病原宏基因組測序(mNGS)可與實時熒光定量PCR(RT-PCR)技術(shù)聯(lián)合使用,實現(xiàn)優(yōu)勢互補?!癛T-PCR由于其檢測速度快、操作流程簡單、成本較低的原因,更適用于大規(guī)模的篩查中,以便快速獲得是否為核酸陽性的初步證據(jù),而對于RT-PCR檢測陰性、但臨床表型高度疑似的患者,利用mNGS進一步確認可有效提高檢測結(jié)果的可靠性,并獲得是否有其他病原體傳染的信息?!睂τ赗T-PCR檢測陽性的樣本,也可以進一步利用mNGS進行病毒全序列的分析,從而幫助獲得病毒是否發(fā)生變異的信息,為疫苗、藥物研發(fā)等方面提供可靠證據(jù)。每種病毒都有相應(yīng)的病毒試劑和測定方法。四川宏病毒組測序分析
病毒宏基因組學(Viralmetagenomics)是宏基因組學的一個分支,指研究特定環(huán)境中的病毒群落的一門技術(shù)。近年來隨著新測序技術(shù)的不斷發(fā)展,尤其是第二代、第三代測序儀的出現(xiàn),使病毒宏基因組學發(fā)展尤為迅速。對海洋中病毒群體進行了研究,闡明海水中病毒群體以噬菌體為主,并且是應(yīng)用宏基因組學分析人糞便中不能培養(yǎng)的病毒群落,標志病毒宏基因組學的開端。病毒宏基因組學這一概念,其描述的是環(huán)境中的病毒群落―噬菌體。再次提到病毒宏基因組學這一概念,并對宏基因組學挖掘新病毒的方法進行了闡述,側(cè)重于人和動物機體中的真核病毒群落。安徽口腔微生物測序服務(wù)有很多微生物通過傳統(tǒng)技術(shù)是無法鑒別的。
優(yōu)化臨床制備病毒宏基因組測序樣本的方法:①介紹高通量病毒宏基因組測序的樣本制備步驟,對臨床樣本的總核酸進行隨機擴增;②檢測了從血漿樣本中富集/擴增DNA及RNA病毒的不同方法,一種包括過濾、核酸酶消化、在不同反應(yīng)中隨機擴增DNA及RNA的步驟是較好的;③隨后在包含了不同病毒科的樣本中驗證此方法,可高讀數(shù)地檢測到大多數(shù)病毒序列,且優(yōu)于現(xiàn)行的其它樣本制備方法;④該方法不僅適用于血漿樣本,還可用于尿液、咽喉拭子等臨床樣本。
宏基因組測序的挑戰(zhàn):背景干擾:病原樣本深藏在大量宿主和其它微生物之內(nèi),臨床病原常為起始量低,背景噪音大的復(fù)雜樣本,大量宿主信號掩蓋了微量病原信號,致使敏感性偏低,難以有效區(qū)分。另外,因為RNA病毒需先轉(zhuǎn)化為互補DNA(cDNA)再進行測序,因此病原宏基因組測序技術(shù)對RNA病原體檢出率比DNA病毒更低??梢钥紤]對核酸樣本進行特殊的處理,對病毒序列進行特異性富集,再進行建庫測序。質(zhì)量控制:病原宏基因組測序技術(shù)涉及一系列繁瑣的實驗操作過程,例如文庫構(gòu)建涉及到基因組打斷,測序接頭鏈接,全基因組擴增等多個步驟,每一步驟的目標是要每個分子都以相同的效率執(zhí)行每個步驟,打斷有損失,連接有差別,擴增有偏好,都會帶來檢測誤差。高通量測序技術(shù)對核酸進行測序是非特異的,因此,對一無所知的核酸也可以實現(xiàn)鑒別。
人類想要征服新發(fā)人畜共患病,只有提前發(fā)掘潛在的新的致病的病原,并針對新病原進行基因組分析、流行病學調(diào)查、疫苗和抗體的開發(fā)等方面的研究。病毒宏基因組學是在宏基因組學基礎(chǔ)上發(fā)展起來研究特定環(huán)境中病毒的新興技術(shù),該技術(shù)結(jié)合深度測序技術(shù)(第二代、第三代測序技術(shù))已經(jīng)在人類、動物、特定環(huán)境中挖掘出大量的新病毒,該技術(shù)不依賴于病毒培養(yǎng)及病毒序列,在國內(nèi)外被普遍應(yīng)用于新發(fā)人畜共患病病原的挖掘與臨床診斷??傊?,隨著病毒宏基因組學與各種新的分子生物學技術(shù)及深度測序技術(shù)的結(jié)合,該技術(shù)展現(xiàn)了區(qū)別于傳統(tǒng)病毒診斷技術(shù)的優(yōu)勢,而該技術(shù)對動物病毒的挖掘及其他領(lǐng)域的應(yīng)用將更加普遍。病毒全基因組測序產(chǎn)品特點:獨特的定量技術(shù),實現(xiàn)病原定量分析,使病原診斷更準確。北京宏基因?qū)W測序分析方法
DNA病毒基因組測序:獲得一種指定DNA病毒盡量完整的序列。四川宏病毒組測序分析
上海探普生物科技有限公司對樣本進行宏病毒組測序有什么優(yōu)勢?全國開設(shè)病毒宏基因組測序的公司不超過3家,只有探普生物是專門為病毒研究者服務(wù)的,探普生物的研發(fā)團隊和實驗團隊都來自全國各地病毒學、微生物學專業(yè)的高校,碩士及以上學歷成員超過60%,團隊具備普通測序?qū)嶒灪头治龌A(chǔ)之外,同時具備病毒學及微生物學的學術(shù)背景,相當了解病毒相關(guān)樣本情況、研究方向等。研究者在項目咨詢的時候就可以明顯感覺到探普生物的專業(yè)性,溝通順暢,省時省力。四川宏病毒組測序分析