廣東病毒二代測序分析診斷

來源: 發(fā)布時間:2023-10-23

病毒全基因組測序定中利用病毒傳播過程中核酸序列上特定位置的變化來進(jìn)行分型,著重于區(qū)分不同型別病毒的來源,是我國調(diào)整防控策略的重要依據(jù)之一。傳統(tǒng)的病原微生物檢測手段包括形態(tài)學(xué)檢測、培養(yǎng)分離、生化檢測和免疫學(xué)檢測。這些方法檢測周期長、靈敏度低,對操作人員的技術(shù)水平要求比較高等因素;熒光定量PCR技術(shù)和等溫擴(kuò)增技術(shù)等分子生物學(xué)的檢測方法部分解決了上述問題,簡單快速,通過對核酸特異性序列的檢測,可在短時間內(nèi)快速判斷病原體的種類,但是這些方法無法進(jìn)行混合傳染鑒定和病毒溯源,隨著基因組學(xué)技術(shù)的發(fā)展,高通量測序技術(shù)已經(jīng)能夠做到不依賴于傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng),可直接對臨床樣本中的核酸進(jìn)行高通量測序,然后與數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對,實現(xiàn)傳染性疾病的溯源、檢測、分型和耐藥評估等多個方面,受到越來越多臨床和科研工作者的關(guān)注。病毒全基因組測序具有的特點:獨有的一定定量技術(shù),實現(xiàn)病原定量分析。廣東病毒二代測序分析診斷

目前對我國首例輸入性裂谷熱病例病毒進(jìn)行全基因組測定,分析其進(jìn)化來源及潛在變異.方法提取樣本核酸,非特異性反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增病毒基因組RNA,使用IonTorrent二代測序儀進(jìn)行病毒全基因組測定.對獲得的基因組數(shù)據(jù)進(jìn)行序列拼接、比對、進(jìn)化樹構(gòu)建和關(guān)鍵位點分析.結(jié)果通過測定獲得了病毒全基因組11979nt,該測定病毒屬E基因分支,序列與先前南非分離株Kakamas相似度較高(>98%).病毒Gn蛋白C端信號肽區(qū)存在1個氨基酸突變.結(jié)論本研究分析測定的裂谷熱病毒全基因組與目前非洲流行株高度相似,病毒基因特征未出現(xiàn)明顯變異。


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深度測序技術(shù)對社會的影響:深度測序技術(shù)促進(jìn)了基因檢測的普及,對社會的影響第1個方面反映在商業(yè)模式的變化,即醫(yī)學(xué)檢驗和健康管理方面的平民化、個性化趨勢的形成。社會生活受到深度測序技術(shù)影響的第二個方面是基因測序的普遍應(yīng)用。例如,基因關(guān)聯(lián)將人與人通過遺傳學(xué)關(guān)聯(lián)起來,人們可以對基因進(jìn)行分析判定親緣關(guān)系,基因測定甚至可以幫助判定婚姻(包括遺傳病等方面的)匹配度。公安機(jī)關(guān)可以通過基因比對,鎖定犯罪嫌疑人、尋找丟散的兒童和親人。甚至有報道表明,測定20多個基因就可以將人臉重構(gòu)?;驒z測的應(yīng)用將隨著基因-表型的關(guān)聯(lián)得到更普遍的應(yīng)用,對社會生活的方方面面起到重要作用。


病毒全基因組測序具有的特點:1.不預(yù)設(shè)目標(biāo)檢出物,樣本的所有病原信息一網(wǎng)打盡;2.無需培養(yǎng)和特異性擴(kuò)增,對采集臨床樣本直接檢測;3.獨有的一定定量技術(shù),實現(xiàn)病原定量分析,使病原診斷更準(zhǔn)確;4.與臨床各領(lǐng)域有名**共同打造呼吸道系統(tǒng)、神經(jīng)內(nèi)科系統(tǒng)和血流系統(tǒng)傳染病原數(shù)據(jù)庫,更加貼合需求;5.采用高通量測序儀,全流程質(zhì)控,結(jié)果穩(wěn)定可靠;6.整體檢出率陽性率較傳統(tǒng)方法提升25~30%:肺泡灌洗液檢出率60~80%,腦脊液檢出率40~60%,血液檢出率40~60%;7.專業(yè)化服務(wù):臨床微生物**出具報告,專業(yè)醫(yī)學(xué)團(tuán)隊報告解讀。針對疑難報告,由**進(jìn)行深度解析;8.完善的售后服務(wù):基于PCR技術(shù)和抗原抗體技術(shù)的售后驗證平臺,致力于解決臨床的每一個疑問。


高通量測序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標(biāo)準(zhǔn)濃度和體積后進(jìn)行測序和分析。

對病毒的全基因組進(jìn)行測序:對病毒的全基因組進(jìn)行測序主要是通過非特異性擴(kuò)增+克隆結(jié)合sanger測序來完成的。當(dāng)物種有了參考的序列之后,可以通過特異性擴(kuò)增+sanger測序獲得全基因組序列。Sanger測序準(zhǔn)確度高,讀長很長,但與此同時,擴(kuò)增和克隆工作費時費力,由于流程繁瑣,加上快速變異導(dǎo)致引物無法通用,該方法對于大量基因組的測序工作而言,可操作性不強(qiáng),這對于研究者一直是一個困擾。高通量測序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標(biāo)準(zhǔn)濃度和體積后進(jìn)行測序和分析,減少了工作量,增加了成功率。探普生物進(jìn)行了大量有針對性的研發(fā)和測試,開發(fā)了全套的實驗和分析流程用于對病毒的全基因組進(jìn)行測序,該流程自運行以來廣受研究者們好評。


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對病毒全基因組進(jìn)行測序,是利用生物信息分析手段,得到病毒的全基因組序列。廣東病毒二代測序分析診斷

未培養(yǎng)病毒基因組的信息標(biāo)準(zhǔn):①關(guān)于未培養(yǎng)病毒基因組標(biāo)準(zhǔn)的信息是在基因組標(biāo)準(zhǔn)框架內(nèi)制定的,包括病毒起源、基因組質(zhì)量、基因組注釋、分類信息、生物地理分布和宿主預(yù)測;②UViGs有助于提高我們對病毒進(jìn)化歷史和病毒-宿主之間相互作用的理解;③病毒基因組組成和內(nèi)容、復(fù)制策略和宿主的異常多樣性意味著UViGs的完整性、質(zhì)量、分類學(xué)和生態(tài)學(xué)需要通過病毒特異性指標(biāo)來評估;④分析不同大小和不同樣品類型的UViGs對于探索病毒基因組序列空白是有價值的。




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