河南病原微生物多樣性測序分析診斷

宏基因組測序技術(shù)注意事項：傳統(tǒng)微生物檢測由于時間長、陽性率低、檢測目標(biāo)單一，限制了傳染疾病的診治。宏基因組測序技術(shù)不依賴于微生物的分離培養(yǎng)，克服了傳統(tǒng)的純培養(yǎng)方法的技術(shù)限制，為研究和開發(fā)利用占微生物種類99%以上的未可培養(yǎng)的微生物提供了一種新的途徑和良好的策略。宏基因組測序以無需純化培養(yǎng)、能夠快速全方面的展示序列信息的優(yōu)勢，逐步在臨床上得到了普遍應(yīng)用。病原宏基因組測序檢測出病原體并報告相應(yīng)被檢測出的序列數(shù)，再依據(jù)大數(shù)據(jù)庫判定是否為致病病原體。然而不同的測序平臺采用不同的數(shù)據(jù)庫，再由不同的研發(fā)、臨床和檢驗**解讀，缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果也會出現(xiàn)差異。因此仍需將病原宏基因組測序檢測數(shù)據(jù)和臨床更好的結(jié)合，從而更準(zhǔn)確鑒定致病病原體。快速檢測方法是指從樣品制備到出具檢測結(jié)果的整個檢測過程中能夠在短時間內(nèi)完成的檢測方法。河南病原微生物多樣性測序分析診斷

上海探普生物對樣本進(jìn)行宏病毒組測序?qū)嶒灮诙鷾y序技術(shù)。經(jīng)過核酸純化-文庫構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這3大基本流程后，樣本轉(zhuǎn)換成了序列數(shù)據(jù)。先，在核酸純化環(huán)節(jié)，探普提供專門針對病毒的核酸純化樣本指南，以提高純度和得率，與此同時探普生物也提供核酸純化服務(wù)。第二，文庫構(gòu)建環(huán)節(jié)。樣本的核酸具備濃度低，總量少的特點。探普生物專門針對這一點開發(fā)了超微量核酸文庫構(gòu)建，可以將0.01ng/μl甚至更低濃度的核酸構(gòu)建成測序文庫。第三，生物信息學(xué)分析環(huán)節(jié)。寄生性質(zhì)的生物下機(jī)數(shù)據(jù)一般都伴隨大量的宿主和其他微生物的數(shù)據(jù)。探普生物基于該特點，優(yōu)化了自有數(shù)據(jù)庫，搭載了的生物信息學(xué)分析流程，可處理復(fù)雜背景下的目標(biāo)物種序列。河南病原微生物多樣性測序分析診斷對人和動物具有致病性的微生物稱為病原微生物，又稱病原體。

傳統(tǒng)上人類血液被認(rèn)為是無菌的，微生物血漿細(xì)胞游離DNA（mcfDNA）可能有兩種來源，包括微生物（細(xì)菌，病毒或噬菌體）的易位，這是指屬于人類微生物組的微生物細(xì)胞或其組成部分通過與外部環(huán)境連通的上皮粘膜進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)。另外，當(dāng)組織粘膜被局部傳染（例如口腔，肺和皮膚傳染）或物理損傷（例如侵入性的手術(shù)或意外傷害）破壞時，侵入性的病原體可能會偶然進(jìn)入血液，在嚴(yán)重的情況下引起菌血癥或病毒血癥。一旦進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，微生物核酸就會通過循環(huán)核酸外切酶被降解，然后形成小的DNA的片段，即微生物血漿細(xì)胞游離DNA（mcfDNA）。mcfDNA是一種新興的傳染性疾病診斷生物標(biāo)志物。盡管絕大多數(shù)cfDNA來自于患者自身的細(xì)胞，但在急性傳染期間可從血漿中檢測到微生物病原體的微量物質(zhì)。

病毒宏基因組測序：宏基因組測序?qū)Νh(huán)境樣本所有微生物基因組DNA進(jìn)行提取和高通量測序，分析樣本環(huán)境中所有微生物基因組信息。宏基因組測序解讀微生物群體的多樣性與豐度信息，分析微生物群體基因組及功能，也探求微生物與環(huán)境、微生物與宿主之間的關(guān)系，發(fā)掘和研究新的功能基因。生物信息分析內(nèi)容1.測序質(zhì)量分析與統(tǒng)計、評估；2.數(shù)據(jù)庫比對；3.物種豐度分析；4.功能基因注釋；5.基因功能豐度差異分析；6.Pathway富集分析；7.豐度差異基因/物種聚類分析；8.PCA分析。所謂宏基因組學(xué)就是一種以環(huán)境樣品中的微生物群體基因組為研究對象。

在探普生物進(jìn)行宏病毒基因組測序的流程非常簡單，簡而言之，客戶只需要說清楚樣品情況，準(zhǔn)備樣品即可，其他事宜都由探普來進(jìn)行安排。大致流程如下：1)與銷售人員溝通項目需求和樣本情況；2)探普生物工作人員擬定項目合同，雙方協(xié)商合同內(nèi)容后簽字蓋章；3)按樣本準(zhǔn)備指南準(zhǔn)備好樣本，填寫信息單后通知銷售人員預(yù)訂干冰，安排樣本寄運輸；4)客戶支付項目啟動款，探普生物啟動項目實驗和分析并提供測序報告；5)客戶支付項目尾款，探普生物提交測序數(shù)據(jù)和分析結(jié)果；6)售后問題處理，項目結(jié)題。對病毒全基因組進(jìn)行測序，利用生物信息分析手段,得到病毒的全基因組序列。北京宏病毒學(xué)測序分析服務(wù)

病原微生物二代測序也稱宏基因組測序（mNGS）是目前臨床上針對病原常用的基因測序方法。河南病原微生物多樣性測序分析診斷

隨著測序技術(shù)的發(fā)展，對微生物群（微生物組）的研究逐漸加深，研究熱點越來越多集中于環(huán)境和生物體相互作用的微生物群。加之測序成本降低，分析技術(shù)不斷提升，都使得宏基因組測序技術(shù)得到普遍應(yīng)用。為什么要做宏基因組：宏基因組相對16S來說其物種分辨率會更高，隨著物種測序完成越來越多，數(shù)據(jù)庫更加完善，在腸道菌群方面基本能實現(xiàn)97%以上的菌都能鑒定到種，90%以上到菌株層面。而且可以同時獲得除RNA病毒外的所有物種的分布。此外包括菌基因組CNV等方法的出現(xiàn)，可以直接通過大規(guī)模宏基因組測序不只找到可能的菌，進(jìn)一步還能鑒定出特定候選基因區(qū)段。河南病原微生物多樣性測序分析診斷