江蘇宏病毒組測(cè)序方法

宏基因組測(cè)序的挑戰(zhàn)：背景干擾，病原樣本深藏在大量宿主和其它微生物之內(nèi)，臨床病原常為起始量低，背景噪音大的復(fù)雜樣本，大量宿主信號(hào)掩蓋了微量病原信號(hào)，致使敏感性偏低，難以有效區(qū)分。另外，因?yàn)镽NA病毒需先轉(zhuǎn)化為互補(bǔ)DNA(cDNA)再進(jìn)行測(cè)序，因此病原宏基因組測(cè)序技術(shù)對(duì)RNA病原體檢出率比DNA病毒更低。可以考慮對(duì)核酸樣本進(jìn)行特殊的處理，對(duì)病毒序列進(jìn)行特異性富集，再進(jìn)行建庫(kù)測(cè)序。質(zhì)量控制：病原宏基因組測(cè)序技術(shù)涉及一系列繁瑣的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程，例如文庫(kù)構(gòu)建涉及到基因組打斷，測(cè)序接頭鏈接，全基因組擴(kuò)增等多個(gè)步驟，每一步驟的目標(biāo)是要每個(gè)分子都以相同的效率執(zhí)行每個(gè)步驟，打斷有損失，連接有差別，擴(kuò)增有偏好，都會(huì)帶來(lái)檢測(cè)誤差。所謂宏基因組學(xué)就是一種以環(huán)境樣品中的微生物群體基因組為研究對(duì)象。江蘇宏病毒組測(cè)序方法

目前構(gòu)建的病毒宏基因組學(xué)文庫(kù)主要有載體克隆文庫(kù)和基于高通量測(cè)序技術(shù)的加接頭的文庫(kù)。隨著深度測(cè)序技術(shù)的不斷發(fā)展，第二代高通量測(cè)序技術(shù)、第三代單分子測(cè)序技術(shù)已經(jīng)普遍地應(yīng)用于各項(xiàng)研究領(lǐng)域中，以454測(cè)序技術(shù)和Illumina測(cè)序技術(shù)為表示的二代測(cè)序法得到迅速推廣用于構(gòu)建病毒宏基因組文庫(kù)，相信將來(lái)第三代測(cè)序平臺(tái)如tSMSTM（truesinglemolecularsequeneing）技術(shù)平臺(tái)、SMRT（singlemoleculereal-time）技術(shù)平臺(tái)、FRET測(cè)序技術(shù)及納米孔單分子技術(shù)為表示的第三代測(cè)序法也將應(yīng)用于構(gòu)建病毒宏基因組文庫(kù)。Donaldson等[23]采用高通量測(cè)序技術(shù)構(gòu)建了蝙蝠腸道的病毒宏基因組學(xué)文庫(kù)，獲得了600000條讀長(zhǎng)（Reads）的核酸序列。土壤微生物分析診斷病毒宏基因組測(cè)序可直接對(duì)樣本中的核酸進(jìn)行高通量測(cè)序。

優(yōu)化臨床制備病毒宏基因組測(cè)序所用樣本的方法：①介紹高通量病毒宏基因組測(cè)序的樣本制備步驟，對(duì)臨床樣本的總核酸進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增；②檢測(cè)了從血漿樣本中富集/擴(kuò)增DNA及RNA病毒的不同方法，一種包括過(guò)濾、核酸酶消化、在不同反應(yīng)中隨機(jī)擴(kuò)增DNA及RNA的步驟是較好的；③隨后在包含了不同病毒科的樣本中驗(yàn)證此方法，可高讀數(shù)地檢測(cè)到大多數(shù)病毒序列，且優(yōu)于現(xiàn)行的其它樣本制備方法；④該方法不只適用于血漿樣本，還可用于尿液、咽喉拭子等臨床樣本。

宏基因組學(xué)或元基因組（metagenomics），其定義為“Thecollectivegenomesofsoilmicroflora”。該學(xué)科可追溯到第1次提出環(huán)境基因組學(xué)的概念，在對(duì)太平洋浮游生物進(jìn)行系統(tǒng)分類(lèi)時(shí)構(gòu)建了第1個(gè)噬菌體文庫(kù)，并發(fā)現(xiàn)了15種全新的細(xì)菌序列。宏基因組學(xué)概念是“土壤中所有微生物基因組的總和”命名為土壤宏基因組，系統(tǒng)給出了宏基因組的概念，提出針對(duì)特定環(huán)境樣品中遺傳物質(zhì)總和進(jìn)行非培養(yǎng)研究。對(duì)宏基因組進(jìn)一步概括為“應(yīng)用現(xiàn)代的分子生物學(xué)技術(shù)直接從環(huán)境中獲取的目的微生物群落基因組，叫宏基因組”。通過(guò)對(duì)樣本進(jìn)行宏病毒組測(cè)序，我們可以了解單個(gè)樣本里百度的相對(duì)含量是多少，優(yōu)勢(shì)物種是什么。

狀病毒的發(fā)現(xiàn)，病原宏基因組測(cè)序功不可沒(méi)。對(duì)一種新病毒進(jìn)行鑒定和檢測(cè)，其中非常關(guān)鍵的步驟就是獲得病毒的全基因組信息。在此次病情監(jiān)測(cè)和防控中，病原宏基因組測(cè)序發(fā)揮了至關(guān)重要的作用，利用其技術(shù)優(yōu)勢(shì)，研究人員在五天內(nèi)就鑒定并分析出冠狀病毒的基因組，而2003年SARS的鑒定耗時(shí)5月余、2013年H7N9的鑒定耗時(shí)1月余。冠狀病毒2019-nCoV為線(xiàn)性單鏈RNA（ssRNA）病毒，基因組全長(zhǎng)包含29903個(gè)核苷酸，10個(gè)基因。病毒基因組序列為進(jìn)一步分析其傳染機(jī)理，傳播途徑，藥物靶點(diǎn)等提供了有利的支持。對(duì)樣本進(jìn)行宏病毒組測(cè)序于臨床，能輔助臨床醫(yī)生進(jìn)行微生物侵染類(lèi)疾病診斷并在一定程度提供用藥指導(dǎo)。深圳口腔微生物分析排行

探普生物的病毒測(cè)序結(jié)果質(zhì)量有保障外。江蘇宏病毒組測(cè)序方法

宏基因組測(cè)序相關(guān)知識(shí)：宏基因組測(cè)序是對(duì)人體樣本或特定環(huán)境樣品中的總核酸（DNA或RNA）進(jìn)行高通量測(cè)序，通過(guò)比對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)，得到傳染病原體的信息，能夠檢測(cè)出新發(fā)和罕見(jiàn)病原體，特別是在未知病原檢測(cè)中發(fā)揮了難以替代的作用，當(dāng)然宏基因組檢測(cè)方法也面臨不少挑戰(zhàn)，檢測(cè)結(jié)果的靈敏度受宿主及其他微生物背景核酸的影響。高通量測(cè)序技術(shù)能夠提供準(zhǔn)確而科學(xué)的基因測(cè)序分析結(jié)果，為病情防控提供有力技術(shù)保障。科學(xué)家通過(guò)對(duì)病毒進(jìn)行全基因組測(cè)序，可以了解病毒不同傳播階段的變異情況，推測(cè)病毒對(duì)人的傳染力的變化及傳播情況。江蘇宏病毒組測(cè)序方法

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