與2000單位的SialEXO凍干一起提供。瑞典生物技術(shù)公司Genovis率先次提供IdeS工具酶等，用于mAb、ADC藥物的開(kāi)發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。

Core 1型O-聚糖的水解：O-糖基化不僅難以研究，其自然異質(zhì)性也會(huì)導(dǎo)致其他分析出現(xiàn)問(wèn)題。例如，由于樣品中存在許多不同的糖型，因此對(duì)完整或中等水平的重糖基化蛋白質(zhì)進(jìn)行質(zhì)譜分析可能非常困難。酶法去除N-聚糖的解決方案已經(jīng)存在多年，Genvois的PNGase F是一種非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑戰(zhàn)性，現(xiàn)有的O-糖釋放化學(xué)方法通常會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)發(fā)生重大修飾，因此不太適合下游分析。1. 用于方法開(kāi)發(fā)的靈活產(chǎn)品形式；2. 可以結(jié)合酶以提高效率；3. 適用于自動(dòng)化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。SialEXO、FabRICATOR消化去糖基化蛋白，通過(guò)中級(jí)質(zhì)譜測(cè)定完整質(zhì)量數(shù)。江蘇用于自動(dòng)化系統(tǒng)的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開(kāi)發(fā)

用于糖蛋白去唾液酸化的凍干酶混合物SialEXO 凍干劑以?xún)龈煞鄣男问教峁b在 2000 個(gè)單位的小瓶中。四川N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究

ImpaRATOR 是一種 O-聚糖依賴(lài)性蛋白酶，可催化糖蛋白和糖肽中與糖基化絲氨酸或蘇氨酸殘基相鄰的肽鍵的水解。它切割用粘蛋白型O-聚糖修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基的N-末端，包括唾液酸化物種。粘蛋白型O-聚糖是ImpaRAT活性所必需的，該酶不會(huì)消化未修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基，也不會(huì)在糖蛋白的N-糖基化位點(diǎn)。該酶接受 O-聚糖結(jié)構(gòu)，包括唾液酸化he心 1 和he心 2 結(jié)構(gòu)以及 Tn 抗原。Genovis的ImpaRATOR 來(lái)源于銅綠假單胞菌，在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 97 kDa。四川N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究