皮膚微生物測(cè)序方法

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2021-12-05

用二代測(cè)序?qū)颖具M(jìn)行宏病毒組測(cè)序具有的挑戰(zhàn):二代測(cè)序技術(shù)基本流程是核酸純化-文庫(kù)構(gòu)建-生物信息學(xué)分析。用二代測(cè)序?qū)颖具M(jìn)行宏病毒組測(cè)序,每一步都是很大的挑戰(zhàn)。無(wú)論是來(lái)自腸道還是水體或者土壤,樣本都會(huì)伴隨基因組數(shù)倍于病毒的細(xì)菌和宿主細(xì)胞。為了提高數(shù)據(jù)有效利用率,首先,樣本處理和核酸純化需要有的放矢。文庫(kù)構(gòu)建時(shí),由于病毒基因組核酸存在多種可能,建庫(kù)成本的把控、文庫(kù)保真度、建庫(kù)成功率對(duì)于生產(chǎn)者和研究者都是極大的挑戰(zhàn)。而生信分析,由于病毒并不像細(xì)菌一樣研究透徹,具備龐大的數(shù)據(jù)庫(kù),目前國(guó)內(nèi)外的分析水平也是參差不齊??茖W(xué)家通過(guò)對(duì)病毒進(jìn)行全基因組測(cè)序,能了解病毒不同傳播階段的變異情況。皮膚微生物測(cè)序方法

病毒宏基因組測(cè)序是在宏基因組學(xué)理論的基礎(chǔ)上,結(jié)合現(xiàn)有的病毒分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)而興起的一個(gè)新的學(xué)科分支。而所謂宏基因組學(xué)(metagenomics)就是一種以環(huán)境樣品中的微生物群體基因組為研究對(duì)象,以功能基因篩選和測(cè)序分析為研究手段,以微生物多樣性、種群結(jié)構(gòu)、進(jìn)化關(guān)系、功能活性、相互協(xié)作關(guān)系及與環(huán)境之間的關(guān)系為研究目的的新的微生物研究方法。一般包括從環(huán)境樣品中提取基因組DNA,克隆DNA到合適的載體,導(dǎo)入宿主菌體,篩選目的轉(zhuǎn)化子等工作。腸道微生物測(cè)序要多久宏基因組測(cè)序技術(shù),克服了傳統(tǒng)的純培養(yǎng)方法的技術(shù)限制。

病原體-宏基因組的測(cè)序:1.開發(fā)了一種經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的臨床mNGS檢測(cè)方法,用于在許可的微生物實(shí)驗(yàn)室中診斷腦脊髓液(CSF)引起的腦膜炎和腦炎的傳染原因。2.開發(fā)了定制的生物信息學(xué)管道SURPI+,以快速分析mNGS數(shù)據(jù),生成檢測(cè)到的病原體的自動(dòng)摘要,并提供用于評(píng)估和解釋結(jié)果的圖形用戶界面。3.mNGS提供了一種全方面的方法,通過(guò)該方法可以在一次測(cè)定中準(zhǔn)確鑒定幾乎所有潛在病原體-病毒,細(xì)菌,寄生蟲。4.將mNGS測(cè)試遷移到臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室仍然面臨許多挑戰(zhàn):1、缺乏用于mNGS臨床驗(yàn)證的既定藍(lán)圖;2、難以將病原體從殖民者或污染物中區(qū)分開;3、缺乏專為臨床診斷使用的生物信息學(xué)軟件;4、注重質(zhì)量和全方面性的可獲得的參考數(shù)據(jù)庫(kù);5、臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正案(CLIA)環(huán)境中,患者診斷測(cè)試固有的法規(guī)遵從性要求。

病毒宏基因組測(cè)序的流程:在探普生物進(jìn)行病毒宏基因組測(cè)序的流程非常簡(jiǎn)單,簡(jiǎn)而言之,客戶只需要說(shuō)清楚樣品情況,準(zhǔn)備樣品即可,其他事宜都由探普來(lái)進(jìn)行安排。大致流程如下:1)與銷售人員溝通項(xiàng)目需求和樣本情況;2)探普生物工作人員擬定項(xiàng)目合同,雙方協(xié)商合同內(nèi)容后簽字蓋章;3)按樣本準(zhǔn)備指南準(zhǔn)備好樣本,填寫信息單后通知銷售人員預(yù)訂干冰,安排樣本寄運(yùn)輸;4)客戶支付項(xiàng)目啟動(dòng)款,探普生物啟動(dòng)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)和分析并提供測(cè)序報(bào)告;5)客戶支付項(xiàng)目尾款,探普生物提交測(cè)序數(shù)據(jù)和分析結(jié)果;6)售后問(wèn)題處理,項(xiàng)目結(jié)題。通過(guò)對(duì)樣本進(jìn)行宏病毒組測(cè)序,我們可以了解單個(gè)樣本里有什么病毒。

病毒宏基因組測(cè)序相關(guān)知識(shí):DNA宏基因組測(cè)序的病原檢出率均高于培養(yǎng)等傳統(tǒng)方法,表現(xiàn)出良好的診斷性能。DNA宏基因組測(cè)序已被用于診斷各種臨床傳染性疾病,例如血液傳染,肺和肺外結(jié)核(TB),侵襲性傳染,寄生蟲傳染,傳染性心內(nèi)膜炎,復(fù)雜性肺炎,尿路傳染和實(shí)體移植后的繼發(fā)傳染等,為臨床傳染性疾病的診斷和提供了新的前景。盡管一項(xiàng)多中心的回顧性研究表明,目前使用mcfDNA宏基因組測(cè)序作為診斷常見傳染疾病的工具的優(yōu)勢(shì)并不明顯,但它可以提供比傳統(tǒng)方法更快、更早的診斷結(jié)果,以及在的升級(jí)/降級(jí)方面具有重要意義。宏基因組測(cè)序能夠檢測(cè)出新發(fā)和罕見病原體。重慶水體微生物多樣性測(cè)序多少錢

探普生物具備處理大量多樣的病毒樣本的經(jīng)驗(yàn),熟知各類病毒樣本的特性,對(duì)于樣本準(zhǔn)備有獨(dú)特的方法指南。皮膚微生物測(cè)序方法

宏基因組測(cè)序的挑戰(zhàn):背景干擾,病原樣本深藏在大量宿主和其它微生物之內(nèi),臨床病原常為起始量低,背景噪音大的復(fù)雜樣本,大量宿主信號(hào)掩蓋了微量病原信號(hào),致使敏感性偏低,難以有效區(qū)分。另外,因?yàn)镽NA病毒需先轉(zhuǎn)化為互補(bǔ)DNA(cDNA)再進(jìn)行測(cè)序,因此病原宏基因組測(cè)序技術(shù)對(duì)RNA病原體檢出率比DNA病毒更低??梢钥紤]對(duì)核酸樣本進(jìn)行特殊的處理,對(duì)病毒序列進(jìn)行特異性富集,再進(jìn)行建庫(kù)測(cè)序。質(zhì)量控制:病原宏基因組測(cè)序技術(shù)涉及一系列繁瑣的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程,例如文庫(kù)構(gòu)建涉及到基因組打斷,測(cè)序接頭鏈接,全基因組擴(kuò)增等多個(gè)步驟,每一步驟的目標(biāo)是要每個(gè)分子都以相同的效率執(zhí)行每個(gè)步驟,打斷有損失,連接有差別,擴(kuò)增有偏好,都會(huì)帶來(lái)檢測(cè)誤差。皮膚微生物測(cè)序方法

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