云南FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

與IdeS不同，Genovis的GingisKHAN（Kgp）是一種半胱氨酸蛋白酶，可在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)（KSCDK/THTCPPC）消化人IgG1，產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單一的消化位點(diǎn)是人IgG1三維結(jié)構(gòu)的結(jié)果，使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖，則Fc上暴露的賴氨酸處可能會出現(xiàn)額外的消化位點(diǎn)。GingisKHAN需要溫和的還原條件才能具有活性，并且在37°C和pH8下獲得活性。還原劑（2mM半胱氨酸）與酶一起提供。GingisKHAN是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。該酶用于使用LC-MS表征基于抗體的生物zhiliao藥物，研究Fc聚糖分析、雙特異性抗體、親和力和親和力效應(yīng)，并鑒定翻譯后修飾。Genovis的FabRICATOR MagIC適用于自動(dòng)化平臺。云南FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

Genovis的FabRICATOR MagIC自動(dòng)樣品制備可用于分析和監(jiān)測不同的CQA。mAb在生產(chǎn)或儲存過程中的氧化就是這樣一種CQA，可能會影響zhiliao產(chǎn)品的質(zhì)量。為了展示FabRICATOR MagIC如何解決這個(gè)問題，對6種mAb的混合物進(jìn)行強(qiáng)制降解（室溫下3個(gè)月），并通過反相LC-MS進(jìn)行分析。當(dāng)在完整水平上分析mAb時(shí)，可以檢測到mAb5豐度的顯著差異，同時(shí)出現(xiàn)許多新的峰。然而，無法獲得可靠的質(zhì)量數(shù)據(jù)。使用FabRICATOR MagIC，mAb5變化的來源在Fab區(qū)域內(nèi)。隨后還原為 Fc/2、LC 和 Fd' 片段，可以識別差異是由于 mAb5 Fd' 片段上的色氨酸氧化，通過形成氧代內(nèi)酯 （+14 Da） 和二氧代內(nèi)酯 （+30 Da） 以及 mAb5 LC （-18 Da） 的琥珀酰亞胺化來揭示。此外，還可檢測到mAb3輕鏈的異構(gòu)化。該示例說明了FabRICATOR MagIC在mAb中級分析中的強(qiáng)大功能，它創(chuàng)建的片段足夠小，可以精確定位特定的修飾，而無需耗時(shí)耗費(fèi)資源的肽圖分析，所有這些都以相對較少的手動(dòng)操作時(shí)間快速完成。海南FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)IgASAP Sub1+2 可消化分泌物和血清 IgA。

蛋白酶用于生成肽，用于質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)。這些應(yīng)用包括蛋白質(zhì)組學(xué)和生物制藥的深度表征。由于遺漏了切割和樣品制備誘導(dǎo)的偽影，傳統(tǒng)的蛋白酶并不總是理想的，因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶，可將蛋白質(zhì) C 末端消化為精氨酸殘基。與胰蛋白酶肽相比，所得肽更長，并可能導(dǎo)致序列覆蓋率增加。質(zhì)譜分析中蛋白酶的特異性對于獲得高質(zhì)量的數(shù)據(jù)集和避免復(fù)雜的數(shù)據(jù)解釋至關(guān)重要。作為模型底物，使用胰島素氧化β鏈來比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性。胰島素氧化β鏈含有一個(gè)精氨酸和一個(gè)賴氨酸殘基。在RP-HPLC和質(zhì)譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒有酶活性或其他額外活性，即使在長時(shí)間孵育過夜后，酶與底物的比例也很高（1：5）。然而，ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性，但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1：20 和過夜孵育下，證明了 ArgC 的額外非特異性活性。在相同條件下，GingisREX未檢測到這種情況。數(shù)據(jù)證實(shí)了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性，并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化。

上海倍篤生物科技有限公司（簡稱“倍篤生物”），由中國科學(xué)院及生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)界人士，于2018年1月共同創(chuàng)立。公司代理多個(gè)品牌的儀器、試劑及耗材（如Genovis的IdeS酶），遵守相關(guān)法規(guī)要求，如cGMP規(guī)范、ISO13485質(zhì)量管理體系認(rèn)證等，致力于為診斷領(lǐng)域如分子診斷及病原微生物檢測研發(fā)等，藥物研發(fā)領(lǐng)域如細(xì)胞基因藥物、核酸藥物、抗體藥物、干細(xì)胞及外泌體研究等客戶提供合規(guī)、高質(zhì)量物料及專業(yè)服務(wù)，以期與客戶共同協(xié)作，加快研發(fā)及生產(chǎn)進(jìn)度，為客戶提供更多價(jià)值。GlySERIAS酶能夠分離多功能融合蛋白的各個(gè)結(jié)構(gòu)域，以促進(jìn)表征并增加對這些分子的理解。

為了讓所有實(shí)驗(yàn)室都能同時(shí)快速自動(dòng)消化多種抗體，Genovis的FabRICATORMagIC的設(shè)計(jì)具有靈活性，適用于一系列自動(dòng)化平臺。我們在ThermoScientific?KingFisher?純化系統(tǒng)上優(yōu)化了FabRICATORMagIC的工作流程，但它可以轉(zhuǎn)移到其他自動(dòng)化平臺，如果沒有自動(dòng)化，在振動(dòng)臺上也能同樣出色地工作。消解后，將含有處理樣品的深孔板直接轉(zhuǎn)移到LC-MS的自動(dòng)進(jìn)樣器中進(jìn)行快速色譜分析，或轉(zhuǎn)移到其他分析方法進(jìn)行分析。FabRICATORMagIC與在消解緩沖液中添加0.05%聚山梨醇酯20兼容，以極大限度地減少自動(dòng)化系統(tǒng)中可能發(fā)生的純粹壓力。使用KingFisher儀器處理樣品時(shí)，樣品制備非常簡單。將樣品、樹脂和緩沖液移液到指定的孔或板中，然后將板放入儀器中。設(shè)計(jì)用于FabRICATORMagIC的BindIt?協(xié)議將控制每個(gè)步驟的孵育溫度和時(shí)間。Genovis的GingisREX （RgpB）可用于肽圖分析、從頭肽測序和翻譯后修飾分析；產(chǎn)生更長的肽 - 提高序列覆蓋率。海南FabRICATOR ZIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis的FabULOUS （SpeB）制備的Fab片段可用于親和力研究、Fab糖基化研究和結(jié)構(gòu)研究。云南FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

抗體的氧化是可能影響抗體功能的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，需要密切定量和表征。它可能導(dǎo)致mAb的體內(nèi)半衰期、功效和穩(wěn)定性降低。Genovis的FabRICATOR（IdeS）消化產(chǎn)生的抗體亞基是研究抗體氧化的理想選擇。酶解的穩(wěn)健性允許在受監(jiān)管的環(huán)境中監(jiān)測抗體亞基氧化。Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段。該酶用于基于抗體的療法（如mAb、ADC、生物類似藥和Fc融合蛋白）的表征、質(zhì)量控制、穩(wěn)定性測試、生產(chǎn)監(jiān)測和克隆選擇。高度特異性-鉸鏈下方的一個(gè)消化位點(diǎn)快速–在30分鐘內(nèi)生成均勻的片段池實(shí)現(xiàn)基于抗體的生物zhiliao藥物的表征和質(zhì)量控制可固定在即用型離心柱中云南FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)