吉林GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切

來源: 發(fā)布時間:2024-04-25

Blinatumomab(一種對 CD19 和 T 細胞標志物 CD3 具有特異性的 BiTE 分子)的研究級生物仿制藥在室溫下用固定化過夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通過LC-MS對消解樣品的直接分析表明,所有三個連接子區(qū)域均被消解,α-CD3 VL和VH鏈洗脫為一個色譜峰,α-CD19 VH和VL鏈作為單獨的峰洗脫。來自連接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 結(jié)構(gòu)域的小峰顯示該短連接子未完全消化,表明 GlySERIAS 對短連接子的活性較低。與完整的蛋白質(zhì)分析相比,四個結(jié)構(gòu)域的分離提供了具有單同位素分辨率的高質(zhì)量光譜??梢杂^察到每個結(jié)構(gòu)域的幾個不同變體,剩余的連接子殘基數(shù)量不同。在色譜分離過程中,α-CD3 VH結(jié)構(gòu)域無法從α-CD19 VH結(jié)構(gòu)域完全基線分離,導(dǎo)致在相關(guān)質(zhì)譜中觀察到一些共洗脫。四個結(jié)構(gòu)域的分離產(chǎn)生了有關(guān)在完整蛋白質(zhì)水平上鑒定的蛋白質(zhì)修飾位置的信息。例如,在完整水平上鑒定的 37 Da 的蛋白質(zhì)修飾被分配給 α-CD3 VH 鏈。此外,240Da 和 320da 的兩個修飾分別被分配給 α-CD3 VL 結(jié)構(gòu)域。后者還含有一個帶有五六個組氨酸殘基的 His 標簽。這些數(shù)據(jù)證明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 對包含多個柔性連接子蛋白進行質(zhì)量控制的中級工作流程的強大功能。Genovis的FabULOUS來源于化膿性鏈球菌,在大腸桿菌中表達,分子量為 29 kDa,該酶含有 His 標簽。吉林GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切

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在Genovis,我們的策略是幫助客戶進行中級(或亞基)分析,這是我們的工作,特別是我們的蛋白質(zhì)酶切產(chǎn)品。完整質(zhì)量和肽圖譜是蛋白質(zhì)表征的常用方法,我們發(fā)現(xiàn),與簡單但信息有限的完整質(zhì)量和高度復(fù)雜但信息豐富的肽圖譜相比,中級方法具有優(yōu)勢。通過執(zhí)行中級描述,您可以生成從完整的質(zhì)量實驗中獲得的所有信息,具有額外的優(yōu)勢。在對抗體進行完整質(zhì)量分析時,很難明確地識別某些修飾。質(zhì)譜儀器正在改進,可以更有效地分析更大的分子,但通過使用我們的SmartEnzymes,如IdeS,可以將抗體分解成更小的片段,這提高了這些實驗可以執(zhí)行的分辨率,因此,增加了鑒定修飾的信心。此外,你不僅能夠更好地識別修改,而且你能夠?qū)⑺鼈兌ㄎ坏降鞍踪|(zhì)上的單個結(jié)構(gòu)域,這是你在完整水平上無法做到的。重慶FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)GlySERIAS是從噬菌體K克隆而來的,在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽,分子量為 18 kDa。

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如果您想分析單克隆抗體或單克隆抗體分子,現(xiàn)在有了Genovis的一些新產(chǎn)品(IgA酶,IgM酶),其他的模式和分子形式(IdeS高通量的產(chǎn)品形式)來測定和監(jiān)測許多不同的CQA,Genovis可以緩解使用不同分析方法時可能出現(xiàn)的瓶頸。 生產(chǎn)大量的樣品當然很好,但如果分析團隊不能足夠快地處理它們,那就沒有什么意義了。 高通量分析需要一致的、易于使用的方法,當然這些方法要快速,而且可能易于自動化。 這正是我們所能提供的,這使Genovis能夠支持更多不同功能的客戶。

其他基于 IgG 的生物制藥需要仔細表征和監(jiān)測關(guān)鍵質(zhì)量屬性,例如氧化、糖基化和其他翻譯后修飾。與抗體的克隆選擇、工藝開發(fā)和穩(wěn)定性研究相關(guān)的大量樣品通常通過液相色譜質(zhì)譜 (LC-MS) 進行分析。然而,在LC-MS之前進行足夠規(guī)模的樣品制備通常具有挑戰(zhàn)性。為了解決樣品制備的挑戰(zhàn),Genovis將半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR(IdeS)固定在磁性瓊脂糖珠上,現(xiàn)在稱為FabRICATOR MagIC。FabRICATOR固定在磁珠上,可同時快速自動消化多種抗體,促進中級表征工作流程。Genovis的FabRICATOR MagIC 如何以較少的用戶交互減少實驗和操作時間,降低樣品處理錯誤的風險,同時提高通量。Genovis的FabULOUS (SpeB) 是一種半胱氨酸蛋白酶。

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對于攜帶突變鉸鏈的 Fc 融合蛋白或抗體來說,F(xiàn)ab 和 Fc 片段的生成可能具有挑戰(zhàn)性。Genovis的GingisKHAN酶在鉸鏈上方一個可觸及的賴氨酸位點消化人IgG1,在足夠溫和的還原條件下保留鏈內(nèi)和鏈間二硫鍵,從而產(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。對于融合蛋白,消化通常在鉸鏈上方獲得,但融合伴侶的結(jié)構(gòu)和氨基酸序列可能導(dǎo)致其他暴露的消化位點。如果去除保守的 Fc N-聚糖,F(xiàn)c 中的第二個切割位點也可能被GingisKHAN酶切。將精選的單克隆人 IgG1 抗體和 Fc 融合蛋白與 GingisKHAN 在 37°C 下孵育 1 小時,并通過 HPLC 進行分析。Genovis的GingisKHAN 可以消化單克隆人 IgG1 抗體和 Fc 融合蛋白。青海GingisREXIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

該酶對具有突變鉸鏈區(qū)域的抗體(如 LALA 突變)具有活性。吉林GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切

Genovis的FabRICATOR Fab2 (IdeS)試劑盒可消化兔 IgG,但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段,您需要另一種填料,而不是試劑盒中通常包含的 CaptureSelect? Fc。如果您對處理兔IgG感興趣,請聯(lián)系Genovis團隊,我們將在FabRICATOR Fab2試劑盒中提供與兔Fc相容的樹脂色譜柱。使用FabRICATOR的抗體消化的簡單性、速度和可重復(fù)性也意味著這種酶可以被用于質(zhì)量控制應(yīng)用。 QC方法需要執(zhí)行簡單,易于訓(xùn)練,高度可重復(fù),數(shù)據(jù)易于分析,這正是您使用FabRICATOR所得到的。 因為它適用于一系列不同的IgG,這也意味著使用FabRICATOR進行QC工作的客戶將能夠在未來的產(chǎn)品中使用它。 這顯示了這種酶在抗體消化中是多么的有效。吉林GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切